基因扩增技术的实验中常见问题对策

杂交瘤技术又称细胞融合技术，是将两个或多个细胞融合成一个。 融合后形成的杂交瘤细胞承袭了两亲本细胞的特征。 自发的细胞融合很少发生，当加入一种融合剂，如：聚乙二醇（常用）、仙台病毒或溶血卵磷脂后，两种细胞就可发生融合。 首先是质膜互相融合，形成具有两个或多个核的异核体，细胞进一步分裂时，核互相融合，形成了杂交细胞。

杂交瘤技术优缺点：

优点：与传统的免疫动物方法制备抗体相比，利用杂交瘤技术可以制备出高纯度的单抗，并且可以进行单克隆抗体的大量生产。

缺点：a.操作步骤繁琐。b.利用杂交瘤技术生产出的单克隆抗体多为鼠源性，而鼠源性抗体在应用中有诸多问题，例如被人类免疫系统所识别，产生人抗鼠抗体( HAMA）反应、在人体循环系统中很快被清除等。

杂交瘤技术应用：

①诊断应用：单克隆抗体在疾病诊断中发挥了重要作用，其优点在于诊断准确且无交叉反应，例如在乙型肝炎及潜伏的乙型肝炎病毒的诊断中，单克隆抗体能显著减少假阴性的漏诊。

②治-疗载体：单克隆抗体也可作为治-疗疾病的载体。通过与抗肿瘤药物结合，单克隆抗体能在体内选择性集中攻击肿瘤细胞，具有靶向性，从而减少对正常组织的损伤并减轻抗-癌药物的副作用。因此，载药单克隆抗体被誉为“生物导-弹”。

③异种蛋白质问题：目前大多数单克隆抗体为鼠-鼠型，对于人体来说属于异种蛋白质，容易引起排异反应，限制了其在治-疗中的应用。

④人-人型单克隆抗体的研究：为了解决排异问题，研究者正在努力研发人-人型单克隆抗体，以利于其在治-疗中的广泛应用。

杂交瘤技术常见问题解析：

①电融合和PEG融合的区别？

PEG化学融合是利用聚乙二醇分子能够改变细胞膜结构的特性来实现细胞融合的过程。聚乙二醇可以使两个细胞接触点质膜的脂质分子发生疏散和重组，两个细胞接触部位的质膜由于相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而发生细胞融合。电融合则是先通过高频交流电压，使细胞成串珠状排列，实现点接触；然后施加方波脉冲，击穿两个细胞接触部位的质膜，质膜脂质分子发生重组，同时由于细胞表面张力作用，完成细胞融合。电融合法比PEG融合法有明显的优点：细胞融合率高，有利于杂交瘤的筛选；电脉冲击穿对细胞的损伤小，有利于融合后细胞的生长增殖；可直接观察融合过程；便于有目的地控制选择融合条件。

②为什么要推荐进行2~3轮有限稀释获得稳定的杂交瘤细胞株？

阳性单克隆细胞的获得通常进行至少2轮有限稀释，原因主要考虑两点。第一，有限稀释过程中，大多数是通过实验者在显微镜下观察细胞团状态来判定是否是单克隆，存在一定的主观经验值，至少进行两轮有限稀释可以增加判断的准确性；第二，杂交瘤细胞由两个细胞融合而成，存在基因的不稳定性，连续2轮有限稀释，客观上增加了筛选中细胞培养时间，有利于淘汰不稳定的杂交瘤细胞株。

③为什么要使用核酸免疫？

重组蛋白由于免疫靶向明确、剂量可控等优势，通常作为动物免疫阶段的首-选免疫原。但有些重组蛋白因为表达纯化困难，很难大量获得并用于动物免疫；另外，重组蛋白与天然样本之间存在或多少的结构差异。而核酸免疫，跳过了蛋白表达纯化的过程，成功避开了蛋白生产的难题，通过核酸体内表达的蛋白结构也更加接近天然蛋白，故而可以作为重组蛋白免疫的有效补充手段。但核酸免疫的免疫剂量很难判断，整体免疫效价也会普遍低于蛋白和多肽免疫。

