ELISA实验那些你忽略的雷区

酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法。具体的操作步骤大致分为加样本、温育、洗板、加酶标物、温育、洗板、加显色剂、温育、加终止液、比色读数。当然具体的检验步骤还是严格按照试剂说明书来操作。每一个小步骤出了问题都可能影响整个实验的准确性。所以我们应该注意每一个细节。细节决定成败。下面咱们就来细说一下ELISA实验中需要注意的问题。

一、标本

1、避免溶血；

2、尽量新鲜，避免细菌污染（一般5天内测量的血清可在4℃条件下保存，否则低温保存）。

二、试剂

1、使用前平衡至室温；

2、配置洗板液应该使用去离子水或者蒸馏水，保证水的新鲜。

三、设计实验

1、设计好孔位，通常阴阳对照2个孔，空白对照1孔（必要时做好标注，避免错误）。

四、加样

1、样品应全部加于反应孔底部，避免液体悬挂在孔壁上，并注意不可溅出，不可产生气泡；

2、加样量准确；

3、手工操作时加一下样本时要及时更换吸嘴。

五、温育

1、温度、时间要严格控制；

2、**使反应杯尽快升高到所需温度；

3、温育常采用的温度有43℃、37℃、室温等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。

六、洗板

1、使用专用洗涤液，一般洗涤4-6次；

2、若手工洗涤，前两次洗涤都不溢出反应孔，防止污染，后面几次洗涤都应加满反应孔，这样洗涤更干净；

3、每次加洗涤液后应浸泡30秒，再甩去洗液；

4、反应板倒扣吸水纸上拍干。

七、显色与比色

1、空白孔校零，读取各孔OD值；

2、单波长or双波长选择：

a、单波长通常对显色具有Zda吸收的450nm或492nm；

b、双波长则是在敏感波长450nm和非敏感波长630nm下各测一次。使用双波长时不用设置空白孔，否则会造成孔吸光度为负数。

了解并有效地避开以上提到的实验雷区，可以大大提高实验的准确性，相信只要用心思考你就会成为Z专业的检验师，博科酶免为您提供Z周到细致的服务，为了人类的美好明天，我们一直在努力！