兽残分析利器 | 可实现“一步净化”的HLB-Lim小柱来啦

兽药残留是“兽药在动物源食品中的残留”的简称，随着人们对动物源食品由需求型向质量型转变，兽药残留问题已逐渐成为全世界关注的一个焦点。

目前，在兽药残留分析领域普遍存在几个现状，我们总结为四点：

1）样品类型丰富：

样品涵盖禽肉、畜肉、内脏、水产品、蛋、乳、蜂蜜等多种类动物源性食品，基质复杂而多样；

2）检测项目繁多：

检测的兽药类别包括抗生素类（四环素、氯霉素）、β-激动剂类（瘦肉精及其类似物等）、磺胺类（多在猪、禽、牛等动物中发生）、呋喃类及非法添加物等，理化性质各异；

3）前处理流程繁琐：

其中应用最广泛的方法就是SPE固相萃取，一般分为活化、上样、淋洗、洗脱4个步骤，稍有操作不慎，都容易影响最终的检测效果；

4）面临难点多：

除上述情况，还存在着样品残留水平低、提取难度大、基质复杂、干扰因素多等难点。

综上所述，我们不难看到前处理流程在兽药残留分析领域当中的重要性。尤其当处理步骤增加，对于样品的回收率、检测的灵敏性都将产生很大的挑战。

所以，有没有一种前处理方法能够真正满足兽残检测的多种需求呢？

如果你也有这个疑问，不妨来看看我们Copure®系列新推出的HLB-Lim多兽残分析专用净化柱！

与传统的SPE柱相比
Copure® HLB-Lim小柱
无需活化、一步上样
前处理流程的化繁为简
有效避免因溶剂转移所带来的结果损失
真正实现一步净化和高回收率

实验背景

       展青霉素，别名棒曲霉素，广泛存在于水果中，具有很强的毒性，对人体有极强的损伤。故而，展青霉素的检测也是国抽项目必检项目，其中GB2761-2017规定食品中展青霉素的限量值为50ug/kg。

       近期CMA委员会将组织相关项目的审查，作为一个常检项目，安谱实验特此就果汁中展青霉素的检测方法给大家进行分享：根据标准GB 5009.185-2016（食品中展青霉素的测定），使用CNW多功能净化柱（SBEQ-CD228S），用液相和液质对苹果汁、山楂汁/片进行了测定，发现结果稳定可靠，回收率高，完全满足标准方法中的要求。