④除弗氏佐剂之外，免疫佐剂还有哪些？

免疫佐剂是指那些同抗原一起或预先注入机体内能增强机体对抗原的免疫应答能力或改变免疫应答类型的辅助物质。佐剂的免疫生物学作用是增强免疫原性、增强抗体的滴度、改变抗体产生的类型、引起或增强迟发超敏反应等。除经典的弗氏佐剂外，各类不同功能的佐剂也层出不穷，比较常见的有：1）无机佐剂，如磷酸铝佐剂、氢氧化铝佐剂；2）生物类佐剂，如以细菌胞壁或产物为主要组成的佐剂；3）具有佐剂活性的细胞因子类，如GSF、IL1、IL2、IFN -γ等；4）人工合成佐剂，如cpG等。

⑤杂交瘤融合后主克隆接种96孔细胞培养板数量通常是多少？

融合后的主克隆细胞接种96孔细胞培养板的数量与融合效率和脾细胞多少有密切关系。PEG化学融合后的主克隆，通常一只小鼠的脾细胞可以接种8-15块96孔细胞培养板；电融合因为融合效率大大提高，通常一只小鼠的脾细胞可以接种30~50块96孔细胞培养板。

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本文转自：http://www.easylabplus.com/index-news-describe-html-1111.html

相信经常做实验的小伙伴，对于“无损检测”这一说法都不陌生。

那么，究竟什么是无损检测、无损检测的方法有哪些、具体可以应用在什么地方呢？今天我们就来好好聊一聊。

什么是无损探伤/无损检测?

无损探伤是在不损坏工件或原材料工作状态的前提下，对被检验部件的表面和内部质量进行检查的一种测试手段。

无损检测：NondestructiveTesting(缩写NDT)。

常用的探伤方法有哪些?

无损检测方法很多据美国国家宇航局调研分析，认为可分为六大类约70余种。

但在实际应用中比较常见的有以下几种：

• 超声检测

  Ultrasonic Testing(UT)

• 射线检测

  Radiographic Testing(RT)

• 磁粉检测

  Magnetic particle Testing(MT)

• 渗透检验

  Penetrant Testing (PT)

• 涡流检测

  Eddy current Testing(ET)

非常规无损检测技术有：

• 声发射

  Acoustic Emission(AE)

• 泄漏检测

  Leak Testing(UT)

• 光全息照相

  Optical Holography

• 红外热成象

  Infrared Thermography

• 微波检测

  Microwave Testing

超声波探伤的基本原理是什么?

超声波探伤仪的种类繁多，但在实际的探伤过程，脉冲反射式超声波探伤仪应用的Z为广泛。

一般在均匀的材料中，缺陷的存在将造成材料的不连续，这种不连续往往又造成声阻抗的不一致。由反射定理我们知道，超声波在两种不同声阻抗的介质的交界面上将会发生反射，反射回来的能量的大小与交界面两边介质声阻抗的差异和交界面的取向、大小有关。脉冲反射式超声波探伤仪就是根据这个原理设计的。

*图片来源网络

目前便携式的脉冲反射式超声波探伤仪大部分是A扫描方式的。

所谓A扫描显示方式即显示器的横坐标是超声波在被检测材料中的传播时间或者传播距离，纵坐标是超声波反射波的幅值。

譬如，在一个钢工件中存在一个缺陷，由于这个缺陷的存在，造成了缺陷和钢材料之间形成了一个不同介质之间的交界面，交界面之间的声阻抗不同，当发射的超声波遇到这个界面之后，就会发生反射，反射回来的能量又被探头接受到，在显示屏幕中横坐标的一定的位置就会显示出来一个反射波的波形，横坐标的这个位置就是缺陷在被检测材料中的深度。这个反射波的高度和形状因不同的缺陷而不同，反映了缺陷的性质。

超声波探伤与X射线相比有何优缺点?

