对黄曲霉毒素进行hplc检测时，为什么选择反相液相色谱体系和荧光检测器

2020版药典中新增多种中药材的黄曲霉毒素检测，并给出限量要求。

快检技术的应用满足了中药材快速高效检测的要求，并且极大降低了检测成本，在毒素检测领域广泛应用。

一、胶体金检测试纸条法

胶体金检测试纸条法分为两种：定性试纸条和快速定量试纸条，适用于中药材快速初筛及原料验收等阶段的真菌毒素检测。

1.Pribolab定量检测试纸条

（1）适用项目：黄曲霉毒素B1

（2）产品优势：

15分钟获得检测报告

每一味药材经过独立验证，适用性强

独特的处理方法，去除多种活性成分及杂质干扰

与药典方法比对，实现高度准确性

无需温育反应，方便快捷

（3）产品使用：

定量检测需配备Pribolab专用多功能定量检测仪进行读数。标准曲线IC卡已配置好，无需手动输入标准数据，需要注意的是上机读值前务必先使用同批次随附曲线卡（试纸条包装盒盖内侧粘贴曲线卡）中标准曲线数值，不同批次不可混用。

Pribolab定性检测试纸条

适用项目：黄曲霉毒素B1/总量

（2）产品优势：

快速筛选，仅需十分钟；

适合现成检测，结果可肉眼直接判读；

性价比高，结果准确可靠；

（3）实验过程：

（4）结果判定：

（5）中药试纸条检测产品及配套仪器：

二、酶联免疫试剂盒

(1) 适用项目：黄曲霉毒素B1

中药专用试剂盒是根据《2020版-2351真菌毒素测定法》独立开发的产品，它适用于药典中黄曲霉毒素ELISA检测方法。

(2)产品优势：

1小时内获得检测报告

实现定量检测，对比限量要求

独特的处理方法，去除多种活性成分及杂质干扰

与药典方法比对，范围广，更便捷

检测效率提升2倍

（3）酶联免疫试剂盒产品及配套仪器：

黄曲霉毒素是存在粮食谷物中一类很常见的真菌毒素，在粮食谷物如果处在潮湿的环境中时，或者没有经过一段时间的晾晒，就很容易招致黄曲霉毒素的滋生，长期食用可导致腹泻呕吐，严重可能危及到人的生面安全。黄曲霉毒素主要存在于霉变的花生、谷物、果仁和大米中。因其对人、畜肝脏的剧烈损害而名列毒性之首。各国对黄曲霉毒素在食品中的残留限量均有规定。

黄曲霉毒素检测仪是一款能够快速检测黄曲霉毒素的仪器，产品有多个通道设计，可同时检测多个样品，适用于各类畜牧养殖企业、谷物生产企业、面粉厂、方便面厂、第三方检测机构及各级政府监管部门。

hplc荧光检测器的优点是什么？

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引言

反相HPLC已成为分离和分析蛋白质和多肽的重要工具。

它在生物技术行业中被广泛应用于蛋白质类ZL产品的表征，以及这些产品和杂质的鉴定。

在通过质谱鉴定蛋白质之前，反相HPLC在从消化后的蛋白质组中分离多肽方面有着至关重要的作用。

它也被用于探索性研究中多种蛋白质和多肽的纯化，以及蛋白类ZL药物的大规模纯化。

反相HPLC灵敏、通用性强，还可与质谱等技术结合使用，在蛋白质研究中具有重要的地位。

此外，它还能够分离结构近乎相同的蛋白质，因而得到了广泛的应用。

正如牛、人和猪胰岛素变异体的分离过程所示（图1），反相HPLC能够分离非常相似的蛋白质。

牛胰岛素和人胰岛素仅有三个氨基酸的差别，也能够被完全分离开来。

牛胰岛素在胰岛素“a”链的第8位为丙氨酸，第10位为缬氨酸，“b”链的第30位为丙氨酸。

而人胰岛素在胰岛素“a”链的第8位为苏氨酸，第10位为异亮氨酸，“b”链的第30位为苏氨酸。

图1. 以RP-HPLC对紧密关联的胰岛素变异体进行分离

猪胰岛素和人胰岛素仅有一个氨基酸的差异（猪胰岛素的“b”链第30位为丙氨酸，人胰岛素该位置为苏氨酸），在基线即已分离。  

在另一个实例中，尽管兔胰岛素和人胰岛素仅有一个氨基酸的差异，即以苏氨酸取代了丝氨酸，但也同样得到了分离（参考文献1）。  

反相HPLC的高分离能力也被扩展应用到了多肽上。  

在图2中，两种多肽尽管只有一个氨基酸的差异，即丝氨酸对苏氨酸，但也得到了完全的分离。  

这种高分离能力是反相HPLC在蛋白质和多肽分离中得到广泛应用的基础性因素。  

图2. 以RP-HPLC对紧密关联的多肽进行分离。仅有一个氨基酸不同的两种十肽菌素，一种含丝氨酸，而另一种含苏氨酸。  

蛋白质/多肽的保留机制  

在反相HPLC中，颗粒表面是十分疏水的，因为其表面通过化学连接有羟基（图3中的波浪形红线）。  

通过疏水表面对蛋白质一面（被称为“疏水性足”）的吸附，蛋白质被保留下来（图3）。  

与疏水表面的厚度相比，蛋白质要大得多，因此蛋白质仅有一部分被疏水表面所吸附。  

大部分蛋白质位于表面上方并与流动相接触。  

由这种疏水性吸附所导致的净相互作用非常强，会导致蛋白质保持吸附在表面上（图4A），直至接触到特定浓度的有机溶剂，这时蛋白质会从表面上解吸附并从色谱柱上洗脱（图4B）。  

在Z初的吸附/解吸附之后，尽管蛋白质在从色谱柱上移动下来时仍会与表面产生一些相互作用，但却是十分微弱的，对分离过程无影响。  

分离是由单次吸附/解吸附过程完成的。  

解吸蛋白质所需要的有机改性剂的浓度十分精确，并与疏水足的大小呈函数关系。  

详情请参阅参考文献3。  

图4. 进入色谱柱的蛋白质被吸附在柱顶端附近的疏水表面上（A）并且一直保持吸附，直至有机改性剂的浓度达到特定值，此时蛋白质从表面解吸附（B）。  

在反相HPLC中，吸附/解吸保留机制导致蛋白质的保留行为与小分子不同。  

小分子的保留行为随着有机溶剂浓度的改变而缓慢改变时（图5，联苯），一旦有机溶剂的浓度达到所需要的值，蛋白质的保留行为即发生突然改变，引起保留时间的快速变化（图5，蛋白质）。  

该过程产生的尖锐峰形常见于蛋白质和多肽（图6A）。  

由于有机溶剂浓度的微小变化会引起的显著的保留行为变化，等度洗脱很少被用于蛋白质中，因为峰变宽了，而有机溶剂的微小改变会导致蛋白质保留行为的巨大变化（图6B）。

图5.有机溶剂浓度对应的保留行为  

图6.  

A. 梯度洗脱过程中多肽和蛋白质洗脱出尖锐峰形。  

B. 等度洗脱下，蛋白质的峰形（本例中为溶菌酶）很宽，有机溶剂的微小改变都会引起保留时间的巨大变化。