由于篇幅有限，本文只提供了部分谱图供参考

如需要详细的实验谱图等数据

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接下来，小编带大家走进安谱实验室

一起来学习具体检测方案吧~

一、样品前处理

       称取4g样品（固体样品山楂片用高速粉碎机进行粉碎待用）于50mL离心管中，加入21mL乙腈，混匀，而后在6000 r/min下离心10min，取上清液。

二、小柱操作过程

       步骤1：向试管中加入10mL样品提取液，然后加入50μl乙酸

       步骤2：将228净化柱橡胶头从试管顶端插入试管中，并向下压净化柱至试管底端

       步骤3：将净化柱上部净化后的样品提取液倒出至样品瓶或EP管中

       步骤4：取5ml净化提取液，加入20μl乙酸，氮吹至干，用1ml乙酸溶液复溶，过微孔滤膜，上机分析

（过柱速度≤2mL/min）

三、色谱条件

01 液质色谱条件

       色谱柱：Athena UHPLC C18液相色谱柱

       流动相：A：0.5mM乙酸铵  B：乙腈

表1 流动相梯度表

       流速：0.2ml/min   

       柱温：30 ℃

       进样量：10μL

质谱条件：

       •离子源：电喷雾离子源

       •扫描方式：负离子扫描模式

       •检测方式：多反应监测（MRM）

02 液相色谱条件

       色谱柱：Athena C18-WP液相色谱柱（LAEQ-461572 4.6*150mm,5um）

       流速：0.2mL/min   

       柱温：30 ℃

       进样量：10μL

       紫外检测器条件：检测波长为276 nm

       流动相：A：0.5mM乙酸铵  B：乙腈（梯度表参见液质）

四、实验谱图

图1 展青霉素标准品MRM谱图

图2 山楂汁加标MRM谱图

五、实验数据

六、实验耗材

       苯并(a)芘又称苯并芘，英文缩写BaP，是碳水化合物、蛋白质和脂肪在不完全燃烧时产生的高活性间接性致癌物质，广泛存在于烟熏、油炸、烧烤、烘焙等食品中。《GB 2762-2017 食品中污染物限量》明确规定，食品中苯并(a)芘限量指标：谷物及其制品不超过5 ppb，肉及肉制品不超过5 ppb，水产动物及其制品不超过5 ppb，油脂及其制品不超过10 ppb。

      《GB 5009.27-2016 食品安全国家标准 食品中苯并(a)芘的测定》规定：试样经过有机溶剂提取，中性氧化铝或分子印迹小柱净化，浓缩至干，乙腈溶解，反相液相色谱分离，荧光检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

方法优势

中性氧化铝柱：ProElut BaP

       迪马科技曾发布过植物油、肉制品、水产品、粮谷等基质中苯并芘检测方案，样品净化使用《GB 5009.27-2016》标准中中性氧化铝柱—ProElut BaP，使用者无需中性氧化铝活度调节，可完全重现标准，具有良好的重现性和回收率结果，用户使用后均反映效果良好。

分子印迹小柱：ProElut BAP-MIP

       在此基础上，迪马科技又开发出《GB 5009.27-2016》标准中另一净化技术分子印迹小柱—ProElut BAP-MIP，并应用于食用油中苯并(a)芘的测定，该方法具有以下优势：

       1)  对苯并芘专一性的吸附保留，优异的回收率及重现性结果；

       2)  能有效去除油脂干扰，除油效果良好；

       3)  分子印迹小柱规格小，溶剂消耗量少；

       4)  方法操作简单，净化速度快，时间短。

       以下为详细解决方案，敬请参考！

食用油中苯并(a)芘的测定

1 适用范围

本方法适用于食用油中苯并(a)芘的检测。

2 标准品配制

标准储备液：准确吸取一定量的500 μg/mL标准储备液(甲苯配)，用乙腈配制成100 μg/L的标准储备液。

3 提取

取0.4 g样品于玻璃离心管中，加入5 mL正己烷，涡旋混匀，待净化。

4 净化

SPE柱： ProElut BAP-MIP 500 mg/6 mL(Cat#: 65939)

(1)活化：依次加入5 mL二氯甲烷、5 mL正己烷，弃去流出液；

(2)上样：将待净化液加入柱中，弃去流出液；

(3)淋洗：加入6 mL正己烷，弃去流出液；

(4)洗脱：加入6 mL二氯甲烷，收集流出液；

(5)重新溶解：将流出液在40 ℃水浴下缓慢通入氮气吹干，加0.4 mL乙腈，混匀，4000 rpm离心1 min，取上清，供HPLC分析。

5 HPLC条件

色谱柱：

Diamonsil C18(2),250 × 4.6 mm,5 μm ( Cat#:99603)

流速：1.0 mL/min   进样量：20 μL   柱温：35 ℃

流动相： 乙腈：水 = 97:3

检测器：荧光  Ex:384 nm      Em:406 nm

6 添加回收结果及色谱图

食用油中苯并(a)芘检测的添加回收结果(%)：

苯并(a)芘标准品(0.5 μg/L)检测的液相色谱图

苯并(a)芘标准品(5 μg/L)检测的液相色谱图

苯并(a)芘标准品(10 μg/L)检测的液相色谱图

添加水平为0.5 μg/kg的橄榄油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

添加水平为5 μg/kg的橄榄油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

添加水平为10 μg/kg的橄榄油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

添加水平为0.5 μg/kg的大豆油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

添加水平为5 μg/kg的大豆油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

添加水平为10 μg/kg的大豆油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

7 相关产品信息

HLB Lim多功能兽残专用净化柱，是采用特殊吸附剂装填而成的一款新型固相萃取柱。

与传统SPE柱相比，它能更加快速有效地去除样品中脂肪、磷脂、色素等多种干扰物，减少基质效应；同时极大简化前处理流程，省去活化、平衡步骤，样品经提取后直接过柱，节省大量时间及试剂，使前处理变得更加简便高效。

