十味疏风通窍颗粒的化学密码：UPLC-QTof技术揭开六安著名老中医经验方的物质面纱

十味疏风通窍颗粒是六安中医院著名老中医根据多年临床经验总结出来主治急慢性鼻 - 鼻窦炎的院内制剂，该方由黄芪、金银花、白芷、细辛、龙胆草、川芎、苍耳子、甘草、辛夷、薄荷十味中药组成，具有疏风通窍、祛湿止痛、补脾益气、清热排脓、活血疏肝的功效。为研究该方的物质基础，我们采用Waters UPLC QTof结合waters_connect中药数据信息学平台对十味疏风通窍颗粒中的主要化学成分进行定性鉴定，并对化合物进行了药材归属，为后续临床研究和质量控制提供参考。

waters_connect中药数据信息学平台是集数据采集、数据挖掘、数据库匹配和报告生成于一身，包含600多味中药和17,000多种化合物信息，可通过软件自动进行峰提取、数据库匹配、裂解规律分析等数据处理过程，最终给出中药物质基础信息。

图1. 方案流程图。

样品信息

UPLC条件

UPLC系统：

Waters Premier ACQUITY UPLC PDA

色谱柱：

Waters ACQUITY UPLC HSS T3 (100 mm*2.1 mm，1.8 μm，P/N186003539)

进样量：

1 μL

柱温：

40 °C

流动相A：

0.1% 甲酸水溶液

流动相B：

0.1% 甲酸乙腈

质谱条件

MS系统：

Waters Xevo G3 QTof

电离模式：

ESI+/-

毛细管电压：

3.0/2.5 kV（正离子模式/负离子模式）

脱溶剂气温度：

450 ℃

脱溶剂气流量：

800 L/h

源温度：

120 ℃

采集：

MS^E

实验结果

首先基于UNIFI中药数据库和复方药味组成建立十味疏风通窍颗粒专属数据库，共计包括1,211个化合物；然后应用UNIFI软件进行自动筛查、化合物鉴定、碎片离子匹配等工作。最后结合化合物理论精确质量数、二级碎片、保留时间等信息进行确认。十味疏风通窍颗粒的基峰色谱图见图2，色谱峰分布均匀，正、负离子模式响应良好。

图2. 十味疏风通窍颗粒基峰色谱图（上：正离子模式；下：负离子模式）。

利用UNIFI中药数据分析平台，共从十味疏风通窍颗粒中鉴定出160个化合物，其中负离子107个，正离子116个，63个化合物在正负离子均鉴定到。利用全球天然产物分子网络（GNPS）系统对化合物进行分类，在所有鉴定的化合物中包括：45个黄酮类成分，27个皂苷类成分，19个香豆素类成分，13个有机酸类成分，10个有机氧化物，8个呋喃类成分，4个糖类成分，3个木质素类成分，3个生物碱类成分，2个内酯类成分，2个脂肪酸类成分，以及24个其他类成分。

黄酮类化合物鉴定：通过自建数据库筛查，根据该化合物的相对分子质量、分子式，并结合保留时间、紫外吸收等信息实现化合物的鉴定。由该化合物m/z 269.08002 [M+H]+，m/z 291.06003 [M+Na]+，m/z 307.03714 [M+K]+确定分子式为C16H12O4，UNIFI可以根据化合物结构和实测质荷比给出裂解规律，如图3所示，m/z 254.05727为失去一分子甲氧基的碎片，碎片m/z 163.03694和m/z 107.04868分别是苷元裂解所得碎片，根据其特征碎片和黄酮的保留行为确定为芒柄花素。

图3. 芒柄花素质谱图。

皂苷类化合物鉴定：类似地，对于皂苷类化合物，由该化合物m/z 821.39632 [M-H]-，m/z 847.40876 [M+HCOO-]-，确定分子式为C42H62O16，高能量信号找到的碎片m/z 759.40062为失去一分子水和羧基，碎片m/z 645.36553为脱掉一分子葡萄糖醛酸，碎片 m/z 351.05808为侧链的两分子葡萄糖醛酸，而碎片m/z 193.03462为单分子葡萄糖醛酸，其裂解规律见图4，根据其特征碎片确定为甘草酸。

图4. 甘草酸质谱图。

结论