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气相色谱仪如何检测漏气?具体详细的操作步骤?

hebyoldxy 2012-07-05 14:41:30 517  浏览
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全部评论(4条)

  • jiming208123 2012-07-06 00:00:00
    听声音,用于漏气比较严重的时候。(换柱子,换进样垫,清洗内衬管时没密封好)多为人为因素。 在气相色谱变动过的气路接口处用肥皂水涂抹,冒泡说明漏气。 观察稳流阀的流量显示,箭头明显回落的则可能该气路漏气。 用皂沫流量计测流量。

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  • 明SaME赱 2012-07-13 00:00:00
    问题好像很简单啊,从供气气瓶压力阀(高压表、低压表),气路上的接头、分气阀、进色谱的接头,色谱仪内部的表(一般安气路时测试过就可以了),柱箱内(所用色谱柱与进样口及检测器的接头)这些部位用试漏液(商品也可以自制,水+一点洗涤剂,)在供气的状态下都点到。冒泡就说明漏,紧固或者重新连接。平时检查只需要检查气相色谱仪外部的气路接头就可以了。

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  • 啊健身房地方 2012-07-06 00:00:00
    气相色谱仪,在气体检测的方法暂时来说是Z高端,Z可靠的。精度是很高的。能检测到很低的浓度。 具体操作方式是: 1、开机 2、要是机子是扩散式检测的方式的话就只要注意看显示屏,要是是管道式的话就先通气然后注意显示屏读数。 3、只要有读数了一般就是有气体泄漏了。

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  • 石上清泉1118 2017-11-25 00:00:00
    一般来说,你在安装完毕后,或是好久没有使用的仪器以及出现的状况很象漏气时才有必要进行漏气检查。而出现漏气情况多是感觉流量使用过大,或是仪器无法准备好,或是有漏气报警等。 漏气点其实是很有限的。 载气来说,有以下几个点,钢瓶与压力表连接处,压力表与管线连接处,管线与净化气连接处(含进口与出口)、三通接口、与气相色谱EPC接口(含进口与出口)、分流进出口、色谱柱接口及色谱柱与检测器接口。 检测漏气的办法很简单,就是把仪器打开后不升温,保证载气通过,然后取一瓶皂液(可以自己配,用点洗衣粉加些水就行,也可以买来用,买的效果好,用后不留痕迹)分别在这些接口处涂一些泡沫,注意,不要弄太多的水,尽量用泡沫,看哪个地方有气泡吹起来,哪就是漏点了。其实,Z常见的漏点,就是气瓶处和进样口。而进样口,柱温箱内还有检测器等一般不建议用皂液,除非实在无法找到漏点了,再进行全面涂皂液检查,而通常的做法是通过更换进样垫或拧紧进样垫的办法解决就行了,或是在重新上一下柱子,毕竟在柱温箱里,在里面涂皂液不但不方便,而且加热的情况下有水对柱子也不太好。检测器处也是一样,通过重新上柱子的办法就解决了。 至于空气和氢气用同样的办法来解决。

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2011-02-16 01:43:30 839 2
环氧乙烷残留检测气相色谱仪操作流程

在医疗用品及Y疗器械生产中,主要采用环氧乙烷熏蒸的方法进行消毒处理。环氧乙烷(简称EO)为广谱低温灭菌剂,可以在常温下杀灭各种微生物,具有穿透力强,灭菌效果好等特点。但是环氧乙烷具有一定的毒性,因此,利用气相色谱仪测定医疗用品及Y疗器械中残留环氧乙烷含量非常重要。在所有口罩、防护服及医疗器械生产企业加班加点赶制产品的同时,需要做到的是,不止在生产数量上达到要求,还要提供质量上的保障。

对于此项分析检测任务的气相色谱仪不尽相同。润扬仪器公司配置顶空进样-FID检测器气相色谱仪GC-2020型,由于仪器全部采用模块式集成芯片设计(全仪器没有任何一只晶体管),稳定性、重复性、准确度得到大幅提高,得到广大客户的普遍赞誉,其产品遍布山东、云南、新疆、河南、河北、天津、陕西、山西、湖南、广东、内蒙古及东北三省。

为便于口罩、防护服及Y疗器械生产企业便于此项任务的分析应用,润扬仪器分析工程师总结出GC-2020环氧乙烷残留检测气相色谱仪操作流程分享给大家参考,希望有所帮助。

硬件部分

1. 打开气源(氢气、空气、氮气)

