荧光素酶互补实验(Luciferase Complementation Assay简称LUC,LCI,SLC,SFLC,LCA等)是一种以荧光素为底物来检测荧光素酶活性的植物活体成像实验。实验中,荧光素酶蛋白被切成N端和C端2个功能片段,即NLuc和CLuc。在一个实验体系中,待检测的2个目标蛋白分别与NLuc和CLuc融合,如果2个目标蛋白相互作用,则荧光素酶的NLuc和CLuc在空间上会足够靠近并正确组装,从而发挥荧光素酶活性,氧化底物荧光素产生最强波长在560nm左右的生物荧光。
LUC实验流程如下:
LUC实验目前已成为高校科研植物学热点研究手段,主要用于植物蛋白互作研究。通过观察分析荧光素酶与底物之间的相互作用,研究人员可以发现新的蛋白质相互作用网络。蛋白互作研究可用于植物学多个应用领域:如真菌、细菌等的植物致病机制研究,为植物保护提供有力支持;植物激素、代谢信号通路转导研究,为研究植物的生长、发育和抗寒、抗旱、耐盐等抗逆机制提供有力的研究工具。
中国科学院上海植物生理生态研究所林鸿宣院士研究团队在植物学领域顶级期刊《Molecular Plant》(影响因子26)发表重要研究成果,系统解析了α/β水解酶家族成员STH1基因在水稻盐胁迫应答与生殖发育协同调控中的分子机制。该研究通过正向遗传学方法从非洲稻(Oryza glaberrima)中成功克隆STH1基因,并首次揭示其通过三个独立且协同的分子功能模块(膜脂代谢调控、蛋白稳定性调控、光周期信号整合)实现环境适应与发育进程的动态平衡。研究团队通过荧光素酶报告基因(LUC)实验证实,STH1通过直接激活Hd3a启动子活性正向调控水稻开花进程,而盐胁迫诱导的STH1表达抑制则导致开花延迟,使植株优先将资源分配至胁迫防御系统。
值得注意的是,德国耶拿公司UVP ChemStudio PLUS多功能成像系统凭借其高灵敏度化学发光检测能力,成功实现了烟草叶片中荧光素酶信号的实时动态捕捉,为解析STH1-Hd3a转录调控网络提供了关键实验证据。该研究不仅创制了耐盐性提升67.14%的优异等位变异种质,更为作物抗逆与稳产协同改良提供了理论依据。
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