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- kyuanigew62 2017-07-11 00:00:00
- PCR产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液体面摩 擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样 枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝,因而由 其造成的污染是一个值得特别重视的问题.
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前言
在PCR检测过程中,不可否认的是,没有任何检测是100%准确的,比如我们可能也曾听过假阳性这个名词,那为什么会出现假阳性呢?这其实跟实验操作过程造成的污染相关,在实验开展过程中,主要有4种污染途径:标本间交叉污染、PCR试剂污染、PCR扩增产物污染、实验室克隆质粒污染。
如何对污染进行监测?
1. 阳性对照
在建立PCR实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照,它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否符合理论要求的一个重要的参考标志,阳性对照要选择扩增度中等、复性好,经各种鉴定是该产物的标本,如以重组质粒为阳性对照,其含量宜低不宜高(100个拷贝以下),但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳性标本,其对检测或扩增样品污染的可能性很大,因而当某一PCR试剂经自己使用稳定,检验人员心中有数时,在以后的实验中可免设阳性对照。
2. 阴性对照
每次PCR试验务必做阴性对照,它包括:①标本对照,被检标本是血清就用鉴定后的正常血清做对照,被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞做对照;②试剂对照,在PCR试剂中不加模板DNA或RNA,进行PCR扩增,以检测试剂是否污染。
3. 重复性实验
4. 选择不同区域的引物进行PCR扩增
如何避免PCR污染?
实验室防污染是重中之重,毕竟影响最终检测结果,那么我们有哪些防污染的方法呢?
除了注意避免人工操作引入的污染,我们在实验时应设立适当的阳性对照和阴性对照,阳性对照以能出现扩增带的标准病原体核酸为宜,并注意交叉污染的可能性,每次反应都应由一管不加模板的试剂对照及相应不含有被扩增核酸的样品作阴性对照。同时减少PCR循环次数,PCR产物达到检测水平就适可而止。
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- 怎样操作多样品组织研磨仪可有效提高研磨效果
日常实验室样品研磨,都会选择研磨设备来对其进行操作,那该怎么操作,可在其基础上有效提高对图片的研磨粉碎效果呢?相信你们也一定急需这样的答案,今天就来应用多样品组织研磨仪来聊一聊。
多样品组织研磨仪的高速运转和其磨球的运动相叠加,可使样品更充分地混合,当在罐中放置多个小磨球时,球与球之间的碰撞和摩擦可使样品更有效地进行破碎。与研磨设备相对应的研磨罐应用,可有效确保能量的有效输出,在冲击力摩擦力及循环运动的配合下,可大大缩短样品的超细研磨时间。在水平方向做圆弧径向振动,在惯性作用下研磨设备内的磨球可撞击样品,使其样品可连续做往复冲击运动,直至对其达到所需粒径。
对待样品的粉碎研磨,可选择对样品的干磨、湿磨或低温冷冻研磨,其配有研磨罐和适配器,可对多个样品同时进行研磨处理,非常适合应用对生物样品的细胞破碎和DNA/RNA的提取。
因其研磨设备新颖的水冷却系统可快速散热,在设备高速运转时,无需担心样品在研磨过程中的温度过高;多样品研磨仪可满足对试样的纳米级研磨及其合金的研磨需求,该研磨仪器配有电磁锁,自动中心定位及安全锁紧装置可保证研磨套件快速到位,在控制板上可直接选择工作模式,设置样品研磨参数,数字化显示,可保证样品研磨结果的可重复性,实验参数可储存,使研磨更规范、更高效。
想要有效提高应用多样品研磨仪的研磨效果,那上述的一些小操作应用可都是在研磨中非常给力的行动操作,不但简单,还可快速高效的完成样品研磨,有效提高试样的研磨效果。
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