打开氮气钢瓶(40升高纯气体)总阀(采用顶空进样一般配置钢瓶气),一般旋拧2~3圈即可,再打开分压阀,将钢瓶分压表压力调至0.3MPa左右;打开氢气发生器RYH-300和空气发生器RYA-2000电源开关。

2. 开机加热稳定(柱箱、进样口1、检测器)

打开顶空进样器AHS-16电源开关,顶空条件在出厂前已经设定好,仪器将自动升温,然后打开气相色谱仪电源开关,进入温度控制界面,把柱箱、进样口1、检测器三个温度后面的状态“关”调为“开”(0是关,1是开),仪器会自动按照已设定的温度进行升温(最右侧会显示向上箭头),当实际温度和设定温度达到一致后,三个温度都显示“=”,代表温度就绪。

3. 仪器点火

当气相色谱仪温度就绪后,按一下“点火”按钮,查看色谱工作站基线,如果出现高度差,则说明点火成功。

软件部分

双击电脑桌面上N2000在线工作站,勾选通道1,确认,进入工作界面:实验信息、方法、数据采集,点击“数据采集”,横坐标为时间,纵坐标为电压,点击右侧上方“查看基线”,当基线平稳后(近乎一条直线)方可进样分析。

样品制备(以口罩为例)

称取口罩样品1g,记下称重量为m,剪成1cm见方碎片放入顶空瓶中,用移液枪加入5ml水(纯水),压盖,放入顶空进样器中,加热预计20min,即可进样分析,工作站会根据校正曲线求出结果记为C,单位为ug/ml,其计算公式为:5×C/m,计算结果单位为ug/g(单位质量环氧乙烷残留量),如果不超过10ug/g即为合格(YY0469-2011,YY/T0969-2013,GB19083-2010)。

关机

把气相色谱仪操作界面上柱箱、进样口1、检测器三个温度后面的状态“开”调为“关”,仪器开始降温,关掉氢气发生器和空气发生器开关电源,关掉顶空进样器电源,代色谱仪柱箱温度降至60℃以下,即可关闭色谱仪电源,蕞后关上氮气钢瓶开关旋钮。

EO标液浓度10mg/ml(10000ug/ml),校正曲线6个点浓度

1 ug/ml              0.5ul———5ml水

2 ug/ml              1.0ul———5ml水

4 ug/ml              2.0ul———5ml水

6 ug/ml              3.0ul———5ml水

8 ug/ml              4.0ul———5ml水

10 ug/ml             5.0ul———5ml水


2021-09-30 15:35:42 1800 0
线虫显微注射如何操作?超详细实验步骤快来码住

秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)是研究动物遗传、个体发育和行为活动的重要模式生物,能够研究从分子细胞水平到整体系统水平的相关生命活动的作用机理。显微注射技术使用尖 端开口直径为微米级的玻璃微管,将核酸注入线虫的性腺,进而被成熟的卵细胞吸收,以染色体外遗传物质的形式存在。而显微注射技术是线虫领域的核心技术,广泛应用于研究线虫的基因表达、功能和基因间的相互作用等。

(图片来源于摄影师马克奥-西奥卡)

实验仪器及试剂

主要仪器包括:

显微操纵器、拉制仪、注射泵、体式显微镜或倒置显微镜等。

试剂耗材包括:

琼脂糖、矿物油、带芯玻璃管、载玻片、拾取针、恢复缓冲液、OP50培养基、加样针等。


实验步骤

01、制备琼脂糖固定板

移液枪取约50μl加热溶解的2%琼脂糖溶液滴在24mm×60 mm的载玻片上,用另一载玻片轻压其上(小心气泡产生),待琼脂糖凝固后(约5分钟),将上面的玻片从侧面滑下即可。将制作好的琼脂板室温过夜或80℃干燥1小时后可叠放起来备用。

图:琼脂糖固定板的制备[1]。A. 用两条胶带将载玻片固定在干净的工作台上;B. 在载玻片中间滴一滴约50μl新鲜热熔2% 琼脂糖溶液;C. 将显微镜载玻片放在琼脂糖滴上,轻轻按下使其变平。琼脂糖凝固并取出显微镜载玻片。

02、制备注射针

注射针对于注射成功与否至关重要,使用水平拉制仪通过调节速度、拉力等参数可稳定获得两根相同的注射针,建议使用有芯玻璃管进行拉制,其芯能够使注射液迅速充满针头尖端,可以很好的排出气泡。注射针的锥度一般5-7mm,尖端0.5-0.9μm。

