SEC Increase预装柱：提高蛋白分离和纯化的好帮手

尺寸排阻层析 (SEC)，也称为凝胶过滤(GF)，基本原理是根据样品分子大小和形状进行分离的一种常用的纯化方法，属于非吸附型层析。

Cytiva SEC填料具有多种选择性，可分离分子质量范围达100 (Mr)至100,000,000 (Mr)Da，可分离的物质涵盖小分子的多肽到大蛋白、蛋白复合物和病毒。

图 1.经典高分辨率凝胶过滤图谱

Cytiva提供全新一代Increase系列分子筛预装柱，专门为小规模制备纯化及分析而设计。

相比原有的高分辨率分子筛，Increase平台可以提供：

1 相同流速下更高分辨率：提高蛋白的纯度与分析数据的精度

图2. 与Superdex Peptide相比较，新一代 Superdex 30 Increase (29219757) 在相同流速下提高了50%分辨率

2 相同分辨率下更高流速：节省实验时间，同等分辨率下时间更短，或通量更高

图 3. 与Superdex Peptide相比较，新一代 Superdex 30 Increase (29219757) 在相同的分辨率下，只需要1/3的实验时间

3 批次差异更小，获得更好的可重复性

图4. 在 Superdex 30 Increase (29219757) 预装柱上重复注射由蛋白质和肽组成的样品混合物，并显示了运行1、50、150、250和350的结果。 蛋白质和肽的峰标记为1-5

Cytiva针对不同的实验目的，提供了3种不同规格的预装柱：

适应于不同的上样量以及应用目的，Cytiva SEC Increase预装柱提供了丰富的选择与zhuo越的性能，为每一次蛋白纯化，样品分离都保证了不凡的表现。

文献分享

PtdIns(4,5)P2 stabilizes active states of GPCRs and enhances selectivity of G-protein coupling. (IF=42.8)

PtdIns (4,5)P2 稳定GPCR的活跃状态并增强G蛋白偶联的选择性成 (IF=42.8)

材料与方法

纯化蛋白β1AR、A2AR、heterotrimeric G和Apo NTSR1：

1 纯化蛋白β1AR：先通过Ni²⁺亲和层析法在0.02％ DDM中进行纯化，然后进行凝血酶蛋白酶裂解步骤以去除His标签，再通过尺寸排阻色谱法（SEC）在 Superdex Increase 200 10/30GL (28990944) 预装柱上进行进一步纯化。

2 纯化蛋白A2AR：制备细胞膜，并用2％ LMNG溶解，并通过Ni²⁺亲和色谱和Superdex Increase 200 10/300GL预装柱纯化。

3 纯化蛋白heterotrimeric G：离心后收集上清，与TALON填料孵育过夜后洗脱，通过 Superdex 200 Increase PC 3.2/300 (28990946) 预装柱进一步纯化蛋白，并通过与人鼻病毒3C蛋白酶孵育过夜去除蛋白质标签。

4 纯化蛋白Apo NTSR1：裂解的蛋白质加载到PD10色谱柱上后浓缩，ZZ体积小于1ml，然后使用Superdex 200  10/300 GL 预装柱进一步纯化。