超声波探伤比X射线探伤具有较高的探伤灵敏度、周期短、成本低、灵活方便、效率高，对人体无害等优点。

缺点是对工作表面要求平滑、要求富有经验的检验人员才能辨别缺陷种类、对缺陷没有直观性;超声波探伤适合于厚度较大的零件检验。

超声波探伤的主要特性有哪些?

• 超声波在介质中传播时，在不同质界面上具有反射的特性，如遇到缺陷，缺陷的尺寸等于或大于超声波波长时，则超声波在缺陷上反射回来，探伤仪可将反射波显示出来;如缺陷的尺寸甚至小于波长时，声波将绕过射线而不能反射

  
  

• 波声的方向性好，频率越高，方向性越好，以很窄的波束向介质中辐射，易于确定缺陷的位置。
  

  　

• 超声波的传播能量大，如频率为1MHZ(100赫兹)的超生波所传播的能量，相当于振幅相同而频率为1000HZ(赫兹)的声波的100万倍。

超生波探伤板厚14毫米时

波幅曲线上三条主要曲线关系怎样?

测长线 Ф1 х 6 -12dB

定量线 Ф1 х 6 -6dB

判度线 Ф1 х 6 -2dB

用超生波探伤时，底波消失?

近表面缺陷

吸收性缺陷

倾斜大缺陷

氧化皮与钢板结合不好

超生波在介质中传播引起衰减的原因?

超声波的扩散传播距离增加，波束截面愈来愈大，单位面积上的能量减少。

材质衰减一是介质粘滞性引起的吸收;二是介质界面杂乱反射引起的散射。

试块的主要作用是什么?

校验灵敏度

校准扫描线性

用超生波对饼形大锻件探伤，底波调节

探伤起始灵敏度对工作底面的要求?

• 底面必须平行于探伤面;

• 底面必须平整并且有一定的光洁度。

超声波探伤选择探头K值三大原则?

• 声束扫查到整个焊缝截面;

• 声束尽量垂直于主要缺陷;

• 有足够的灵敏度。

超声波探伤仪主要组成?

主要有电路同步电路、发电路、接收电路、水平扫描电路、显示器和电源等部份组成。

发射电路的主要作用?

由同步电路输入的同步脉冲信号，触发发射电路工作，产生高频电脉冲信号激励晶片，产生高频振动，并在介质内产生超声波。

超声波探伤中，晶片表面和被探工件表面之间使用耦合剂的原因?

晶片表面和被检工件表面之间的空气间隙，会使超声波完全反射，造成探伤结果不准确和无法探伤。

JB1150-73中判别缺陷的三种情况?

• 无底波只有缺陷的多次反射波。

• 无底波只有多个紊乱的缺陷波。

• 缺陷波和底波同时存在。

JB1150-73中波幅曲线的用途是?

• 距离――波幅曲线主要用于判定缺陷大小，给验收标准提供依据它是由判废线、定量线、测长线三条曲线组成;

• 判废线――判定缺陷的Z大允许当量;

• 定量线――判定缺陷的大小、长度的控制线;

• 测长线――探伤起始灵敏度控制线。

什么是超声场?

充满超声场能量的空间叫超声场。

反映超声场特征的主要参数是?

反映超声场特征的重要物理量有声强、声压声阻抗、声束扩散角、近场和远场区。

探伤仪Z重要的性能指标是?

分辨力、动态范围、水平线性、垂直线性、灵敏度、信噪比。

超声波探伤仪近显示方式分为?

