植物油中黄曲霉毒素B1含量的免疫亲和柱法(Copure® 黄曲霉毒素B1免疫亲和柱)

黄曲霉毒素B1的介绍

黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1简写为AFB1)是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素)，其污染的食物主要是花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品。黄曲霉毒素B1是目前已知的化学物质中致癌性Z强的一种，对肝脏的损害极其严重。

黄曲霉毒素B1的安全限量

国家食品安全标准《GB 2761-2017》规定植物油脂（花生油、玉米油除外）中黄曲霉毒素B1的允许量不得超过10 μg/kg。花生油、玉米油中黄曲霉毒素B1的允许量不得超过20 μg/kg。

逗点生物开发使用免疫亲和柱法检测植物油中黄曲霉毒素B1的含量，平均回收率为92.9%，RSD 4.1%,为客户提供关于植物油中黄曲霉毒素B1检测有效的解决方案。

一、实验目的

本研究利用免疫亲和柱法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测植物油中黄曲霉毒素B1的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

黄曲霉毒素B1（CAS:1162-65-8）。

三、应用范围

本方法适用于植物油中黄曲霉毒素B1检测的HPLC检测及确证。

四、参考标准

《GB 5009.22-2016食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》。

五、实验材料

biocomma® Copure® 黄曲霉毒素B1免疫亲和柱法 (Cat. No. COAFMB103)。

六、实验方法

1、样品提取

准确称取植物油试样5.0 g试样（极ng确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入20 mL乙腈-水（84+16）溶液，涡旋混合1 min，超声提取20 min，在5000 r/min离心10 min，提取上清液4 mL于另一个离心管中，加入21 mL水，混匀待净化。  

2、免疫亲和柱净化

(1)上样：将12 mL注射器连接于免疫亲和柱上端，取待净化液样品液以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。

(2)淋洗和洗脱：用20 mL水淋洗柱子，分两次淋洗，弃掉流出的液体；抽干小柱；加入2×1 mL甲醇缓慢洗脱亲和柱，流速约为2-3滴/秒；50 ℃下氮吹至近干，待衍生。

3、衍生化反应

（1）加入100 uL三氟乙酸，200 uL正己烷于待衍生样品中，于40 ℃水浴避光衍生15 min。

（2）重新溶解：50 ℃下氮吹至近干，加入1mL乙腈-水（15+85）溶液溶解，0.22 μm滤膜过滤，供HPLC分析。

4、HPLC条件

设备：Waters Alliance 2695

色谱柱：InerSustain®-C18 (4.6 mmX250 mm, 5 μm)

检测器：Waters 2475荧光检测器

检测波长：激发波长：365 nm 发射波长：435 nm

流动相：A：乙腈   B：水

洗脱方式：梯度洗脱

表1 流动相梯度洗脱程序

流速：1 mL/min

进样体积：10 μL

七、实验结果

1、1.0 μg/kg 猪肉基质中黄曲霉毒素B1的添加回收结果

表1  1.0 μg/kg猪肉基质中黄曲霉毒素B1的添加回收结果

2、添加水平为1.0 μg/kg猪肉基质中黄曲霉毒素B1检测的液相色谱图

图1 添加水平为1.0 μg/kg猪肉基质中黄曲霉毒素B1检测色谱图 

本方法回收率和RSD满足标准要求。