本方案采用HLB Lim柱，成功地对蜂蜜样品中10种兽残进行萃取净化，不同水平的加标都能获得较为满意的结果。

样品提取

准确称取均匀的蜂蜜样品2.5 g 于干净离心管中，加入10 mL 5%甲酸乙腈：水= 80:20溶液，涡旋混匀后超声提取10 min，8000 r/min离心5 min，待净化。

样品净化

取1 mL上述上清液过柱，收集流出液，取其中500 μL用10 mM甲酸铵定容至1 mL，上机。

基质标准曲线溶液的制备

选同类型空白蜂蜜样品，按上述前处理方法进行操作，收集过柱流出液，分别取流出液500 μL加入适量兽残混合标准溶液，再以10 mM甲酸铵定容至1 mL，得到合适浓度的基质曲线。

仪器条件

1）色谱条件

仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）

色谱柱：菲罗门 Titank C18 (2.1 mm×50 mm，3 μm)

流动相：A：水（0.1 %甲酸）B：甲醇（0.1 %甲酸）

洗脱方式：梯度洗脱，见表1

流速：0.3 mL/min

柱温：30 ℃

进样量：5 μL

表1 梯度洗脱程序

2）质谱条件

离子源：HESI

电喷雾电压：3500 V

鞘气压力：40 arb

辅气压力：2 arb      

离子传输管：380 ℃

辅气温度：350 ℃

表2 组分名称、保留时间

及特征离子一览表（*为定量离子）

实验结果

表3  10种兽残加标回收实验结果

图1 添加水平为80.0 μg/kg时

10种兽残的总离子流图

表4  10种兽残基质曲线信息

订购信息

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第二步，创建样品组，并勾选每针进样所属的验证测试工作。

第三步，运行样品，得到色谱结果。

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2022年最 新版食品安全抽检实施细则更新了针对于猪、鸡肌肉、肝脏和鱼、虾可食性组织中氯霉素残留检测的检测方法——《GB 31658.2-2021 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》。

逗点生物参照该标准进行试验，并优化了部分参数，建立了一份具有良好回收率及稳定性，能满足国标要求的SPE-HPLC-MS/MS方法，可供参考。

01

样品提取

准确称取粉碎均匀的肉类样品5 g（精确至0.02 g）于干净离心管中，加内标工作液100 μL，加入10 mL 乙腈和10 mL 4% NaCl水溶液，涡旋提取10 min，8000 r/min离心10 min。

取出上清液于另一干净离心管，向离心管中加入10 mL正己烷，涡旋震荡1 mim，8000 r/min离心2 min，弃上清液，于离心管中加入8 mL水饱和的乙酸乙酯溶液，涡旋震荡2 min，8000 r/min离心2 min，取出上层清液，氮吹干，用5 mL 5%乙腈-水溶液复溶，待净化。

本方案所运用到的氮吹仪器

点击上图直接跳转至对应文章

02

样品净化

Copure® C18，500mg/3mL

活化：取固相萃取柱依次用5 mL甲醇，5 mL水进行活化；

上样：将上述待净化液加入固相萃取柱中；

淋洗：分别取6 mL水分两次淋洗固相萃取柱；

洗脱：加入8 mL甲醇进行洗脱，收集全部洗脱液，氮吹干，1 mL 50%甲醇水溶液复溶，过尼龙滤膜，上机。

03

标准曲线溶液的配制

内标CAP-D5工作液：50 ng/mL，氯霉素工作液10 ng/mL、50 ng/mL。

表1 标准溶液配制方法

04

仪器条件

（1）色谱条件

仪器：UPLC-MS/MS

（Thermo Fisher TSQ Endura）

色谱柱：Hypersil GOLD C18

 (2.1 mm×100 mm，1.9 μm)

