从方法学到可靠数据：dragonfly discovery如何为TranscreenerADP2检测实现精准赋能

图1. dragonfly discovery是一款基于固相置换原理的非接触式微量分液器

其最多配备10个通道，每个通道既可完全独立运行，又可同步操作，从而实现快速且高度灵活的非接触式分液。这种设计不仅支持在高密度1536孔板中进行复杂的试剂梯度组合以完成方法学开发和验证，也能进行常规试剂的高通量和快速分装。

SPT Labtech 开发的dragonfly discovery分液系统能够在200 nL至4 mL的超宽量程范围内，实现高度精准且可重复的非接触式分液，即便处理高粘度试剂依然表现出色，适用于各类SBS标准微孔板（包括384孔和1536孔板）。其基于固相置换技术的零校准、低维护设计，可快速完成仪器配置与实验流程（protocol）设定，尤其适用于微缩化高通量筛选（HTS）。该系统不仅有助于节约珍贵试剂与耗材，还能有效提升检测体系的稳定性和数据可靠性。

图2. Transcreener ADP² Assay是一种基于远红光的竞争性检测方法，通过定量ADP生成量来测定酶活性

该技术采用简洁高效的实验原理，并使用了一种特异性识别ADP而非ATP的抗体及远红光荧光示踪剂。反应中生成的ADP与荧光示踪剂竞争结合抗体，通过改变荧光特性输出可读信号。

Transcreener检测技术基于高度特异性抗体，在均相反应体系中直接识别与定量核苷酸，并通过远红外荧光输出检测信号。Transcreener检测专为高通量筛选设计，采用单次加样、混匀即读的实验模式，具备优异的试剂稳定性，且兼容各类主流多功能酶标仪品牌。该检测平台提供荧光偏振（FP）、荧光强度（FI）及时间分辨荧光能量共振转移（TR-FRET）三种检测模式。相较于依赖间接测量或多步操作的ADP检测方法，Transcreener流程更简化，具备更高的灵敏度与信噪比。其“加样混匀即读”的实验模式，结合试剂稳定的性能表现，使其尤其适用于自动化工作流程的整合与应用。

A. 在含有8 μM ATP的酶活检测缓冲液A（50 mM HEPES pH 7.5、10 mM MgCl₂、50 mM KCl、5 mM DTT、0.01% Triton）中，分别通过手动移液和dragonfly discovery平台对VPS4B蛋白进行梯度稀释，并在37℃条件下孵育2小时。B. 将酶活性转换为ADP生成量后拟合成标准曲线，证实手动移液与dragonfly discovery分液所测得的酶活反应速率具有良好的一致性。

在12个数据点上，分别用384孔板（A）与1536孔板（B）测定了Z'因子。上半部分图表展示手动移液操作的Z’因子值；下半部分图表则为通过 dragonfly discovery 分液所得的Z’因子值。

采用Transcreener ADP² FP检测法对Tocris 2.0化合物库中的1280个化合物进行筛选，共鉴定出13个偏振值高于3倍标准差的潜在抑制剂；其中12个化合物对检测体系无干扰效应。

A. 从初筛中获得的阳性化合物ESI-09及对照化合物Suramin的剂量反应曲线，实验在384孔板中进行。其中，对照化合物Suramin的IC₅₀值在手动移液和 dragonfly discovery 平台上分别是B. 2.3 μM和C. 2.9 μM。

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