测序文库“瘦身”记：揭秘片段筛选如何让DNA“排队”上机？

二代测序

在建库实验中，一般是对接头连接产物或者扩增产物进行片段筛选。对接头连接产物进行筛选，可以在扩增前最大限度的去除不合格片段，提高扩增效率；对扩增产物进行筛选，是对最终文库产物进行双选，最大限度的保证文库片段一致性，无论是哪种方式，都能实现文库片段的严格把控。片段筛选的步骤一般包括：

1.磁珠纯化：

收集全部产物，去除反应体系中多余的酶、引物等杂质；

2.双步分选：

第一步去大片段：加入一定比例磁珠，吸附大片段DNA，保留上清中的目标小片段； 

第二步去小片段：加入不同比例磁珠，吸附目标片段，去除过小的杂质（如接头二聚体）；

3.洗脱收集：

将吸附在磁珠上的目标片段洗脱下来，用于下一步实验。

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随着二代测序应用越来越广泛，实验员在进行分选实验操作时的痛点也越来越明显：

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