• A型显示：

  示波屏横座标代表超声波传递播时间(或距离)纵座标代表反射回波的高度;

• B型显示：
  示波屏横座标代表超声波传递播时间(或距离)，这类显示得到的是探头扫查深度方向的断面图;

• C型显示：
  仪器示波屏代表被检工件的投影面，这种显示能绘出缺陷的水平投影位置，但不能给出缺陷的埋藏深度。

超声波探头的主要作用是?

• 探头是一个电声换能器，并能将返回来的声波转换成电脉冲;

• 控制超声波的传播方向和能量集中的程度，当改变探头入射角或改变超声波的扩散角时，可使声波的主要能量按不同的角度射入介质内部或改变声波的指向性，提高分辨率;

• 实现波型转换;

• 控制工作频率;适用于不同的工作条件。

加强超波探伤合录和报告工作原因?

任何工件经过超声波探伤后，都必须出据检验报告以作为该工作质量好坏的凭证。

一份正确的探伤报告，除建立可靠的探测方法和结果外，很大程度上取决于原始记录和Z后出据的探伤报告是非常重要的，如果我们检查了工件不作记录也不出报告，那么探伤检查就毫无意义。

无损检测有哪些应用?

• 应用时机：

  设计阶段;制造过程;成品检验;在役检查。

• 应用对象：

  各类材料(金属、非金属等);各种工件(焊接件、锻件、铸件等);各种工程(道路建设、水坝建设、桥梁建设、机场建设等)。

超声波焊缝探伤时，为缺陷定位仪器时间扫描线的调整有?

有水平定位仪、垂直定位、声程定位三种方法

在超声波探伤中，焊缝中的缺陷分类?

在焊缝超声波探伤中一般把焊缝中的缺陷 分成三类：点状缺陷、线状缺陷、面状缺陷。

• 在分类中把长度小于10mm的缺陷叫做点状缺陷;一般不测长，小于10mm的缺陷按5mm计。

• 把长度大于10mm的缺陷叫线状缺陷。

• 把长度大于10mm高度大于3mm的缺陷叫面状缺陷。

超声波试块的作用是什么?

超声波试块的作用是校验仪器和探头的性能，确定探伤起始灵敏度，校准扫描线性。

什么是斜探头折射角β的正确值?

斜探头折射角的正确值称为K值，它等于斜探头λ射点至反射点的水平距离和相应深度的比值。

当局部无损探伤检查的焊缝中，发现有不允许的缺陷时?

应在缺陷的延长方向或可疑部位作补充射线探伤。补充检查后对焊缝质量仍然有怀疑对该焊缝应全部探伤。

超声波探伤仪中，同步信号发生器的主要作用是什么？

同步电路产生同步脉冲信号，用以触发仪器各部分电路同时协调工作，它主要控制同步发射和同步扫描二部分电路。

无损检测的目地?

改进制造工艺

降低制造成本

提高产品的可能性

保证设备的安全运行

超探仪的作用及主要应用

超探仪是一种便携式工业无损探伤仪器，它能够快速便捷、无损伤、精确地进行工件内部多种缺陷(焊缝、裂纹、夹杂、折叠、气孔、砂眼等)的检测、定位、评估和诊断。

既可以用于实验室，也可以用于工程现场。本仪器能够广泛地应用在制造业、钢铁冶金业、金属加工业、化工业等需要缺陷检测和质量控制的领域，也广泛应用于航空航天、铁路交通、锅炉压力容器等领域的在役安全检查与寿命评估。它是无损检测行业的必备仪器。

文章内容来源：NDT思享汇（NDTshow）

图片：网络

排版：检测家

《GB 5009.168-2016 食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定》适用于食用油、乳粉等食品中脂肪酸的检测。在开展食品脂肪酸的检测时，实验员经常会遇到各种小问题，小编今天整理了一些常见问题进行分享学习。

