酶底物法快速检测水中菌落总数结果准确性考究

　　菌落总数(Totalcoliforms)是判定水质被细菌污染程度的重要指标之一，其测定方法也有一定的标准。平皿计数法是早期传统的水中菌落总数标准检测方法，其应用研究也比较多，如钱冬梅应用平皿计数法测定了生活饮用水中的菌落总数。这种方法实验步骤较为繁琐，对操作人员的专业水平要求比较高，不适用于应急快速检测，无法对水的卫生状况做出快速评价。

　　酶底物法是近些年来新兴的水中菌落总数检测方法，操作简便，结果易判断，适用于快速检测。但不少用户对此种方法存疑，不知道这种方法出来的检测结果是否科学准确，下面优尔普就以平皿计数法的检测结果为准，用酶底物法程控定量封口机进行实验检测对比。

立科酶底物法程控定量封口机

酶底物法快速检测水中菌落总数实验

一、实验操作部分

1、实验原理

　　酶底物法使用的复合酶技术培养基包含多种独特的酶物质，每种酶物质都针对不同的细菌酶设计(包含普遍的水介传播细菌)，所有的酶底物被分解时均产生相同的信号。在检测菌落总数时，这个信号显示为365纳米紫外4O城镇供水NO.22013灯下的荧光。

2、材料与试剂

　　立科定量盘、lmL移液管或移液枪、10mL移液管或移液枪、培养箱(35±1)、6瓦366FIITI紫外灯、紫外灯箱(23cmx30onx17on1)、无菌水。

3、方法步骤

酶底物法检测方法操作步骤

(1)首先向100mL装有固体培养基的瓶中加入无菌水至刻度，摇匀，制成液体培养基，然后放置在冰箱中保存，使用有效期为5天。见图1。

(2)取1mL水样及9mL液体培养基倒入立科定量盘中。见图2。

(3)将定量盘盖好，在水平桌面上旋动将所有水样分配到定量盘的孔中(孔中的气泡不会影响结果)。见图3。

(4)将定量盘竖起呈垂直90度，将多余的水样由盘内海绵吸收。见图4。

(5)将定量盘缓慢翻转过来，于培养箱中(35±0.5)培养48h(若结果为可疑阳性则延长培养时间至72h)。见图5。

(6)计数：培养完成后将培养盘盖打开，用紫外灯在定量盘上方13on处照射，数显荧光的孔数。对照MPN表得出结果。注意：海绵条显荧光不必记录在读数范围内。由于本方法的Zda检测上限为738MPN/mL，如需稀释时，将结果乘以稀释倍数即为报告读数(如稀释l0倍时的操作为：加入0.1mL样品和9.9mL液体培养基)。

二、结果与分析

1、盲样比对实验--T检验分析

　　选取三个水质检测实验室对比同一盲样(标准试剂)进行酶底物法和平皿计数法比对试验，具体试验结果如图。

EPA标准盲样检测结果

　　对比以上酶底物法和平皿计数法检出共160个结果进行配对T检验，两种方法的配对T检验结果如下表。

配对检验结果

　　标配比变量差值的T检验结果，Mean均值之间的差值为-1.78750，Std.Deviation差值的标准差16.10385，Std.ErrorMean差值的调准误为1.80047，95%ConfidenceIntervaloftheDifference置信区间上下限为-5.37124和1.79624，t-valuet值为-0.993，df自由度为79，Sig(2-tailed)双尾T检验的结果，获得t值的概率P值为0.324，检验结果表明酶底物法和平皿计数法检测结果没有统计学意义上的差别(P<0.50)。

2、水样检测--线性回归分析

　　采集地表水水样进行检测，为保证实验结果的有效性和方便统计，要求检测高、低浓度两个水样，同时，要求低浓度水样的MPN值控制在50MPN/ml左右，高浓度水样的MPN值控制在100MPN/ml左右，分别从国内9个地区采集水样，试验结果如图。

实验室水样检测结果

　　对以上9家实验室用酶底物法和平皿计数法共1160个检测结果进行线性回归统计分析，两种方法线性回归分析见下表。

检测结果线性回归统计分析

　　从图表中可知，标准化回归系数Beta为0.95，表明两组数据相关性较好，两种方法的检测结果具有可比性。检验结果P=0.00，均小于0.05，表明两种方法在检测菌落总数时没有显著差异性，具有等效性。此结果说明酶底物法的测定结果准确、可靠，可以替代平皿技术发作为水中菌落总数的测定方法。

　　从上述实验可以看出，酶底物法快速检测水中菌落总数的检测结果与平皿计数法无统计学意义上的差别，是科学的、有效的、准确的，可以用作评价水质微生物污染的标准依据。酶底物法操作简单，结果判读容易、准确，无需稀释即可检测738个/1mL水样，不仅适用于水源水、饮用水的检测，还适用于应急检测和污水检测，易于推广，可以较好的弥补传统方法的不足。

开始今天的内容之前，先来回答三个问题~

Q1：“今天有好好洗手吗？”

Q2：“今天出门戴口罩了吗？”

