固体或半固定的蛋白含量可以用比色法测定蛋白质的含量吗

mquang 2017-11-08 20:54:13 246 浏览

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乱世浮生一声叹 2017-11-09 00:00:00

要回答这个问题，首先需要理解样品前处理需要达到的目的：减少人为降解和修饰，并且尽量多的释放肽段。整个过程可以分为以下流程：先从组织、体液或细胞中提取蛋白质，拿到蛋白混合溶液（根据你的研究目的，可以对蛋白先做分离，或者不分离），接下来还原烷基化（还原的过程是将蛋白的二硫键打开，然后烷基化可以修饰巯基，防止游离的巯基再生成二硫键）处理，并酶解成肽段。 1，样品的收集与保存组织样品 1) 对于人体手术切除的组织，有条件的话，Z好用PBS（磷酸缓冲盐溶液，作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）取完之后直接去血。如果没有去血，可以-80℃液氮保存，干冰运输。 2）对于小鼠、大鼠、兔子之类的组织样品，建议用灌流的方式来去血，尤其是像肝脏、胃、心脏这类大的组织，可以直接用灌流的方式去血，去得Z干净。其次的方案是在后期剪碎的时候去血。细胞样品常规实验，建议收到5*1E6~1E7个细胞以上的样品量（有些实验需要的样品量会少一些，后面会详细讲）。细胞取好后，首先用PBS清洗一下细胞表面，因为大部分培养基里面都含有血清，这部分血清得洗干净了先~ 如果是做分泌蛋白研究的话，首先用PBS清洗样品几次，再用条件培养基（不含有血清的培养基）进行培养，根据细胞情况，大概12个小时以后，离心，去掉细胞碎片，取上清，就能提取到分泌蛋白了。血清样品 1）血浆样品：可以通过医院常用的EDTA抗凝管进行收集，收集到的血浆会呈悬浮状态，离心去掉血细胞。 2）血清样品：现在大部分研究都直接针对血清样品，它的成份更简单，没有凝集素，没有大量的血细胞，针对性会更强。收集血清样品时，直接把血清吸到管子里，室温静置让它凝结，上清黄色部分就是血清样品啦。 2，研磨或超声破碎样品，为了减少人为操作引入的修饰，通常会准备大量的冰，进行冰上的操作。同时还需要加入蛋白酶YZ剂，防止在操作过程中蛋白被样品中自带的蛋白酶降解掉。 3，充分熔接蛋白质，如果蛋白没有充分溶解，能提取到的蛋白就会很少，达不到研究目的。 4，充分解旋蛋白质，通常，蛋白质都是成球状的稳定状态，解旋蛋白质就是将球状蛋白中的二硫键打开，让它形成链状结构，以便进行下一步酶切。 5，酶解蛋白质，一般会用多种酶对蛋白质进行酶解。 6，去除杂质，我们要知道，质谱是一个非常灵敏的仪器，它检测的是多肽的质荷比。所有的盐类，以及所有会进行离子化的杂质，都会干扰到肽段的检测。所以我们会要求进入质谱之前的蛋白样品非常干净。在蛋白水平及肽段水平都会进行去除杂质的步骤。更详细的，下次再聊~

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凯氏定氮法测定豆乳中的蛋白质含量

1 前言

豆乳是黄豆加水、磨成汁后再煮熟的饮料。豆乳饮料营养非常丰富，且易于消化吸收，它是数百种天然植物中Z受营养学家推荐的食物。本文参照《GB 5009.5-2016 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》标准，对某品牌浓香豆乳进行蛋白质含量的测定。

2 仪器与试剂

2.1 仪器

K1160 全自动凯氏定氮仪，SH420F 石墨消解仪，分析天平。

2.2 试剂

硫酸（分析纯），催化剂片（分析纯无水硫酸钾 3g 和分析纯无水硫酸铜 0.2g），20g/L硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，40%氢氧化钠。

