核酸硝酸银染色浅可以重复银染吗

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  引堪怯184 2017-03-24 00:00:00

  电泳，核酸需经染色才能显色带型，用核酸染色剂：1、溴化乙锭（ethidium bromide，EB）用核酸荧光染料，嵌入核酸双链配碱基间，紫外线激发，发桔红色荧光.EB-DNA复合物EB发荧光，比游离凝胶EB发荧光强度10倍，需洗净背景即清楚观察核酸带型.若EB背景太深，凝胶 浸泡于1mmol/LMgSO41h或10mmol/L MgCl25min，使非结合EB褪色， 检查10ngDNA品，EB用于检测单链DNA或RNA，其单链核酸亲力相较，荧光产率相较低.凝胶或电泳缓冲液加入终浓度0.5μg/mlEB，染色电泳程进行，能随观察核酸迁移情况.EB带电荷，嵌入碱基增加 核酸刚性，使迁移率减慢，故宜用于测定核酸量，应电泳凝胶浸入0.5μg/mlEB水溶液10min进行染色.EB见光 易解，应于4℃避光保存，2、吖啶橙（acridine orange，AO）：吖啶橙嵌入双链核酸碱基间，254nm紫外线激发发530nm绿色荧光；通静电与单链核酸磷酸基结合，254nm紫外线激发 产640nm红色荧光.区单链双链核酸，灵敏度别0.1μg0.05μg.吖啶橙染色操作要求严格，应 22℃，0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）避光浸泡30min，搪瓷盘用该缓冲剂4℃脱色夜或22℃脱色1~2.3、银（Ag+）试剂：Ag+与核酸形稳定复合物，用甲醛使Ag+原银颗粒.AgNO3等试剂使聚丙烯酰胺凝胶单链，双链DNA及 RNA都染黑褐色.银染灵敏度比EB染色高200倍左右，比亚甲蓝染色高100~1000倍，于0.5mm厚凝胶，能检测0.5ng RNA，其缺点专性强，能与蛋白质，污剂反应产褐色，且DNA染色定量准确.银与DNA稳定结合，DNA破坏作用，适于DNA 片段收制备.4、亚甲蓝（methylene blue）RNA染蓝色，灵敏度高，且操作间.胶浸泡于0.02%亚甲蓝，10mmol/L Tris-Ac（pH8.3），4℃放置1~2h，用净水洗5~8h（反复换水），带型肉眼见，低检测量 250ng. 不要多想 这样的提问没有意义 很多烦恼都是我们自己找的

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