19 种天然氨基酸分析说明(2,4-二硝基氟苯柱前衍生法)

将0.5 mL (20 种氨基酸+NH3)混合使用液(胱氨酸浓度为0.25 mmol/L，其他化合物浓度为0.5 mmol/L)加入5 mL 玻璃具塞刻度试管中，然后加入0.5 mL 0.1 mol/L Na2B4O7 水溶液和1% DNFB 乙腈溶液，具塞摇匀，然后于60 ℃下避光反应1 h。反应完毕将试管置于冷水中冷却，然后用0.02 mol/L Na2HPO4 + 0.02 mol/L NaH2PO4 水溶液定容至5 mL，混匀后待检测。

分析条件
仪器: 二元高压HPLC系统
色谱柱: Diamonsil AAA 250 × 4.6 mm，5 μm（Cat.#：99751）
流动相A: 0.02 mol/L Na2HPO4 + 0.02 mol/L NaH2PO4 水溶液
流动相B: 甲醇 : 乙腈=10 : 90 (V : V)
流速: 1.0 mL/min
检测波长: UV 360 nm
柱温: 45 ℃
进样体积: 10 μL

梯度程序

该方法适用于氨基酸注射液、动植物性食品和饲料中Asp(天冬氨酸)、Glu(谷氨酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(蛋氨酸)、Cys(胱氨酸)、Ile(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、Lys(赖氨酸)等天然氨基酸的检测。

19 种天然氨基酸、2-氨基丁酸以及NH3(氨)-DNFB 衍生物等液相色谱图

1 Asp(天冬氨酸) 2 Glu(谷氨酸) 3 Ser(丝氨酸) 4 2,4-二硝基苯酚  5 Arg(精氨酸)  6 Gly(甘氨酸) 7 Thr(苏氨酸) 8 Pro(脯氨酸)  9 Ala(丙氨酸) 10 2-氨基丁酸 11 Val(缬氨酸) 12 Met(甲硫氨酸)  13 Cys-Cys(胱氨酸) 14 NH3 15 Ile(异亮氨酸) 16 Leu(亮氨酸)  17 Trp(色氨酸) 18 His(组氨酸) 19 Phe(苯丙氨酸) 20 DNFB   21 Cys(半胱氨酸) 22 Lys(赖氨酸) 23 Tyr(酪氨酸)