1 样品制备提取
1、称取0.5 g 样品于20 mL离心管中;
2、加入4 mL 丙酮溶液(:丙酮=1:1),充分溶解;
3、加入5mL5%氨水溶液充分混合后涡旋2 min;
4、4000 rpm,离心2 min,收集上清液;
5、残渣中加入5 mL5%氨水溶液,重复提取一次,合并两次上清液;
6、将上清液50 oC减压蒸发至约1 mL,再加入3ml 5%甲酸水溶液,充分混匀后待净化。
2 SPE柱净化——ProElut PSA 500 mg/6 mL (Cat.#63205)
(1)活 化: 5 mL甲醇活化,5 mL水平衡;
(2)上 样: 将待净化液加入小柱,流出液弃去;
(3)淋 洗: 用5 mL水淋洗,流出液弃去;
(4)洗 脱: 12 mL20%氨水甲醇溶液洗脱,收集洗脱液;
(5)重新溶解: 将洗脱液在60 oC 下氮吹至约0.5 mL,然后用水定容至1 mL,供HPLC分析。
色谱条件 色谱柱:
Diamonsil C18(2) 250×4.6 mm,5 μm(Cat.#:99603)
流 速: 1.0 mL/min
检测器: UV 240 nm
柱 温: 30 ℃
进样量: 20 μL
流动相: A:20 mmol/L乙酸铵水溶液 B:甲醇
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