紫外分光光度法测定蛋白质含量的方法有何优缺点受哪些因素的影响和限制

聚六亚甲基双胍盐酸盐（PHMB）是一款广谱、su效杀菌剂，具有持久的杀菌能力，应用范围十分广泛。PHMB用于配制消毒剂和清洁剂，适合医用、隐形眼镜护理液、个人护理用品、食品、饮料和家用消毒。本实验用紫外分光光度法测定样品中PHMB的含量。

1、方法原理：

PHMB分子在236nm处有紫外吸收，吸收强度与PHMB含量成正比。根据朗伯-比尔定律对其进行定量分析。

2、主要仪器及试剂

1）紫外可见光分光光度计：上海仪电分析仪器有限公司；

2）分析天平：万分之一；

3）容量瓶：100mL、1000mL；

4）PHMB标准品：Vantocil ⅠB，20% w/w；

5）PHMB待测样。

3、实验步骤

3.1样品制备：

称取样品0.50±0.02g（精确到0.1mg）于100mL容量瓶中，用纯水稀释至刻度，摇匀。再移取此溶液1mL于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。测定步骤同上。待测样品测得的吸光度，根据标准曲线计算得出待测样品中PHMB的浓度含量。

3.2标准曲线绘制

（1）100 ppm标准储备液：精密称取PHMB标准品0.50±0.02g（精确到0.1mg）于1000mL容量瓶中，用纯水稀释至刻度，摇匀。

（2）标准工作液系列：2、5、10、15、20ppm；

（3）在236nm波长处，用10mm比色皿，以蒸馏水为参比，一一测定对应的吸光度，以PHMB的浓度对吸光度绘制曲线。

3.3标准系列及曲线

4、分析结果的计算

4.1 样品中有效成分计算公式

ω=ρ*v/m*100%

式中：ω——样品中有效成分PHMB的质量分数，%；

          m——样品的称取量，mg；

          ρ——从标准曲线上得到待测溶液的质量浓度，μg/mL；

          V——待测样品的定容体积，mL。

4.2 样品含量检测结果

称取样品0.5118g，超纯水定容至100mL。再取1.0mL，超纯水定容至100mL。上机测定，检测结果为8.027μg/mL。即15.68%。