人白介素12(IL-12p70)ELISA试剂盒实验使用说明书

    人白介素12(IL-12p70)ELISA试剂盒实验使用说明书

    BS-0062人白介素12(IL-12/P70)ELISA试剂盒

    一、实验原理

    本试剂盒采用‌双抗体夹心酶联免疫吸附法‌（ABC-ELISA）检测人IL-12p70。

    包被抗体‌：抗人IL-12p70单抗预包被于微孔板，捕获样本中的IL-12p70。

    检测系统‌：生物素标记的抗人IL-12p70抗体与捕获的抗原结合，形成“固相抗体-抗原-生物素化抗体”复合物。

    辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素（Streptavidin）与生物素结合，催化底物TMB显色，终止后于450nm测定吸光度（OD值），浓度与OD值成正比。

    二、试剂盒组成（2-8℃保存）

    组分规格与说明

    预包被微孔板96孔，含抗人IL-12p70单抗，避免反复冻融。

    标准品冻干粉，复溶后浓度为4000pg/mL，需梯度稀释（2000、1000、500…0pg/mL）。

    生物素化抗体HRP标记的抗人IL-12p70抗体，使用前2小时内配制。

    链霉亲和素-HRP与生物素化抗体结合，使用前1小时内配制。

    TMB显色液A液（过氧化氢）与B液（TMB），避光保存，37℃平衡30分钟。

    终止液2M溶液，终止显色反应。

    洗涤液20倍浓缩液，用蒸馏水1:20稀释，37℃水浴助溶结晶。

    样本稀释液10倍浓缩液，用蒸馏水1:10稀释。

    三、样本处理

    血清/血浆‌：

    采集后室温静置30分钟或4℃过夜，1000×g离心10分钟，取上清分装保存（-20℃/2-8℃），避免反复冻融。

    避免溶血、高血脂样本，必要时预实验确定稀释倍数。

    细胞上清/组织匀浆‌：离心后取上清，处理方法同血清。

    四、操作步骤

    标准品稀释‌：

    标准品复溶后，用样本稀释液梯度稀释至2000、1000…0pg/mL，每孔100μL，设空白对照。

    加样‌：

    样本孔先加40μL稀释液，再加10μL样本（5倍稀释），37℃孵育30分钟。

    洗涤‌：

    每孔加300μL洗涤液，浸泡1-2分钟，重复4-6次，拍干。

    生物素化抗体孵育‌：

    每孔加100μL，37℃孵育60分钟，洗涤。

    链霉亲和素-HRP孵育‌：

    每孔加100μL，37℃孵育30分钟，洗涤。

    显色与终止‌：

    每孔加90μLTMB，37℃避光孵育15-25分钟，加50μL终止液。

    读数‌：

    450nm测定OD值，空白孔调零，15分钟内完成。

    五、结果计算

    以标准品浓度（pg/mL）为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。

    样本浓度=样本OD值对应标准曲线浓度×稀释倍数。

    六、注意事项

    试剂平衡‌：所有试剂使用前室温平衡30分钟，避免结晶。

    加样精度‌：移液器校准，垂直加样，避免气泡。

    洗涤关键‌：彻底洗涤减少背景，每孔至少300μL洗涤液。

    避光操作‌：TMB显色液及孵育过程需避光。

    质量控制‌：

    灵敏度：检测下限通常<16pg/mL。

    特异性：不与其他细胞因子交叉反应。

    重复性：板内、板间CV<10%。

    七、常见问题

    无信号‌：检查孵育时间、试剂活性、样本稀释倍数。

    高背景‌：增加洗涤次数，避免污染试剂。

    标准曲线异常‌：验证标准品稀释精度，避免反复冻融。

    注意：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师

    人白介素12(IL-12P70)ELISA试剂盒实验使用说明书本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。本生试剂盒