干货 | 限制性内切酶知多少？

何谓限制性内切酶？

限制性内切酶是一种能够识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并在特定位置切割DNA链中的磷酸二酯键的一类酶，简称限制酶。

不同的限制性内切酶会识别不同的DNA序列，它可以在识别序列内或距识别序列不远的位置处切割DNA，酶切之后会形成不同类型的产物，如下图中的BamHI形成5’粘性末端产物，KpnI形成3’粘性末端产物，EcoRV形成平末端产物。

▲ BamHI、KpnI、EcoRV酶切示意图

众所周知，限制性内切酶最常用于分子克隆实验中。但除了克隆，它还可以应用于疫苗研发生产、基因测序、SNP鉴定、ddPCR等领域。

限制性内切酶的命名规则

限制性内切酶的命名主要是根据细菌的属名、种名、菌株或血清型、发现的顺序而定，以BstEII为例，命名规则如下表所示：

表1：限制性内切酶的命名规则

限制性内切酶的分类

根据结构的复杂程度、作用方式与辅因子的区别，限制性内切酶可分为四大类，以下内容总结了各类的特点和典型酶种：

Type Ⅰ

• 特点：

1.同时具有识别切割和修饰活性；
2.能够识别DNA特定序列，切割位点距离识别位点不定，可达数千个碱基之远；
3.作用时需要ATP。

• 典型酶种：EcoB、Ecok等

Type Ⅱ

• 特点：

1.只具有识别切割的作用；
2.识别序列多为短的回文序列（一般为4-8bp），酶切位点通常就是所识别序列，特异性切割；
3.作用时需要Mg²⁺；

4.分子克隆中最常用的一类限制酶。

• 典型酶种：HindII、NotI等

Type Ⅲ

• 特点：

1.同时具有识别切割和修饰活性；
2.切割位点大约距离识别位点24-26bp；
3.作用时需要ATP。

• 典型酶种：Hinflll等

Type Ⅳ

• 特点：

1.仅切割被甲基化修饰了的DNA序列；
2.切割位点距离识别位点 30 bp左右。

• 典型酶种：MrcA、McrBC等

除了以上分类，根据识别和切割位点的异同可以分为3类，如下表所示：

表2：同裂酶、异列酶和同尾酶对比

内切酶类别	特点	典型酶种
Type I	1、同时具有识别切割和修饰活性； 2、能够识别DNA特定序列，切割位点距离识别位点不定，可达数千个碱基之远； 3、作用时需要ATP。	EcoB、EcoK等
Type II	1、只具有识别切割的作用； 2、识别序列多为短的回文序列（一般为4-8bp），酶切位点通常就是所识别序列，特异性切割； 3、作用时需要Mg²⁺； 4、分子克隆中最常用的一类限制酶。	HindIII，NotI等
Type III	1、同时具有识别切割和修饰活性； 2、切割位点大约距离识别位点24-26bp； 3、作用时需要ATP。	HinfIII等
Type IV	1、仅切割被甲基化修饰了的DNA序列； 2、切割位点大约距离识别位点 30 bp左右。	McrA，McrBC等

翌圣FuniCut™ 快速限制性内切酶

限制性内切酶作为分子实验室最基础的工具酶类，其商业化历史已有几十年，但市场一直被进口品牌T*和N*所垄断，翌圣作为一家国内专注于生命科学工具酶类的高新技术型企业，投入了大量的研发，通过菌株改造，配合优化的工，研发出了FuniCut™快速限制性内切酶。产品特点如下：

• 快速酶切：5-15 min完成酶切，双酶切较常规操作可减少2h以上；

• 通用缓冲液：任意内切酶组合都能用同一缓冲液，多酶切反应更简便；

• 酶切效果：媲美进口品牌N*，且兼容其缓冲液；

• 直接电泳：提供红色Color缓冲液，酶切后的产物可直接点胶电泳，操作更简便；

• 高保真：过夜酶切，星号活性极低。

想要了解更多产品详情？戳链接→《FuniCut™快速限制性内切酶，通用缓冲液，5 min完成精准酶切》。即日起至3月31号，翌圣商城推出FuniCut™快速限制性内切酶新品上市特惠活动，限时低至99元，还有克隆试剂盒相送哦，快来抢购吧~

联系我们