 流动相：A：水  B：甲醇

 洗脱方式：梯度洗脱，见表2

 流速：0.3 mL/min

 柱温：30℃

 进样量：20 μL

表2 梯度洗脱程序

（2）质谱条件

离子源：HESI          电喷雾电压：3500 V

鞘气压力：40 arb      辅气压力：10 arb

离子传输管：380 ℃   辅气温度：350 ℃

表3 组分名称、保留时间

及特征离子一览表（*为定量离子）

05

实验结果

表4  氯霉素加标回收实验结果

图1 添加水平为0.1 μg/kg时

猪肉中氯霉素的总离子流图

图2 添加水平为0.1 μg/kg时

鸡肉中氯霉素的总离子流图

图3 添加水平为0.1 μg/kg时

虾肉中氯霉素的总离子流图

06

订购信息

又到一周现货上新时间，本周CATO现货产品，综合整理往期需求较大的工业、食品、农残、兽残及环境等检测标准品，推出ZX一期热门现货产品。

CATO上新标准品现货

※了解更多相关现货标准品及产品详细信息请联系我们020--81960175，或者浏览我们的网站ch.cato-chem.com进行查询。

       本期产品热点：由于受高温潮湿天气影响，河粉、肠粉、米线、银耳和木耳等食品容易受椰毒假单胞菌污染而产生米酵菌酸毒素。

       米酵菌酸是椰毒假单胞菌酵米面亚种产生的一种可能引起食物中毒的毒素，发酵玉米面制品、变质鲜银耳及其它变质淀粉类制品是引起中毒的主要原因，银耳中米酵菌酸的限量值为0.25mg。

       为预防米酵菌酸毒素中毒，近日广东省市场监督管理局特发布相关食品的消费提醒。米酵菌酸中毒不可小觑，其引起的中毒发病急，潜伏期一般为30分钟至12小时，少数为1至2天。怀疑发生疑似中毒，应立即停止食用可疑食品，尽快催吐，排出胃内容物，以减少毒素的吸收和对机体的损伤，并及时送医院救治，对症ZL。

       本周CATO现货产品，ZD推出米酵菌酸标准品并整合往期需求较大的工业、食品、农残、兽残及环境等检测标准品，推出ZX一期热门现货产品。

CATO上新标准品现货

1、产品介绍

农药残留、兽药残留速测卡是一种利用竞争抑 制免疫层析的胶体金快速检测卡，其原理主要为：样品中的药物残留经提取后与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑 制了抗体与速测卡中检测线（T线）上偶联物抗原的结合，从而产生检测线颜色深浅的变化；通过对比检测线与控制线（C线）颜色深浅，对样品中药物残留进行定性或半定量。

农兽残速测卡具有操作简单、检测时间短等特点，广泛用于食品中农药残留、兽药残留的快速检测领域。

2、产品特点

操作简便

3、使用步骤

1．测试前将未开封的检测卡和样本恢复至室温；

2．从原包装铝箔袋中取出的检测卡，在一小时内使用；

3．将检测卡平放，用一次性塑料吸管垂直滴加3~4滴无气泡样品液(约80~100µl)于加样孔中；

4．液体流动时开始计时，5分钟后根据示意图判定结果，其它时间判读无效。

（读取结果时，检测卡水平置于观察者正面）

4、结果判定

1．阴性：质控线（C）显示红色条带，检测线（T）也出现红色条带；

2．阳性：质控线（C）显示红色条带，而检测线（T）无红色条带出现。

3．无效：质控线（C）不显色；可能是操作不当或者检测卡失效，建议用新的检测卡重新检测。 

5、订购信息

报名方式

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