3 实验方法

3.1 取样

称取样品 3.0g（精确值 0.1mg）左右，加入消化管。加入混合催化剂 3gK₂SO₄、0.2gCuSO₄，加入 10mL 浓硫酸。

3.3 消解

利用石墨消解炉进行消解，将消化管放在石墨炉上，盖上排气罩，连接废气吸收系统，消化过程采用曲线升温模式，设定消解参数如表 1：

表 1 消解参数设置

阶段	温度/℃	保持/min	备注
1	200	20	不加排废罩，挥发水分
2	230	20
3	350	20
4	420	90

3.4测试

将消化管放置于凯氏定氮仪上，定氮仪参数设置如表 2：

表 2 定氮仪参数设置

硼酸	稀释水	碱液	蒸馏量	蛋白系数	蒸汽流量	滴定酸
25mL	30mL	40mL	5min	6.25		0.1169mol/L

4 测试结果

4.1 实验结果

名称	样品重量 g	氮含量%	蛋白质含量%	平均值%	RSD%
豆乳	3.1171	0.4887	3.0541	3.0592	0.13
	3.0504	0.4901	3.0632
	3.1046	0.4899	3.0617
	3.1745	0.4892	3.0578

4.2 结论

通过实验数据可以看出，测定该豆乳样品的粗蛋白平均值为 3.0592%。

豆乳样品包装袋上营养成分表中蛋白质标示值为 3.0g/100g，样品测定的蛋白质平均值符合《GB 28050-2011 食品安全国家标准预包装食品营养标签通则》要求的食品中蛋白质的允许误差范围≧80%标示值。

参考文献

[1] GB 5009.5-2016 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定[S]. [2] GB 28050-2011 食品安全国家标准预包装食品营养标签通则[S].

2020-02-11 11:15:03 355 0

为什么凯氏定氮法测定蛋白质的含量称之为粗蛋白含量:

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凯氏定氮法测定干海苔中的蛋白质含量

1 前言

干海苔是经过一次加工后而成的海苔，它是一种高蛋白低脂肪的食物，五张海苔片的蛋白质含量约等于一个鸡蛋，并且富含维生素及钾、钙、镁、磷等微量元素。海苔中所含藻胆蛋白具有降血糖的好处。本文参照《GB 5009.5-2016 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》标准，对某品牌海苔进行蛋白质含量的测定。

2 仪器与试剂

2.1 仪器

K1160 全自动凯氏定氮仪，SH420F 石墨消解仪，分析天平、超高速粉碎机。

2.2 试剂

硫酸（分析纯），催化剂片（分析纯无水硫酸钾 3g 和分析纯无水硫酸铜 0.2g），20g/L硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，40%氢氧化钠。

3 实验方法

3.1 样品制备

将干海苔片粉碎，过筛，105℃烘干 2 小时，放入干燥器中备用。

3.2 取样

称取样品 0.5g（精确值 0.1mg）左右，加入消化管。加入混合催化剂 3gK₂SO₄、0.2gCuSO₄，加入 10mL 浓硫酸。

3.3 消解

利用石墨消解炉进行消解，将消化管放在石墨炉上，盖上排气罩，连接废气吸收系统，消化过程采用曲线升温模式，设定消解参数如表 1：

表 1 消解参数设置

3.4 测试

将消化管放置于凯氏定氮仪上，定氮仪参数设置如表 2：

表 2 定氮仪参数设置

4 测试结果

4.1 实验结果

4.2 结论

通过实验数据可以看出，测定海苔样品的粗蛋白平均值为 33.0852%。

海苔包装袋上营养成分表中蛋白质标示值为 35.3g/100g，通过实验数据可以看出，该样品测定的粗蛋白平均值均符合《GB 28050-2011 食品安全国家标准预包装食品营养标签通则》要求的食品中蛋白质的允许误差范围≧80%标示值。

参考文献

[1] GB 5009.5-2016 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定[S].

[2] GB 28050-2011 食品安全国家标准预包装食品营养标签通则[S].

2020-10-26 15:42:18 333 0

凯氏定氮法测定谷物粉中的蛋白质含量

1 前言

随着人们生活水平的提高，对健康的关注度也越来越高。谷物粉作为一种健康时尚，成了很多人都关心的话题。谷物粉是各种粮食、杂粮、豆类及药食两用类原料经研磨后再精制而成的一种粉剂类产品，其中包含如枸杞、茯苓、金银花、决明子、火麻仁、莱菔籽、山核桃仁、薏米、沙棘等 100 多种药食同源的食材，既保证了均衡营养的释放，又保证了膳食纤维的含量，也同时提高了身体得吸收既完整又有吸收能力。本文参照《GB 5009.5-2016 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》测定谷物粉中的蛋白质含量。

2 仪器与试剂

2.1 仪器

K1160 全自动凯氏定氮仪，SH420F 石墨消解仪，分析天平。

2.2 试剂

硫酸（分析纯），催化剂片（分析纯无水硫酸钾 3g 和分析纯无水硫酸铜 0.2g），20g/L硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，40%氢氧化钠。

