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有没有办法可以测定细胞内ATP含量

水瓶LDC189 2016-12-29 16:16:46 396  浏览
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  • 619CZY 2016-12-30 00:00:00
      有没有办法可以测定细胞内ATP含量   ATP检测试剂盒(ATP Assay Kit)可以用于检测普通溶液、细胞或组织内的ATP(adenosine 5'-triphosphate)水平。细胞和组织样品一步裂解即可完成样品制备,检测灵敏度高达1nmol/L,化学发光可以持续稳定达30分钟,并且获得的样品还可以同时进行Western检测。   ATP,作为Z重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP水平的改变,会影响细胞的功能。通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下,ATP水平会下降,而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内ATP水平。通常ATP水平的下降表明线粒体的功能受损或下降,在细胞凋亡时ATP水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生。   样品制备非常简单。本试剂盒提供了可以用于细胞和组织裂解的ATP检测裂解液,简单裂解后即可用于ATP检测。无需进行高氯酸或三(TCA)抽提,或样品裂解后的煮沸等繁琐操作。

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测定方法

样品加入盐酸后采用水蒸气蒸馏,以过氧化氢溶液吸收蒸馏释放出的二氧化硫,通过0.45 μm 滤膜和Ag 柱去除杂质,采用阴离子交换色谱柱分离,以KOH淋洗液洗脱,用电导检测器测定。

主要仪器

离子色谱仪

测定仪器工作条件方法

分析柱:阴离子色谱柱(250 mm×4 mm),保护柱(50 mm×4 mm);淋洗液:KOH 溶液,由淋洗液自动发生器在线产生,浓度20 mmol/L,流量为1.0 mL/min; 阴离子YZ器:ASRS 300–4 mm 型,YZ电流为50 mA ;电导检测器;池温:35℃;柱温:30℃;进样体积:25 μL。

标准溶液配制

系列硫酸根标准工作溶液:用超纯水将硫酸根标准溶液逐级稀释至质量浓度分别为1.80,3.60,7.20,14.40,18.00 mg/L 的系列硫酸根标准工作溶液。

二氧化硫标准溶液:称取0.196 9 g 无水亚硫酸钠,加入2 mL 甲醛,加水溶解并定容至100 mL 容量瓶中。吸取10.00 mL 亚硫酸钠溶液于250 mL碘量瓶中,加入100 mL 水,准确加入20.00 mL 浓度为0.1 mol/L 的碘溶液和5 mL 冰乙酸,摇匀,放置于暗处,2 min 后以硫代硫酸钠(0.1 mol/L) 标准溶液滴定至淡黄色,再加入0.5 mL 淀粉指示液,继续滴定至无色。同时做试剂空白试验。按公式X=(V0–V1)×cN×32.03/10,其中cN 为Na2S2O3 的浓度,计算得到二氧化硫标准溶液的浓度。


样品处理

称取10 g 粉碎、混匀后的样品置于全玻璃蒸馏装置的圆底烧瓶中,加入30 mL 水,摇匀,沿瓶壁加入10 mL 盐酸溶液(1+1),迅速密塞,接入水蒸气蒸馏。馏出液导入100 mL 容量瓶中,吸收管下端插入吸收液液面以下,以20 mL 3% 过氧化氢溶液为吸收液,将释放出的二氧化硫转化成硫酸根,收集馏出液约100 mL,取下定容至标线。取部分馏出液经0.45 μm滤膜和IC Guard Ag 固相萃取小柱过滤(小柱使用前分别用10 mL 去离子水活化),弃去3 mL初滤液,续滤液收集到样品瓶中,待测。

计算公式

样品中二氧化硫含量按下式 计算:

式中:W——样品中二氧化硫的含量,mg/kg ;

c1——硫酸根的质量浓度,mg/L ;

V——定容体积, mL ;

m1——样品的质量,g。

测定结果

在优化的色谱条件下,硫酸根标准溶液的质量浓度在1.80~18.00 mg/L 范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.999 7,硫酸根的检出限为0.006 mg/L。样品的加标回收率为76.9%~92.3%,测定结果的相对标准偏差小于10%(n=6)。


(来源:青岛普仁仪器有限公司)


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