厌氧菌的培养方法

        厌氧菌在有氧的情况下不能生长。要培养厌氧菌，必须创造一个无氧的环境。通 常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还 原电势。常用的厌氧培养方法有很多种，如疱肉培养基、厌氧罐法、厌氧袋法、厌氧 手套箱法等。天美今天为大家介绍几种常用的厌氧菌培养方法。 

一、疱肉培养基法 

       疱肉培养基法是Z简单的厌氧培养法之一，无需特殊设备。将疱肉和肉汤装入大 试管，在液面加入凡士林封闭，从而造成无氧环境。在使用前Z 好将装有培养基的试 管沸水浴 10-20min，以使培养基中溶解的氧释放出来。 

二、厌氧罐法 

       厌氧罐法是目前应用较广泛的一种厌氧培养方法，是用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而进行厌氧菌的培养。厌氧罐法又分为以下两种：

1、抽气换气法 

       该法适用于一般实验室，其特点是较经济，可迅速建立厌氧环境。标本接种后， 将平板放入厌氧罐，拧紧盖子，用真空泵抽出罐中空气，使压力真空表至-79.98KPa， 停止抽气，充入高纯氮气使压力真空表指针回 0 位。连续反复 3 次，Z 后在罐内- 79.98KPa 的情况下，充入 70%的 N2、20% H2、10% CO2 (或 20% CO2、80% H2)。 罐中需放入冷催化剂钯粒，可催化罐中残余的 O2 和 H2 化合成水。同时罐中应放有美 蓝指示管，美蓝在有氧的环境下呈蓝色，无氧时为红色。临用前首先将美蓝煮沸使变 成无色，放入罐中先呈浅蓝色，待罐中无氧环境形成，美蓝即可持续无色。 

2、气体发生袋法 

       气体发生袋系由锡箔密封包装，其中含有两种药片，一种为含枸椽酸和重碳酸氢 钠的药片，另一种是含有硼氢化钠的药片。前者遇水放出二氧化碳，后者可释放氢。 使用时在袋的右上角剪一小口，灌进 10ml 蒸馏水，立即放入含有钯粒、指示剂及平板培养基的厌氧罐中，拧紧盖子。经 2-3 分钟后，可感到盖子微热并有少量水蒸气出现。密封后 1 小时左右罐中的 O2 的含量可低于 1%。

三、厌氧袋法 

       厌氧袋法即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。该方法不需要特殊设备，操 作简单，使用方便，不但实验室中可用，而且外出采样，现场接种等也可用。原理与气体发生袋法完全相同，只是采用塑料袋代替了厌氧罐，气袋为一透明而密闭的塑料袋，内装有气体发生管（有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及 5%柠檬酸安瓿）、美兰指示 剂管、钯催化剂管、干燥剂。其操作方法为首先将接种的平板培养基放入袋中，尽量 挤出袋内空气，然后密封袋口。然后先折断气体发生管，20 分钟后再折断美兰指示剂 管，如果指示剂不变蓝色，说明袋内达到厌氧状态，即可放入 37°C 进行培养。

四、厌氧手套箱法 

       厌氧手套箱是一整套系统，是Z佳的厌氧菌培养法，通常用于厌氧细菌的大量培 养研究。厌氧手套箱是一个密闭的大型箱，一般前部是有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作。厌氧手套箱可调节温度，本身是孵育箱 或孵育箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落。使用时应严格遵守 操作规程，保证箱内气体比例合理。 

       美国 COY 厌氧手套箱有多种材质可选，通过钯催化剂催化氢氧反应去除氧气，厌氧箱包括箱体、催化剂、催化风箱、气锁室等，以及多种可选配配件如氢氧分析仪、 内置培养箱、显微镜观察窗、除湿装置、除硫化氢装置等，可提供严格的厌氧培养环境及舒适便利的操作方式，是实验室厌氧菌培养的Z佳选择。

图一 乙烯膜厌氧手套箱

图二 聚碳酸酯厌氧手套箱

图三 铝制厌氧手套箱 

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（来源：天美（ZG）科学仪器有限公司）