3 实验方法

3.1 取样

精确称取混匀样品 0.5g 左右（精确值 0.1mg），用称量纸包好放入消化管内，然后分别加入 3g 硫酸钾与 0.2g 硫酸铜，沿消化管壁加硫酸 10mL。

3.2 消解

利用石墨消解炉进行消解，将消化管放在石墨炉上，盖上排气罩，连接废气吸收系统，消化过程采用曲线升温模式，设定消解参数如表 1：

表 1 消解参数设置

3.3 测试

将消化管放置于凯氏定氮仪上，定氮仪参数设置如表 2：

表 2 定氮仪参数设置

4 测试结果

4.1 实验结果

4.2 结论

通过实验数据可以看出，测定谷物粉中蛋白质含量的平均值为 18.17%。

以上数据显示，使用 K1160 全自动凯氏定氮仪测定谷物粉中蛋白质含量，所得结果误差符合《GB 5009.5-2016 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》标准要求的两个测定值的JD差值不得超过算术平均值的 10%。

参考文献

[1] GB 5009.5-2016 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定[S].

2020-12-08 15:02:16 484 0

凯氏定氮法测定米饼中的蛋白质含量

1 前言

米饼是一种以大米为原料，主料是籼米或粳米，添加芝麻、粟和盐等配料，经浸泡、制粉、压坯成型、烘干、焙烤、调味等单元操作而加工成的糕点。它具有低脂肪、易消化、口感松脆等特点，米饼不使用黏接剂使米粒相连，是低热值的膨化制品。若用糙米，营养素含量多且高，又能满足人们对低热量和高膳食纤维的要求。本文参照《GB 5009.5-2016 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》测定米饼中的蛋白质含量。

2 仪器与试剂

2.1 仪器

K1160 全自动凯氏定氮仪，SH420F 石墨消解仪，分析天平，超高速粉碎机。

2.2 试剂

硫酸（分析纯），催化剂片（分析纯无水硫酸钾 3g 和分析纯无水硫酸铜 0.2g），20g/L硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，40%氢氧化钠。

3 实验方法

3.1 取样

将样品粉碎，精确称取样品 0.5g 左右（精确值 0.1mg），用称量纸包好放入消化管内，然后分别加入 3g 硫酸钾与 0.2g 硫酸铜，沿消化管壁加硫酸 10mL。

3.2 消解

利用石墨消解炉进行消解，将消化管放在石墨炉上，盖上排气罩，连接废气吸收系统，消化过程采用曲线升温模式，设定消解参数如表 1：

表 1 消解参数设置

3.3 测试

将消化管放置于凯氏定氮仪上，定氮仪参数设置如表 2：

表 2 定氮仪参数设置

4 测试结果

4.1 实验结果

4.2 结论

通过实验数据可以看出，测定米饼中蛋白质含量的平均值为 6.61%。

以上数据显示，使用 K1160 全自动凯氏定氮仪测定米饼中蛋白质含量，所得结果误差符合《GB 5009.5-2016 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》标准要求的两个测定值的JD差值不得超过算术平均值的 10%。

参考文献

[1] GB 5009.5-2016 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定[S].

2020-12-21 13:24:17 466 0

凯氏定氮法测定百合干中的蛋白质含量

1 前言

百合干含有蛋白质、脂肪、还原糖、果胶等，另外还含有维生素 B，钙、磷、铁等多种成分，百合干性微寒、味甘，有润肺、zhi咳、清热。jie毒、理脾健胃、利湿消积、宁心安神、促进血液循环等功效，有很高的YY和食用价值。本文参照《GB 5009.5-2016 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》测定百合干中的蛋白质含量。

2 仪器与试剂

2.1 仪器

K1160 全自动凯氏定氮仪，SH420F 石墨消解仪，分析天平。

2.2 试剂

硫酸（分析纯），催化剂片（分析纯无水硫酸钾 3g 和分析纯无水硫酸铜 0.2g），20g/L硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，40%氢氧化钠。

3 实验方法

3.1 取样

样品粉碎，精确称取 0.5g 左右（精确值 0.1mg），用称量纸包好放入消化管内，然后分别加入 3g 硫酸钾与 0.2g 硫酸铜，沿消化管壁加硫酸 10mL。

3.2 消解

利用石墨消解炉进行消解，将消化管放在石墨炉上，盖上排气罩，连接废气吸收系统，消化过程采用曲线升温模式，设定消解参数如表 1：

表 1 消解参数设置

3.3 测试