人白介素2(IL-2)ELISA检测试剂盒说明书

人白介素2(IL-2)ELISA检测试剂盒说明书

BS-0055 人白介素2(IL-2)ELISA试剂盒

1. 产品概述

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)，用于体外定量检测人血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中白介素2(IL-2)的浓度。IL-2是一种关键的细胞因子，在免疫调节中发挥重要作用，能促进T细胞、B细胞等免疫细胞的生长和分化，增强机体免疫功能。本产品仅供科研使用，严禁用于临床诊断。

2. 检测原理

双抗体夹心法‌：微孔板预包被抗人IL-2单克隆抗体，样本或标准品中的IL-2与之结合，形成抗体-抗原复合物。随后加入生物素标记的抗IL-2抗体，形成抗体-抗原-生物素标记抗体复合物。加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)，通过TMB底物显色，酶标仪测定吸光度(OD值)，IL-2浓度与OD值呈正相关。

灵敏度与范围‌：灵敏度通常为pg/mL级别(如7.81 pg/mL)，检测范围因产品而异(如31.25 pg/mL–2000 pg/mL或25 pg/mL–800 pg/mL)，具体以实际产品为准。

3. 试剂盒组成

预包被酶标板‌：96孔/48孔，预包被抗IL-2抗体。

标准品‌：冻干粉，需用标准品稀释液复溶，配制梯度浓度。

标准品/样本稀释液‌：用于稀释标准品和样本。

生物素化抗体‌：浓缩液，需用稀释液稀释。

酶结合物(HRP标记)‌：浓缩液，需用稀释液稀释。

显色底物(TMB)‌：避光保存。

终止液‌：终止显色反应。

浓缩洗涤液(20×)‌：需稀释成工作液。

封板膜‌：用于孵育时封闭微孔板。

说明书‌：详细操作流程及注意事项。

注：试剂盒应在2–8℃保存，有效期6个月。避免反复冻融，使用前恢复至室温。

4. 样本处理

血清/血浆‌：采集后立即离心(如3000 rpm，10分钟)，分装冻存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。检测前缓慢融化，离心去除沉淀。

细胞培养上清‌：离心(如1000 rpm，5分钟)去除细胞碎片，直接检测或冻存。

组织匀浆‌：用裂解液制备，离心取上清。

注意事项‌：避免使用溶血、高血脂样本;样本稀释需通过预实验确定倍数，确保OD值在标准曲线范围内。

5. 操作步骤

标准品配制‌：用稀释液复溶标准品，梯度稀释(如8个浓度点)。

加样‌：每孔加入100 μL标准品或样本，37℃孵育90分钟。

洗涤‌：用洗涤液洗板3–5次，拍干。

加生物素化抗体‌：每孔加入100 μL工作液，37℃孵育60分钟。

洗涤‌：同步骤3。

加酶结合物‌：每孔加入100 μL工作液，37℃避光孵育30分钟。

洗涤‌：同步骤3。

显色‌：每孔加入90 μL TMB底物，37℃避光孵育15–30分钟。

终止‌：每孔加入50 μL终止液，颜色由蓝变黄。

检测‌：酶标仪测定450 nm吸光度(OD值)，以630 nm为参考波长。

6. 结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，拟合回归方程(如四参数逻辑曲线)。

根据样本OD值，通过标准曲线计算IL-2浓度。若样本超出检测范围，需稀释后重测。

7. 注意事项

试剂保存‌：未使用试剂按说明书条件储存，避免过期。

操作规范‌：使用一次性吸头和EP管，避免交叉污染;加样时避免气泡，孵育时用封板膜密封。

样本处理‌：避免NaN3干扰;细胞培养上清需离心彻底;组织样本避免引入化学裂解物。

仪器要求‌：酶标仪需预热，滤光片波长匹配(450±2 nm);洗板机浸泡时间建议10–30秒，或手动洗板时翻转微孔板。

安全防护‌：操作血液或体液样本时，穿戴实验服和手套，遵循生物安全条例。

8. 性能指标

灵敏度‌：≤7.81 pg/mL(具体以产品为准)。

重复性‌：板内变异系数(CV)<10%，板间CV<15%。

特异性‌：与类似物无交叉反应。

线性范围‌：样本稀释后与预期浓度相关系数R≥0.990。

9. 常见问题解答

样本稀释‌：高浓度样本需稀释，建议通过预实验确定倍数(如100倍稀释：5 μL样本+495 μL稀释液)。

结果异常‌：若OD值超出范围，检查样本处理、试剂有效期及操作步骤;若颜色异常(如绿色)，终止液与底物未充分混匀。

试剂替换‌：严禁使用其他批号或来源试剂替代。

10. 有效期与储存

有效期‌：6个月(2–8℃避光保存)。

储存条件‌：试剂盒组分按说明书分装存放，避免反复冻融。

注：以上仅供参考，本产品仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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