新芝生物丨SCIENTZ-24和SCIENTZ-1500F在蛋白表达水平检测方面的应用
点击??蓝字关注我们
为了解大鼠肺组织中炎症因子蛋白表达情况，需要将组织内的蛋白尽量释放并收集，使用研磨和超声手段，对肺组织进行匀浆和细胞破碎，最终分离得到溶液中的蛋白进行WB实验，从而了解蛋白表达情况。
实验步骤
取0.2 g大鼠右肺组织样本，切碎，取适量溶解并混匀后的RIPA裂解液，使用前加入酶抑制剂，在每100 mg右肺组织样本内加入 1 mL 的RIPA裂解液，后使用-24将组织充分研磨匀浆，于4℃的条件下裂解 30～60 min，将裂解后的组织置于-1500F超声破碎仪上破碎，用高速离心机10 000 r/min 离心10 min，取上清液。提取总蛋白并利用BCA试剂盒测定总蛋白浓度，于100℃水中煮5 min，使蛋白变性后，置于冰上使其骤冷，提取为实验使用的蛋白样本，置于－20℃冰箱中冷冻保存。使用蒸馏水清洗干净灌胶玻璃板，竖直放置使其自然晾干。分别使用分离胶、5%浓缩胶处理后，将凝胶置于电泳槽进行电泳，电泳结束后将蛋白转移到预先准备的 NC 膜上，制备转膜“三明治”，在电转仪中转膜结束后，摇床洗膜，封闭液封闭1～2 h倒掉封闭液，加入稀释的相应抗体。在摇床上4℃ 过夜，TBS－T洗膜3次，每次10 min，加入二抗。二抗孵育结束后，于摇床上用TBST洗膜5～10 min ×3次。加ECL工作液于印迹膜上30～60 s，吸干发光液，置印迹膜于成像分析仪自动成像，软件ImageJ分析蛋白条带灰度值。
实验结果
各组大鼠肺组织中IL－17、IL－22、IL－10、IL－35蛋白表达情况比较与空白组比较，模型组和假 贴组肺组织中 IL－17、IL－22蛋白相对表达量均明显升高(P均＜0.05)，IL－10、IL－35蛋白相对表 达量均明显降低(P均＜0.05) ; 与模型组和假贴组比较，地塞米松组、发酵组、非发酵组肺组织中IL－17、IL－22蛋白相对表达量均明显降低(P均＜0. 05)，IL－10、IL－35蛋白相对表达量均明显升高( P均＜0.05) ; 地塞米松组、发酵组、非发酵组间各指标比较差异均无统计学意义( P均＞0.05)。
表1 空白组和支气管哮喘各组大鼠肺组织中
IL－17、IL－22、IL－10、IL－35蛋白相对表达量比较(x±s)
? 欢 迎 分 享 到 朋 友 圈 哦 ?
———————————————————————————
（430685）是国内知名的生命科学仪器设备提供商，围绕国家生物制造重大战略，为用户提供从研发到产业化一站式合成生物工艺解决方案。公司拥有多种产品系列，100余款各类仪器，15,000余家终端实验室客户，超过100,000台各类仪器的市场保有量。覆盖全国的销售和服务网络可及时满足客户的需求。
全部评论(0条)
推荐阅读
-
- 新芝生物丨SCIENTZ-24和SCIENTZ-1500F在蛋白表达水平检测方面的应用
- 超详细实验过程干货，赶紧收藏吧！！
-
- 新芝生物丨紫外交联仪在双层膜制备方面的应用（实验过程解析）
- 超详细实验过程干货，赶紧收藏吧！！
-
- 新芝生物丨经典名方研究难题解决方案
- 经典名方研究难题解决方案。
-
- 新芝生物丨SCIENTZ-30F在纳米脂质体冻干工艺上的应用
- 超详细实验过程干货，赶紧收藏吧！！
-
- 新芝生物丨基因导入仪全新版本震撼来袭！
- 电转化法：高重复性、高效率、操作简易、可定量控制。
-
- 新芝生物丨超声技术在脂质体制备中的应用研究
- 乳化、分离、分散、提取及加速化学反应！
-
- 应用分享 | 近红外光谱仪在纺织品成分检测方面的应用
- 如海近红外光谱测量系统，可实现对纺织品的检测。
-
- Resonon | 高光谱成像仪在人体静脉检测方面的应用
- Resonon | 高光谱成像仪在人体静脉检测方面的应用
-
- ASD | ASD LabSpec 4 地物光谱仪在昆虫蛋白方面的应用
- 这项研究通过区分各种昆虫物种的粉末并估计不同掺假程度的混合蛋白粉样品中的掺假百分比，证明了近红外光谱法在识别昆虫蛋白粉掺假方面的适用性。
-
- 新芝生物海外征途丨四月海外展绽放光彩
- 点击??蓝字关注我们01新芝生物·仪器出海宁波新芝生物科技股份有限公司是知名的生命科学仪器提供商，也是国内超声
-
- 新芝生物丨接触式超声在胞内蛋白及核酸提取过程中的应用
- 超详细实验过程干货，赶紧收藏吧！
-
- ASD | 地物光谱仪在快速检测沙丁鱼新鲜度方面的应用
- ASD | 地物光谱仪在快速检测沙丁鱼新鲜度方面的应用
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布，观点仅代表作者本人，不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们立即通知作者，并马上删除。
②凡本网注明"来源：仪器网"的所有作品，版权均属于仪器网，转载时须经本网同意，并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品来源，并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱：hezou_yiqi
南京南大仪器有限公司
沪公网安备 31011502008050号
参与评论
登录后参与评论