核酸杂交小帮手-Biodyne尼龙膜的选择及应用

Biodyne A膜是一种不带电的尼龙6,6膜。它具有对生物分子高结合容量，提供高度敏感的核酸的截留。特别适用于化学发光检测系统或者存在本底问题的系统，如核酸印迹，基因探针检测，DNA指纹识别。

Biodyne B膜的多孔表面分布着高密度的四铵基基团，带有正电。Biodyne B膜在核酸检测应用中具有高灵敏，这种膜的结合机制是通过静电相互作用，并且可以在较宽的pH (3-10) 范围内保持核酸的离子结合力，从而能实现快速核酸转移等相关应用。除此之外，这一强的结合力使膜适合于长时间的转移过程，且无核酸从膜上扩散的风险。Biodyne B膜适于高敏感的检测，如核酸印迹、DNA指纹识别和菌落/菌斑转移。

Biodyne Plus膜类似Biodyne B膜，是具有高等电点的带正电荷的尼龙6,6，也含有分布有高密度的四级铵基基团的多孔表面。这种膜具有极高的等电点，在某些非放射性检测实验中拥有比Biodyne A更高的灵敏度，同时相较于Biodyne B膜而言本底更低，适用于核酸印迹和DNA指纹分析。

Biodyne C膜是一种带负电的具有分布有高密度羧基基团的多孔表面的膜。这种膜的结合机制是通过静电相互作用，应用范围包括蛋白固定，ELISA，亲和纯化，反向点杂交。

Immunodyne ABC膜是改性的尼龙膜，这种膜通过专利化学方法进行表面改性，可实现共价结合和稳定的配体固定。膜经过预活化，可与蛋白质和其他生物大分子上的亲核基团形成共价键。在中性pH值下，主要与胺基团发生反应。Immunodyne ABC膜本身具有亲水性，在与低离子强度的水溶液接触时可立即润湿，无需使用表面改性润湿剂，与配体溶液接触前无需预湿。与传统的无孔固相表面相比，这种膜具有更强的蛋白质结合能力。

图1：用甲基化酶稀释液消化人DNA，凝胶的每条泳道内分别加入500至25 ng样品进行电泳，后转移到带正电的尼龙膜上 (Biodyne B) ，根据FBI推荐，将膜与32P标记的D1S7探针进行杂交，24 h的放射显影谱显示，可检测到低至25 ng的总DNA。

图2：Lambda-Hind III片段经凝胶电泳分离后转移到带正电尼龙 (Biodyne B) 膜上，条带完全被剥离后，用探针标记检测，重复4次，信号强度均未见损失。条带由化学发光检测系统检测。1A-4A：探针标记后的印迹；1B-4B：条带被剥离后，探针标记前的印迹。