样品准备
(1) 取5 g样品,加入5 mL水混合,静置30 min;
(2) 加入2 g氯化钠、2 g无水硫酸镁,加入15 mL乙腈,涡旋2 min,6000 rpm下离心2 min,收集上清液;
(3) 将下层残留物再用15 mL乙腈重复提取一次,合并两次提取上清液,加入15 mL正己烷振荡混匀,离心分层,弃去上层正己烷;
(4) 将下层乙腈在40 ℃下减压蒸至近干,待净化。
SPE柱净化——ProElut PSC 1.5 g/12 mL (Cat.#:65357)
(1)活 化: 向柱中加入10 mL20%二氯甲烷*,弃去流出液;
(2)上 样: 再用5 mL20%二氯甲烷*分两次洗涤旋蒸瓶并加入柱中,弃去流出液;
(3)淋 洗: 向柱中加入5 mL20%二氯甲烷*,弃去流出液,将小柱抽干10min;
(4)洗 脱: 向柱中加入20 mL乙腈,收集流出液; (5)重新溶解: 将洗脱液在40 ℃减压蒸干,再用90%乙腈水定容至1 mL,供HPLC分析。 *20%二氯甲烷:二氯 甲烷:正己烷(2:8)
色谱柱:Diamonsil C18(2),250 mm×4.6 mm,5μm(Cat# 99603)
流 速:1.0mL/min
检测器: *多波长检测:0~13.6 min:270 nm; 13.6~14.5 min:254 nm; 14.5~20 min:282nm;20~23.4 min:254 nm; 23.4~27.5 min:280 nm;27.5~45 min:245nm。
柱 温:35℃
进样量:20 μL
流动相:A:水 B:乙腈:甲醇=3:7
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