谁有细胞传代培养具体的操作步骤和注意事项

　　大鼠Elisa试剂盒操作注意事项与步骤

　　大鼠Elisa试剂盒注意事项:

　　1. 大鼠Elisa试剂盒冻结与寄存：-20℃取出后主张放入2～8℃冰箱中冻结约，每隔一段时间悄悄摇晃均匀，不可直接放入温度较高处冻结，防止因温度改变太大，形成蛋白质凝聚而出现沉积，血清的质量下降。若短期无法用完一瓶，主张无菌分装,再放回冷冻，防止反复冻融。4℃长时间保存后血清中的变性脂蛋白及纤维蛋白，形成絮状物质变差。

　　2. 大鼠Elisa试剂盒是否灭活：加热可灭huoxue清中补体系统，在极少数情况下(培育ES细胞，滑润肌细胞时)主张灭活，在培育其余细胞时不主张灭huoxue清。血清灭活十分简单产生沉积，如必须灭活请按56℃，30 min，轻微摇晃准则操作，灭活温度高、时间长、摇晃不均都简单产生沉积。

　　3. 大鼠Elisa试剂盒培育基：无血清培育基在结果重复性、细胞体外分化方面有优势，可是，血清仍然是培育液中最根本的添加物，尤其是在原代培育或细胞成长状况不良时，常常会先使用有血清的培育液进行培育，待细胞成长旺盛后再换成无血清培育液。

　　大鼠Elisa试剂盒操作过程 ：

　　1.用盖片镊人Elisa试剂盒将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭洁净，不要用纱布;

　　2.将盖玻片悄悄放入6孔培育板(每孔一片)或培育皿中(每个平皿可放置2-3片);

　　3.在间隔紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

　　4.将通过计数的细胞悬浮液移入培育板中，使盖玻片彻底浸在培育液中;

　　5.将人Elisa试剂盒培育板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞成长至覆盖培育板底部2/3面积时，将培育板取出，用盖片镊悄悄取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

　　大鼠Elisa试剂盒操作注意事项与步骤先和大家介绍到这，如果想要了解更多Elisa试剂盒的信息，可以关注天津本生，本生给生物医药客户提供生物实验室检测试剂及耗材，欢迎广大客户来询。

来源：https://www.mshot.com/article/1235.html

试验操作步骤：

1、 把测试电流主机数据线和加热装置数据线，分别与电脑连接好

2、 把电极线与电流主机连接好，（红色线-电压，黑色线-接地，BNC接头-电流） 

3、 把测试试样平整放置在平板电极上，并把上电极居中放置好

4、 打开烘箱开关，和测试电流主机电源开关（建议供电后预热几分钟）

5、 打开试验软件，输入试验参数后，点开始试验

6、 试验结束后，会有提示，可以对数据进行保存和导出。

7、 连续做下次试验时，只需要更换试样即可。

设备组成：

1、高电阻微电流测量仪

2、电热恒温加热试验箱

3、测试电极

4、测试系统

注意事项

   1、开机顺序：先开主机，再打开软件

   2、试验环境：好是通风环境

   3、加热功率：大于1.5KW

   4、测试过程：测试过程中，不要触摸数据线

   5、屏蔽干扰：远离有磁场干扰的测试设备

　　本生阐述：elisa操作步骤说明及注意事项

　　酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA)，指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。要知道elisa操作步骤首先我们先了解一下elisa的原理是什么。

　　elisa的原理：

　　①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

　　②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性， 又保留酶的活性。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体 上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物， 产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据焰色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到 很高的敏感度。

　　elisa操作步骤：

　　方法一　用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

　　1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

　　2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

　　3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

　　4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

　　5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越 强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则 410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

　　方法二　用于检测未知抗体的间接法：

　　用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日 洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔 中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体

　　以上是elisa操作步骤，那么在elisa操作步骤的操作步骤中需要注意什么呢?下面是elisa实验的注意事项：

　　1.正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

　　2.在elisa操作步骤中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括：固相载体的选择、包被抗体(或抗原)的选择、酶标记抗体工作浓度的选择、酶的底物及供氢体的选择

　　elisa试剂盒 本生(天津)健康科技有限公司是一家从事健康科技技术开发销售的公司，本生生物公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准。本生(天津)健康科技有限公司由具有行业背景和丰富市场经验的业人士组成，于为生命科学研究域提供产品，为广大科研工作者提供服务。 既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。

　　细胞培养皿的用途和注意事项!

　　玻璃培养皿/塑料培养皿，本生(天津)健康科技有限公司供应：移液器吸嘴，ELISA试剂盒，动物血清，全系荧光定量PCR耗材，产品包括：PCR单管、八联管、96孔板、384孔板。

　　培养皿简介：

　　培养皿是一种常用的玻璃仪器，主要用于微生物或细胞培养的一种器皿，由一个平面圆盘状的底和一个盖组成，一般用玻璃或塑料制成。玻璃培养皿可以用于植物材料、微生物培养和动物细胞的贴壁培养也可能用到。塑料的一般是聚乙烯材料的，有一次性的和多次使用的，适合实验室接种、划线、分离细菌的操作，可以用于植物材料的培养。

　　培养皿常用规格：60mm、75mm、90mm、100mm、120mm、150mm

　　培养皿使用注意事项：

　　培养皿质地脆弱、易碎，故在清洗及拿放时应小心谨慎、轻拿轻放。使用完毕的培养皿及时清洗干净，存放在安全、固定的位置，防止损坏、摔坏。

　　培养皿用途：

　　主要用于盛载液体培养液或固体琼脂培养液进行细胞培养的玻璃或塑料圆形器皿。

　　主要适用于防疫站、医院、生物制品、食品工业、制药工业等单位，用于细菌的分离培养、抗菌素效价检验和定性检验分析。在农业、水产等科学研究用于对种子发牙、植物、昆虫、鱼种的人工培养、孵化研究。电子工业或其它行业作为器皿使用。

　　当然比较严谨的操作就是一只手(通常是左手)打开培养皿的盖子,打一个角度就可以,然后用无菌长吸管将培养液吸走,然后再换一根习惯加入新鲜的培养基,加的的时候尽量不对着细胞直吹,对着皿的侧壁吹,使之流入培养皿.离酒精灯近点当然好,但也别太近了,塑料的容易遇热变形.

　　其实在我看来真的不需要那么严谨,我就是打开盖子然后直接把培养皿反过来把培养液倒入废液缸,也没有污染嘛.无论是换液还是别的操作,重点就是手尽量不要碰任何瓶、皿的口,尽量离远点.我本人就是先一只手掀盖,一只手把皿夹起来,然后托底翻过来,把旧培养液倒出去就可以加新的或者用D-Hanks洗一洗了.

　　当然条件好的话(比如有钱买各种无菌长吸管)当然严谨点好,我觉得只要不碰瓶口,尽量不在敞口的时候手从瓶子上面经过就OK.

　　关于细胞铺匀，我铺293t

　　我的方法是消化，消化好，直接加进去，让他覆盖底面积就好不要晃

　　方法：

　　1，先在空班里加入培养基润一下，然后加入细胞

　　2，直接加入细胞，然后在班里吹吹

　　3，加入细胞，晃上下左右，突然停

　　方法度应该可行，但不同的人感觉不同，所以最终结果也不同。

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