（自动化细胞计数仪）

直接统计细胞数量，判断增殖大致趋势，适合新手入门。核心是通过工具计数，细胞数量越多，增殖能力越强。

（CCK-8法）

通过检测细胞代谢活力间接判断增殖，细胞越旺盛，线粒体酶活性或ATP含量越高，应用最广泛。

1. MTT法（经典高性价比）

黄色MTT被活细胞线粒体脱氢酶还原为紫色甲臜，酶标仪检测吸光度，吸光度越高增殖越强。

优点：试剂便宜、操作简；缺点：需DMSO溶解结晶，试剂对细胞有损伤，正逐渐被替代。

2. CCK-8法（MTT升级版，首选）

用WST-8替代MTT，产物水溶性，无需溶解步骤，三步即可完成，兼容96孔板，适合高通量检测。

优点：操作简便、毒性小、灵敏度高、重复性好；缺点：试剂成本略高于MTT。

小技巧：药物筛选设3复孔，边缘孔填PBS防蒸发，孵育1-4小时检测450nm OD值即可。

3. ATP含量检测法（高灵敏度）

ATP浓度与活细胞数量正相关，荧光素酶催化反应产生光信号，发光越强增殖越旺盛。

优点：灵敏度极高，适合微量样本和高通量筛选；缺点：成本最高，可能因药物影响线粒体出现假阳性，需验证。

1. 3H-胸苷掺入法（经典渐淘汰）

放射性胸苷掺入DNA，检测放射性强度反映增殖。优点是可靠，缺点是有放射性、操作复杂、危害环境，已逐渐淘汰。

2. BrdU/EdU法（非放射性主流）

人工合成胸腺嘧啶类似物，DNA复制时掺入链中，是非放射性替代方案，也是目前最常用的DNA合成检测方法。