检测尿激酶的纤维蛋白平板制作方法

无名de小仙 2013-05-16 23:42:43 536 浏览

我要做一个检测尿激酶的纤维蛋白平板，可不知道怎么做？希望在这里能够有人回答我的问题，告诉我具体的操作方法，我将会非常感谢你的支持。... 我要做一个检测尿激酶的纤维蛋白平板，可不知道怎么做？希望在这里能够有人回答我的问题，告诉我具体的操作方法，我将会非常感谢你的支持。展开

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仙仙0146 2013-05-17 00:00:00

这里有rtPA的平板检测方法，尿激酶要比这个简单，请酌情修改。配制母液 1. Tris－HCl缓冲液 50mM Tris-HCl， pH7.5， 100mM NaCl Tris Base: HCl =50:40; Tris base 2000mM (dd H2O) NaCl : 1000mL× 0.1 M×58.44 ＝ 5.84 g/L 115℃×10min 高压蒸气灭菌。 2. 1.0% Agar 1000mL10g Agar条状物，以500mL 50mM Tris-HCl， pH7.5， 100mM NaCl 加热溶解，微波加热辅以煤气加热，注意不要沸出，待完全溶化透明后以50mM Tris-HCl， pH7.5， 100mM NaCl 定容至1000mL，继续加热至刚好沸腾，摇匀，于90-100℃抽滤。抽滤时加一层Φ6-10cm 定性滤纸进行真空抽滤，大约200mL换一层滤纸。按计算的倾倒体积分装至100mL以去离子水充分洗干净的三角烧瓶中，115℃×10min 高压蒸气灭菌。……………… 详细资料请参考：on http://product.bio1000.com/100228/

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检测尿激酶的纤维蛋白平板制作方法: 我要做一个检测尿激酶的纤维蛋白平板，可不知道怎么做？希望在这里能够有人回答我的问题，告诉我具体的操作方法，我将会非常感谢你的支持。... 我要做一个检测尿激酶的纤维蛋白平板，可不知道怎么做？希望在这里能够有人回答我的问题，告诉我具体的操作方法，我将会非常感谢你的支持。展开

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尿激酶是从新鲜人尿中提取的，或从人肾组织培养中获得的一种酶蛋白，是临床上一种常用的溶解血栓的药物。它由高分子量尿激酶 (Mw=54000) 和低分子量尿激酶 (Mw=33000) 组成的混合物。

为使尿激酶达到ZJ分离效果，本应用使用粒径2 µm的TSKgel UP-SW2000超GX液相尺寸排阻色谱柱与G2000SWXL色谱柱，对尿激酶进行了对比分析。

溶液的配制

色谱流动相配制：0.2 mol/L磷酸二氢钠水溶液，用磷酸调pH至3.0 。

样品：尿激酶测试方法优化溶液浓度：2.5 mg/mL

分析条件

仪器：Thermo Ultimate3000

色谱柱1：TSKgel UP-SW2000 (2µm, 4.6 mmI.D.×30cm)

色谱柱2：TSKgel G2000SWXL (5µm, 7.8 mmI.D.×30cm)

流速：0.18 mL/min for UP-SW2000、0.5 mL/min for G2000SWXL

柱温：25℃

样品盘温度：10℃

进样量：10 µL

检测器：紫外检测器@280nm

分析结果

图1. UP-SW2000色谱柱分离谱图

图2. G2000SWXL色谱柱分离谱图

结果与讨论：

相较于G2000SWXL色谱柱，TSKgel UP-SW2000对多聚体、高分子量尿激酶、低分子量尿激酶的分离度均有所提高。

同时对比了等量溶质不同进样体积，高浓度样品小进样量，分离度较好一些。UP-SW2000色谱柱可满足药典要求：高分子量尿激酶峰面积占90%以上，且与低分子量尿激酶分离度大于1.0。

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