流式细胞仪的操作规程

　　流式细胞仪是一种在功能水平上对单仑细施或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测仪器。流式细胞仪被广泛应用于临床医学、细胞学、生物学、微生物学、制药学、生殖学等领域。

流式细胞仪的功能

　　流式细胞仪是对高速直线流动的细胞或生物微粒进行快速定量测定和分析的仪器，主要包括样品的液流技术、细胞的计数和分选技术，计算机对数据的采集和分析技术等。

　　流式细胞仪以流式细胞术为理论基础，是流体力学、激光技术、电子工程学、分子免疫学、细胞荧光化学和计算机等学科知识综合运用的结晶。流式细胞术是一种自动分析和分选细胞或亚细胞的技术。

　　流式细胞仪的特点是：测量速度快、被测群体大、可进行多参数测量，即对同一个细胞做有关物理、生物化学特性的多参数测量，且在统计学上有效。

流式细胞仪的校准

　　流式细胞仪在使用前，甚至在使用过程中都要精心进行调试，以保证工作的可靠性和Z佳性。调试的项目主要是激光强度、液流速度和测量区的光路等。

　　激光强度：除调整反射镜的角度以调整到所需波长的激光出光外，还要结合显示屏上的光谱曲线使激光的强度输出为Zda。

　　液流速度：可通过操作台数字显示监督，调节气体压力大小以获得稳定的液流速度。

　　测量区光路调节：这是调试工作的关键，需要保证在测量区的液流、激光束、90°散射测量光电系统垂直正交，而且交点较小。一般可在用标准荧光微球等校准中完成。

　　流式细胞仪中所测得的量是相对值，因此需要在使用前或使用中对系统进行校准或标定，这样才能通过相对测量获得的意义。

　　流式细胞仪校准的标准样品应该稳定，有形成份形状应是大小比较一致球形，样品分散性能良好，且经济、容易获得。常用标准荧光微球作为非生物学标准样品，鸡血红细胞做为生物学标准样品。微球用树脂材料制作，或标有荧光素，或不标记荧光素。

　　鸡血红细胞标准样品制作过程昭下：取3.8%枸橼酸或肝素抗凝的鸡血(抗凝剂：鸡血=1：4)，经PBS清洗3次，再用5～10ml的1.0%戊二醛与清洗后的鸡红细胞混合，室温下振荡醛化24h，Z后经PBS再清洗，贮4℃冰箱中备用。需要指出的是因为未经荧光染色，所测光信号为鸡血红蛋白的自发荧光。

流式细胞仪的使用方法

　　1、打开流式细胞仪的电源，对系统进行预热;

　　2、打开气体阈，调节压力，获得适宜的液流速度;开启光源冷却系统;

　　3、在样品管中加入去离子水，冲洗液流的喷嘴系统;

　　4、利用校准标准样品，调整流式细胞仪，使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上，0°和90°散射的荧光强度强，并要求变异系数为小;

　　5、选定流速、测量细胞数、测量参数等，在同样的工作条件下测量样品和对照样品;同时选择计算机屏上数据的显示方式，从而能直观掌握测量进程;

　　6、样品测量完毕后，使用去离子水冲洗液流系统;

　　7、因为实验数据存入计算机硬盘(有的机器还备有光盘系统，存贮量更大)，可关闭气体、测量装置，而单独使用计算机进行数据处理;

　　8、将所需结果打印出来。

流式细胞仪的维护保养

　　1、样品要制成单细胞悬液，且对被检测样品的保存时间有要求。

　　2、选择正确的荧光染料，一般原则是：低表达抗原标记高S/N(信噪比)荧光素，高表达抗原标记低S/N(信噪比)荧光素。当样品用2种以上荧光染料时，为消除干扰，需要做荧光补偿。在应用流式细胞仪软件作荧光补偿时，补偿只应用在同一个激光激发的不同荧光素之间，应避免补偿不足和过度补偿。

　　3、溶液使用前，所用溶液都要进行过滤处理，以免出现沉淀物而堵塞喷嘴。

　　4、流式细胞仪状态稳定后，要先排除进样针内的气泡以保证喷嘴畅通，之后再对样本进行检测。

　　5、上、下样本管时，用力不要太大，防止用力过大造成流式细胞仪光路偏移，影响测试结果。

　　6、每天关机前，利用清洗程序对流式细胞仪进行清洗，以防喷嘴堵塞。

　　7、定期处理废液，定期清洗鞘液管路、废液管路和流动池，以防细菌生长。

　　8、做好流式细胞仪质量控制与生物安全管理，保证实验结果安全可靠。

　　9、流式细胞仪应放置于清洁、避光、干燥的室内，并配上稳压电源。

　　流式细胞术作为细胞分析和分选的重要技术，在医学基础研究、临床诊断及科学研究中广泛应用，目前已成为现代生物医学和临床检验学Z强有力的手段之一。随着人类的发展和科学技术的进步，流式细胞仪的技术会进一步完善，其应用领域也将会越来越宽广。