-
产品文章
-
凯氏定氮仪测定灭活大肠杆菌粉疫苗中的蛋白质含量
发布:海能未来技术集团股份有限公司浏览次数:6171 前言
致病性大肠杆菌是人和多种动物(猪、鸡等)的致病菌之一。疫苗免疫是控制大肠杆菌病的主要方法。从动物体分离或实验室保存鉴定的大肠杆菌菌株,经扩增培养,配制成适当浓度,用甲醛灭活,使大肠杆菌失去毒力但又保持免疫原性,制成灭活疫苗。在疫苗中添加白油佐剂,有利于增强疫苗的免疫效果。本实验参照《ZG药典 2020 年版 第四部 0731 蛋白质含量测定 DY法 凯氏定氮法》对大肠杆菌粉疫苗中的蛋白质含量进行测定。
2 仪器与试剂
2.1 仪器
K1160 全自动凯氏定氮仪,分析天平 。
2.2 试剂
20g/L 硼酸溶液,溴甲酚绿-甲基红混合指示剂,400g/L 氢氧化钠,0.02mol/L 硫酸或盐酸标准滴定液。
3 实验方法
3.1 样品制备
非蛋白氮供试品溶液的制备:精密量取供试品适量(2020 版药典中规定如供试品为冻干制剂或固体粉末时,应复溶后量取,且蛋白质含量不高于 0.2g。由于本样品复溶困难,即称取 0.3~0.4g 样品。),置 20mL 容量瓶中,加水 10mL,10%钨酸钠溶液 2mL,0.33moL/L 硫酸溶液 2mL,加水至刻度,摇匀,静置 30 分钟,过滤,弃去初滤液(约 3~5mL),取续滤液作为非蛋白氮供试溶液。
3.2 取样
总氮供试品称取 0.05g(2020 版药典中规定如供试品为冻干制剂或固体粉末时,应用 0.9%氯化钠溶液定量稀释成每 1mL 中含氮量约 1mg 的溶液,然后量取 1mL 进行测定。由于本样品复溶困难,即称取 0.05g 样品。),非蛋白氮供试品量取 2mL 非蛋白氮溶液加入消化管中,各加入 3g 硫酸钾与 0.2 硫酸铜水,再沿瓶壁滴加硫酸 10ml。
3.3 消解
设定消解参数
表 1 消解参数设置
3.4 测试
定氮仪参数设置如下表。
表 2 定氮仪参数设置
4 结果与讨论
4.1 实验结果
表 3 大肠杆菌粉疫苗中的蛋白质含量测试结果
4.2 结论
测试结果显示本次测试的大肠杆菌粉疫苗中的蛋白质含量为 66.194%。
参考文献
[1]国家药典委员会. 中华人民共和国药典[ M ] . 四部. 北京: ZG医药科技出版社, 2020: 附录 0731 蛋白质含量测定 DY法凯氏定氮法
注意事项
1)该样品为粉末样品,因此依据药典在样品制备时应制备成合适浓度的溶液进行测试,如样品复溶困难可直接称取相应重量样品进行测试。
2)本实验中蛋白质含量=(总氮含量-非蛋白氮含量)*6.25。
2021-05-10相关仪器 -
免责声明
①本网刊载上述内容,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任
②若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi