如何检测蛋白在大肠杆菌中的不表达是因为mRNA的不稳定？

不表达的因素多了： 细胞毒性，N端信号肽，稀有密码子，等等。 你换GST或者Trx融合试过了么？hongkaichen(站内联系TA)这是老师的一个作业，思考题，跟实验无关，因为mRNA不稳定也可能造成蛋白不表达，所以如果是这种原因，就是让我们用什么方法验证是不是这种原因。开始我觉得可以用观察多聚核糖体现象来验证，但这种方法不能排CJ自身的蛋白表达也能产生这种现象。如果用RT-PCR P出来了不知道能不能说有mRNA存在，然后排除掉这种原因？lifefamily(站内联系TA)真的，我还diyi次听说跟mRNA不稳定有关，孤陋寡闻了…… 三、mRNA稳定性与翻译控制 mRNA稳定性主要取决于3’—UTR结构 1．poly(A)尾增加mRNA稳定性， 2．3’-UTR中UA序列导致mRNA不稳定． 高手帮我扫盲一下！？hongkaichen(站内联系TA)在大肠杆菌中表达可能就没有polyA修饰，mRNA不稳定我觉得可能就是半衰期短，不能及时翻译。lifefamily(站内联系TA)关键是，大肠杆菌是如此成熟的一个表达系统，为何就你这个蛋白的mRNA没有polyA修饰呢？hongkaichen(站内联系TA)Originally posted by lifefamily at 2009-5-13 15:38: 关键是，大肠杆菌是如此成熟的一个表达系统，为何就你这个蛋白的mRNA没有polyA修饰呢？ 这个我不知道怎么回答你，在大肠杆菌里确实有一小段polyA，如果PolyA酶突变了，或其他与ployA形成有关的蛋白突变了导致PolyA不能形成，这样导致mRNA不稳定也可能。其实我想问的ZD是假如是mRNA不稳定的话，有什么方法可以检测？如果你要说不可能是mRNA不稳定照成的，那么你就设计一个实验来排除这种可能，理论还是需要实验来验证的。:)lifefamily(站内联系TA)RT-PCR加Northern blot 其他想不到了。