凝胶成像仪选择技巧,新手必备!
市场上的凝胶成像仪种类繁多,品牌型号各异,质量参差不齐,价格也各不相同。 如何选择适合自己的凝胶成像仪尤为重要。 以下是选择凝胶成像仪的技巧。 新手必备!
1、看参数
当然,如果你有DEMO机,可以忽略这个。
我们在比较不同厂家的参数时,一定要注意只比较关键的参数,对于那些无关紧要的参数我们可以视而不见。
对于扫描成像来说,灵敏度一般不是问题。 我们应该关注的是分辨率。 当然,分辨率只要满足我们的要求即可。 对于小型凝胶、膜和微孔板,一般分辨率约为 25um。 那应该足够了。 满足分辨率后,一个重要参数摆在我们面前,那就是动态范围。 简单来说,动态范围决定了你能否在一张胶片上同时看到强信号和弱信号,并且它们保持着比较好的定量关系。 通常,动态范围用数量级来表示。 数字越大,动态范围越宽。
对于激光扫描成像系统,情况更为复杂。 从激光器和滤光片到分束器和探测器,有很多东西需要考虑和比较。
下面主要介绍实验室常用的冷凝成像仪的参数选择。 根据原则1,如果你主要用它来拍摄普通的核酸凝胶或蛋白质凝胶,那么市面上几乎所有的成像仪都可以很好地满足你的需求。 这时,除了价格这个决定性因素之外,唯一可以比较的就是“操作是否简便、外观是否时尚”等一些不相关的指标。 真正需要考察的可能是要做化学发光的用户。 它们对灵敏度要求很高,动态范围也比较宽。
要捕捉微弱的化学发光需要良好的 CCD 相机和镜头。 一般来说,CCD相机的冷却温度与背景噪声密切相关。 温度越低,噪音越低。 因此,-25℃的冷却温度是对相机的基本要求(低温下降噪效果不明显,量子效率会受到很大影响); 此外,更大的像素可以提供高的光捕获效率; 所以对于相同尺寸的CCD芯片,需要注意像素大小。 镜头的参数很简单。 由于我们只需要近距离观察样品,一般可以调整样品的位置(有的厂家甚至提供电动样品升降平台),所以基本上不需要选择长镜头或变焦镜头; 然而,由于我们需要检测微弱的化学发光,因此透镜的光圈非常重要。 一般情况下,F值越小,透光率越大,存在平方反比关系。 因此,我们一般需要尽可能选择光圈F值Z小的镜头。 另外,如果镜头是电动的,我们就可以省去打开机壳,反复手动调整光圈和焦距的麻烦。
我们需要考虑的其他组件包括光源、滤光片和暗箱。 光源的类型和发光的均匀性、滤光片的数量以及暗箱的遮光效果都在我们考虑的范围之内。 当然,一般来说如果成像仪的CCD和镜头配置都不错的话,这些部件一般不会太差。
2.看你自己的使用情况
市场上的成像仪种类繁多,各种品牌、型号,但根据成像原理可分为两大类,即照片成像和扫描成像。
简单来说,照相成像就是样品与相机的相对位置不动,可以进行单次成像或多次成像;
扫描成像是利用相机对样品进行部分成像,然后通过样品或相机的移动对整个样品进行成像。
目前,CCD相机主要用于成像。 由于可以设置不同的曝光时间,因此它们通常用于对弱化学发光和生物发光进行成像。
扫描成像因其精度高、重复性好而广泛应用于大样本、多通道成像。 可以说,对于大样本或多通道的应用,如果可以选择扫描成像,尽量不要选择照片成像。
原理明确了,选择就变得简单了。 不同的原理导致不同应用的Z佳选择,所以不要相信“万能王”之类的废话。 没有任何机器能够征服所有应用领域。 下面简单说明一下实验室中一些常见应用的选择依据:
(1)核酸电泳凝胶:
一般这类凝胶采用EB染色、UV激发,凝胶较小。 建议使用通用凝胶成像设备来完成。
(2) 蛋白电泳凝胶:
通常,此类凝胶用凝固剂或银染色,并用白光透射成像。 对于小凝胶,可以选择通用凝胶成像设备。 但对于大型凝胶,尤其是二维电泳凝胶,CCD成像会产生几何畸变,透镜效应也会导致不同区域信号强度的差异。 另外,CCD摄影无法保证不同凝胶的成像参数一致,因此扫描成像是一个不错的选择。
(3) 转印膜:
这个有点复杂。 一般来说,转印膜有比色法、同位素法、化学发光法、荧光法等不同的检测方法。
比色显色是产生彩色条带或斑点,一般使用普通凝胶成像设备。
同位素可以使用胶片曝光,但这既费时又费力,而且容易出现过饱和。
比较常见的方法是富士胶片于1981年开发的荧光屏成像技术。获取信号潜像的荧光屏可以通过激光扫描获得同位素信号。 化学发光是目前蛋白质印迹常用的检测方法。 毫无疑问,冷CCD成像适合这种微弱的光信号。
荧光是所有这些检测方法中Z令人印象深刻和Z有前途的。 这不仅是因为荧光染料的动态范围很宽,还因为它们为我们提供了多种检测途径(同样适用于凝胶)。 当然,您可以使用单荧光检测,在这种情况下,您的凝胶成像设备要求包括新的激光源和相应的滤光片。 如果您是纯粹主义者,或者需要对附近或重叠的目标分子进行成像,那么多通道荧光检测是您的Z佳选择。 这时,扫描成像就是Z好的选择。 这样的选择不仅是因为扫描成像可以带来较高的灵敏度和分辨率,更重要的是不同通道之间不存在几何畸变,拟合良好。
微孔板等特殊需求:对于成像来说,由于几何畸变的问题,微孔板的成像变得更加复杂,一般需要特殊的校正装置来完成。 当然,如果采用扫描成像,一般不需要额外的配件。 现在许多实验室对小动物成像非常感兴趣。 然而,对小动物进行成像并不是一件简单的事情。 一方面,小动物需要麻醉、固定; 另一方面,信号位置也需要进行三维定位。 因此,PET/CT能够同时提供功能、代谢和解剖图像,是此类成像的有力工具。
3. 看看有类似研究的同行
易用性是硬道理。 不管你说什么,让我试试,一切都会清楚的。 现在大多数厂家都提供演示机服务,并且有技术人员现场解答问题。 所以请来一场真正的战斗吧。 谁的性能更好,价格更优惠,我就买。
当然,我们的实际测试结果仅针对我们自己的样品和现场演示机。 我们不能据此对相关品牌、相关车型做出过多的判断。 由于具体应用的限制、操作技术的差异以及仪器状态可能存在的差异,我们可能无法给出公正的评价。 但无论如何,这些信息对于我们买家和用户来说都是非常重要的。
4.检查售后服务
很多用户认为购买了并在实验室使用后,它只是一个仪器。 事实上,这与事实相去甚远。 购买仪器的目的是为了使用,而能否用好不仅取决于我们自己的聪明才智和勤奋,更取决于厂家的技术支持。 因此,购买原装产品已经成为很多用户的共识,因为这样可以享受厂家的现场技术支持和指导。
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