Q3：“那今天你使用公筷了吗？”

“公筷公勺”倡议，一直是饮食文化的热点话题之一。那么使用公筷公勺究竟是不是有必要？

近日，杭州市疾控ZX健康危害因素监测所和检验ZX的专家们为此专门进行了一场有趣的小实验。

40分钟，11名专家面对佳肴

只能眼睁睁地看，就是不能动筷

11名疾控专家组成的实验小组就近选择了一家餐馆。健康危害因素监测所检测人员携带了一个蓝白相间的“特殊拉杆箱”——取样箱，里面装有无菌袋、手套、口罩、酒精灯、镊子、剪刀、记号笔等，内部还配备了冰排，可冷藏运输采样标本。

虽然从照片上看有满满一桌子的菜肴，但其实这餐饭，专家一共点了6道菜。

那为什么看起来这么多？

健康危害因素监测所检测人员解释道，每道菜都被分为了两份。一份使用公筷进食，一份不使用公筷进食；另外，还特意点了一道菜，作为空白对照。

这一餐饭，太特别了。一桌人眼睁睁看着菜在跟前晃，但就不能动筷，需要等采样。

检测人员换上了白大褂、帽子、无菌手套，用酒精灯对镊子进行消毒，他需要在动筷前采集食物样本作为本底。每份至少25克样本，经过小心翼翼的严格无菌操作采样后放入无菌样品袋并迅速存放到采样箱冷藏。

每个就餐者都要经过“上岗”培训

动筷子前，还需要再三思考

没想到的是不仅采样费事，吃饭也成了烧脑的技术活。

每个“就餐者”都要经过“上岗”培训，核心要求就是：夹取同一道菜必须使用公筷和不使用公筷交替进行，以Z大限度保证每道菜使用公筷和不使用公筷的两盘被同一人夹取的次数相同。

“要这么小心翼翼地吃饭也真是头一遭”一位参与‘实验’的人员打趣道，生怕一不小心用错筷子前功尽弃。而且大家还不能放开肚子吃，因为每道菜都要留下一小部分待第二次采样。

临近用餐结束，检测人员用同样的步骤再次进行取样。餐前餐后一共取了19份食物样本。

48小时后结果出来了

TA终于露出了马脚

这次实验采集的样本通过冷链运送至实验室后，定量进行稀释，取稀释液加入培养基后培养48小时等待菌落生长。这一系列的高大上的专业操作，Z终是为了检测样本中生长的菌落总数。

如果样本本身携带的细菌较多，那么培养48小时后生长形成肉眼可见的菌落总数也多，反之亦然。

通过菌落总数的比较来反映就餐中是否使用公筷对菜品受微生物污染程度的影响。

48小时后，实验结果出炉了：

实验共对6道菜品食用前后的样本进行了菌落总数的检测，没有使用公筷的菜品菌落总数均高于使用公筷的同种菜品。

使用公筷会明显减少菜品中的细菌污染，不使用公筷的情况下，一方面大家可能会把自身口鼻腔携带的细菌通过筷子传递到菜品上，另一方面也会导致不同菜品本身携带细菌的交叉污染（尤其是冷菜），这些因素都增加了细菌滋长的机会。

比如凉拌黄瓜这类凉菜，因为没有经过高温烹调本身携带的细菌数量会多一些。餐前样本检测结果为14000cfu/g，用公筷的剩菜中为16000cfu/g，没用公筷的则高达45000cfu/g；干锅茶树菇没用公筷的结果为79000cfu/g，而用公筷的只有4600cfu/g。

那我们再来看看那“空白对照”——与剩菜同时采样、但完全没吃过的香辣牛蛙。我们可以发现，经过1个多小时放置，菌落总数受环境影响从开始的60cfu/g增长到130cfu/g，趋近公筷的剩菜中为150cfu/g，而没用公筷的则达到560cfu/g。

专家呼吁：在外就餐时

提倡带上自己的筷子和勺子

在此，专家们还是想提醒广大市民，使用公筷公勺很有必要。它有两个“显而易见”的好处：

一、干净卫生、预防疾病

使用公筷公勺可以避免共同用餐时个人使用的餐具接触公共食物，减少对菜品的污染，降低病从口入的风险，特别是降低胃幽门螺杆菌、甲肝病毒等食源性病原体的传播。在疫情期间，避免混用餐具也能在一定程度上降低病毒传播的风险。

二、减少浪费、文明餐饮

使用公筷公勺可帮助大家养成定量取餐、按需进食的习惯。在外用餐没有吃完的，大家可以放心打包回家。减少浪费的同时，还培养了人们环保节约的良好风尚。

总而言之，无论是杜绝病从口入，保护家人健康，还是倡导餐饮文明，使用公筷公勺都很有必要。

这次疫情的流行对于改变我们传统的中式共餐习惯是一次加强引导的契机（尤其是近日，北京疫情的再次爆发，都需要引起大家的警惕）。关键要转变观念和认识，通过每个人坚持不懈的努力，久而久之，使之成为代代相传的健康生活方式。

*内容来源：杭州疾控、网络，侵删

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