碱性染料（亚甲蓝）：带正电荷，能与细胞内带负电荷的物质（如细胞核中的 DNA、RNA）结合，让细胞核呈现深蓝色或紫蓝色，就像给细胞核 “戴上了深色的帽子”，清晰易辨。
酸性染料（伊红）：带负电荷，可与细胞内带正电荷的物质（如细胞质中的蛋白质）结合，使细胞质呈现淡红色或粉红色，不同细胞的胞质颜色还会略有差异 —— 比如红细胞会被染成鲜艳的粉红色，而淋巴细胞的胞质则偏淡蓝。
溶剂（甲醇）：既是染料的 “搬运工”，能让亚甲蓝和伊红均匀溶解；又是细胞的 “固定剂”，可以快速凝固细胞结构，防止细胞在染色过程中变形，保证观察到的是细胞最真实的形态。
涂片制备：首先取少量待检样本，在干净的载玻片上轻轻推开，制成薄薄的 “涂片”—— 涂片不能太厚（否则细胞重叠，看不清结构），也不能太薄（否则细胞数量太少，影响判断），理想的涂片应该是 “头厚尾薄、中间均匀”，边缘无杂质。
固定涂片：将涂片放在通风处晾干后，滴加少量甲醇（染色液中的溶剂成分），覆盖整个涂片，固定 30 秒 - 1 分钟。这一步的目的是让细胞结构凝固，防止后续染色时细胞破裂或变形。
染色反应：倒掉甲醇后，滴加瑞氏吉姆萨染色液，覆盖涂片，染色 1-2 分钟（具体时间需根据染色液浓度调整），让染料与细胞充分结合。
分色冲洗：染色结束后，缓慢滴加缓冲液（调节 pH 值），与染色液混合，继续作用 3-5 分钟（这个过程叫 “分色”，能让细胞的不同结构着色更清晰）。之后用流水缓慢冲洗涂片，直到涂片表面无多余染料残留，冲洗时水流不能太急（否则会冲掉细胞），也不能用手擦拭（避免破坏涂片）。
干燥观察：将冲洗后的涂片再次晾干，或用吸水纸轻轻吸干水分（注意不能摩擦涂片），然后放在显微镜下观察 —— 在高倍镜下，就能看到被染成 “蓝核红质” 的细胞，检验师会根据细胞的形态、颜色、数量来判断是否正常。
染色液浓度与时间控制：不同品牌的瑞氏吉姆萨染色液浓度可能不同，染色时间需根据说明书调整 —— 染色时间太短，细胞着色浅，看不清结构；时间太长，细胞会被染成 “黑团”，细节模糊。比如血液涂片通常染色 3-5 分钟，而涂片因细胞更密集，可能需要延长到 5-8 分钟。
避免污染：染色液和缓冲液需密封保存，避免灰尘、细菌污染；载玻片必须干净无油污（否则细胞无法均匀附着），使用前需用酒精擦拭干净；操作时不能用手触摸涂片区域，防止指纹或油脂影响染色。
安全防护：染色液中的甲醇具有挥发性和刺激性，长期吸入可能对呼吸道有害；亚甲蓝和伊红若接触皮肤，可能引起轻微过敏。因此，检验师操作时需戴手套、口罩，在通风橱内进行，避免染料接触皮肤或吸入挥发气体。
结果判断需专业：染色后的涂片需要由专业检验师在显微镜下观察判断 —— 比如红细胞是否呈粉红色、白细胞的细胞核是否清晰、有无异常细胞或寄生虫（如疟原虫会被染成紫红色，在红细胞内可见），普通人若未经培训，可能无法准确识别细胞结构，容易误判。
血液系统疾病诊断：这是它最主要的应用领域。通过染色后的血液涂片，医生可以观察红细胞的大小、形态（如缺铁性贫血时红细胞会变小、颜色变浅；巨幼细胞性贫血时红细胞变大、细胞核异常），白细胞的分类计数（如判断中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞的比例，排查感染、白血病等疾病），以及血小板的数量和形态（如血小板减少性紫癜时血小板数量明显减少）。
传染病诊断：在寄生虫和细菌感染诊断中，它也发挥着重要作用。比如诊断疟疾时，染色后的涂片能清晰看到红细胞内的疟原虫（呈紫红色，有环状、滋养体、裂殖体等不同形态）；诊断立克次体感染（如斑疹伤寒）时，能观察到细胞内的立克次体被染成深蓝色；此外，它还能用于区分细菌的形态（如革兰氏染色前的初步筛查）。
体液与脱落细胞检查：对于胸水、腹水、脑脊液等体液样本，染色后可以观察其中是否有异常细胞（如癌细胞、炎性细胞）；在病理检查中，也可用于宫颈脱落细胞、痰脱落细胞的染色，辅助排查宫颈癌、肺癌等疾病。
科研领域：在细胞生物学、免疫学等科研中，它常被用于观察细胞培养物的形态变化（如细胞凋亡、细胞分化），或研究病原体与细胞的相互作用（如病毒感染细胞后的结构改变）。
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