人可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　人可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-0151   人可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒

　　产品规格‌：96T/48T/24T

　　检测范围‌：125-8000 pg/mL‌

　　灵敏度‌：75.01 pg/mL‌

　　用途‌：体外定量检测人血清、血浆中可溶性E选择素(sE-selectin)浓度，其他样本类型需咨询技术支持‌。

　　一、检测原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。预包被抗人E选择素抗体捕获样本中的sE-selectin，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体形成免疫复合物，洗涤后加入显色底物(TMB)‌。酶催化反应后，溶液呈蓝色，加入终止液变黄色，450
nm波长下测定吸光度值，浓度与OD值呈正比‌。

　　二、试剂盒组成及储存

　　组分 规格(96T) 储存条件(开封后)

　　预包被酶标板 8孔×12条 2-8℃, 1个月‌

　　冻干标准品 2支 2-8℃, 复溶当天使用‌

　　浓缩HRP酶结合物(100×) 60μL 2-8℃避光‌

　　标准品&样品稀释液 20mL 2-8℃‌

　　浓缩洗涤液(25×) 30mL 室温‌

　　TMB显色液 10mL 2-8℃避光‌

　　终止液 10mL 2-8℃‌

　　封板膜 5张 室温‌

　　说明‌：未拆封试剂盒2-8℃保存6个月，避免反复冻融‌。

　　三、实验所需自备物品

　　酶标仪(450 nm波长)

　　精密移液器及枪头

　　37℃恒温箱

　　洗板机或手动洗瓶

　　蒸馏水或去离子水‌

　　四、样本准备

　　血清样本‌：全血室温凝固30分钟，1000×g离心10分钟，取上清分装，-20℃保存(避免反复冻融)。

　　血浆样本‌：使用EDTA/肝素抗凝，离心后同上处理，避免溶血或高脂样本。

　　稀释要求‌：若样本浓度超过检测范围，需用标准品稀释液预稀释。

　　五、实验步骤

　　试剂准备‌：

　　实验前30分钟将所有试剂及样本置于室温。

　　浓缩洗涤液用蒸馏水稀释25倍(如30mL浓缩液+720mL水)‌。

　　冻干标准品加1mL标准品稀释液复溶，静置15分钟，混匀后梯度稀释(如6000→3000→1500 pg/mL)。

　　加样与孵育‌：

　　每孔加入100μL标准品/样本，37℃孵育90分钟。

　　洗板3次，拍干。

　　每孔加入100μL酶结合物(用酶结合物稀释液1:100稀释)，37℃孵育30分钟‌。

　　显色与终止‌：

　　洗板5次，拍干。

　　每孔加入90μL TMB显色液，避光室温孵育15分钟。

　　每孔加入50μL终止液，混匀‌。

　　测定‌：30分钟内用酶标仪450 nm测定OD值。

　　六、结果计算

　　以标准品浓度(pg/mL)为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。根据样本OD值代入曲线计算浓度‌。

　　七、注意事项

　　所有试剂使用前平衡至室温，避免结晶。

　　不同批次试剂勿混用，封板膜避免交叉污染。

　　终止液具腐蚀性，操作时佩戴防护装备‌。

　　注：供科研使用，以上资料供参考。

　　人可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒实验使用说明书
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