MP-500有着前卫智能的操作界面及加热片限位槽等人性化设计,集安全性与人性化于一体,轻松满足微电极相关实验的需求。


03、制备注射液并加入注射针

根据实验需求,选择拟注射的物质,包括DNA、RNA、蛋白质等。注射物的纯度是转入效率高低的重要影响因素之一。通过注射针的尾端,用细长的加样针将注射液灌入,等待数分钟,观察针尖有无气泡。

04、注射体积校准

将注射针装到注射泵上,吸入待注射液。在显微镜视野中心放一把微尺,上面放置一个装适量矿物油的4厘米的培养皿。将注射针浸入矿物油中,注射一次得到一个液滴球,通过微尺测量球体直径计算出注射的体积,调整注射液滴的大小使其符合所需的直径。1 nL液滴的半径为0.062 mm (V = 4/3πR3)。

瑞沃德R480玻璃微电极注射泵,注射精度高,运行稳定,密封性良好,保证注射过程不会出现漏液情况。


05、破针

将玻片放在加入注射油的琼脂垫上,移动微操使注射针与玻片边缘相撞,注射针尖端被撞破,可观察到有液泡自动渗出,该方法更易于刺入线虫体内。

06、固定线虫

一般挑选即将产卵或体内有少量卵的年轻成虫进行注射,此时期性腺发育成熟,较易被DNA 转染从而产生转基因后代。使用拾取针将线虫挑至琼脂糖固定垫上,调整位置使性腺暴露,滴加注射油覆盖整个虫体。固定操作要迅速,否则线虫容易脱水而死。

图:固定在固定板上并准备注射的线虫。箭头表示在性腺中注射首 选部位。比例尺为50μm[1]

07、注射

将琼脂糖固定板放在载物台上,显微镜下找到线虫,调整焦距,将性腺部位聚焦在正确的平面。使用微操,将注射针尖刺入性腺。启动微量注射泵进行注射,能观察到注射液在性腺中快速流动,注射后的性腺被液体充满。

图:显示注射物注射前(1)和注射后(2)的流动。箭头标记性腺中的区域,注射物到达的位置[2]

MM-500电动显微操纵器与显微镜配合使用,可以完成人手不能从事的精细运动的显微操作,体积小巧轻便,人性化中英文操作界面,操作起来更便捷。


08、恢复

在体视显微镜下,滴加恢复缓冲液至注射后的线虫。一般等待2-5 min,线虫活力恢复,即头部左右摇摆,身体开始游动,即可挑至培养板上,进行20℃常规培养。

瑞沃德提供MP-500程控水平电极拉制仪、MM-500电动显微操纵器、R480玻璃微电极注射泵组合方案,可对斑马鱼、线虫等胚胎、幼体进行超精细显微注射。

瑞沃德注射系统

注意事项[2]

a.琼脂糖固定板:若线虫在琼脂糖固定板上短时间内死亡,则说明固定板过于干燥,可换琼脂糖层稍薄的固定垫,因为琼脂糖的主要作用是吸收线虫的水分;若线虫无法粘牢,则说明固定垫太湿或太薄,可继续在烘箱内放一段时间,或将线虫先粘在固定垫上后加油;

b.注射物质:注射DNA使用前要混匀并离心以避免杂质阻塞针头。注射DNA的总浓度一般控制在200mg/L以下,因为较高浓度的DNA可能产生毒性或过量表达,从而影响下一代的表型恢复;

c.注射角度:注射针与性腺最 好呈锐角,推荐与头部或尾部几乎平行或呈15℃角;

d.实验样本:被注射的线虫需要保证其食物充足,生长状态健康;

f.注射后线虫死亡率高:注射后等待恢复的时间过短或太长;可能是注射针尖太粗或注射DNA 被污染。针对此原因,可使用较细注射针,每次只注射一侧性腺,若注射操作正确,但不产生转基因线虫,则可能是转基因致死或注射核酸污染,可重新纯化。

【参考文献】

[1] Matthias Rieckher and Nektarios Tavernarakis. Generation of Caenorhabditis elegans Transgenic Animals by DNA Microinjection [J].Bio Protocol, 2017, 7(19): e2565.

[2] Krishna S. Ghanta et al., Microinjection for precision genome editing in Caenorhabditis elegans[J].Star Protocols, 2021, 2(3): 100748.


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