\ 脂肪酸甲酯和脂肪酸甘油三酯标准品如何选择？/

国标《GB 5009.168-2016 食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定》按照定量方法分为三个方法，分别是内标法、外标法和归一化法。内标法需要使用37种脂肪酸甲酯混标作为定性外标，十一碳酸甘油三酯作为定量内标；外标法需要使用相应的脂肪酸甘油三酯作为定量外标；归一化法需要使用37种脂肪酸甲酯混标作为定性外标。

\ 37种脂肪酸甲酯混标如何使用，

内标法如何配置标准曲线？/

上图为国标GB 5009.168-2016 标准截图，可以看出，内标法需要配置5mg/mL十一碳酸甘油三酯的内标溶液；而混合脂肪酸甲酯标液不需要配置标准曲线，仅用于定性和脂肪酸甲酯响应因子的计算。

如果选购安谱实验的37种脂肪酸甲酯混合标液（CDAA-252795-MIX-1ml，不同浓度于异辛烷，总计10 mg/mL），建议取1.0mL 混合标液稀释至5mL或10mL，得到总计2mg/mL或1mg/mL的37种脂肪酸甲酯混合标准使用液。

内标法的计算公式见上图，可以看出，脂肪酸甲酯混标的作用主要是用来计算脂肪酸甲酯相对十一碳酸甲酯的响应因子，因此进样单点的标准溶液即可；样品中脂肪酸甲酯的含量计算主要取决于样品中添加的十一碳酸甲酯内标的含量和样品中各脂肪酸甲酯的峰面积及其响应因子。样品中脂肪酸的含量需要由脂肪酸甲酯的含量再乘以转换系数得到。

\ 使用CD-2560进样37种脂肪酸甲酯为什么只出了36个峰？/

不同品牌、不同规格的色谱柱，色谱柱污染、柱效下降的色谱柱都可能导致37种脂肪酸的分离有所变化，建议可通过调整流速等参数优化色谱条件，以达到最 优分离度。

建议先在 0.8mL/min 的流速条件下查看目标峰的分离情况，根据出峰情况，如果是 31 号和 32 号峰分离变差就增加流速，如果是 24 号峰、30 号峰和 35号峰分离变差就减小流速，通过流速的微调以找到最 优的分离条件。具体调整方法可查看安谱实验相关的单页“37种脂肪酸甲酯分离的小秘密，你知道吗？”。

\ 外标法检测有哪些需要注意？/

如标准截图所示，外标法使用脂肪酸甘油三酯作为标准品，但需要将脂肪酸甘油三酯标准溶液经过酯交换转变为脂肪酸甲酯上机检测，不可直接将脂肪酸甘油三酯直接上机检测，也不可使用脂肪酸甲酯作为外标进行定量计算。

上图为外标法计算公式，可以看出，外标法是直接计算样品中脂肪酸的含量，不需要计算脂肪酸甲酯的含量。通过脂肪酸甘油三酯的单点外标法进行计算，计算结果主要与脂肪酸甘油三酯标准溶液的浓度、脂肪酸甲酯的峰面积和脂肪酸甘油三酯转化为脂肪酸的系数有关。脂肪酸甘油三酯标准溶液浓度的选择可根据实际样品中脂肪酸的含量进行优化调整，使其尽量接近样品中含量。

《GB 5009.257-2016 食品安全国家标准 食品中反式脂肪酸的测定》适用于动植物油脂、氢化植物油、精炼植物油脂及煎炸油和含动植物油脂、氢化植物油、精炼 植物油脂及煎炸油食品中反式脂肪酸的测定。

在开展食品反式脂肪酸的检测时，实验员经常会遇到各种小问题，小编今天整理了一些常见问题进行分享学习。

01

要检测哪些反式脂肪酸，标准品怎么选择？

标准要求检测食品中C16:1t~C22:1t等16种反式脂肪酸。具体目标物信息可参见标准附录A中的“表A.1 脂肪酸甲酯化学信息表”，详见下图。

针对标准要求的反式脂肪酸，安谱实验推荐的标准品选择方案见下表，分别是6种反式单不饱和脂肪酸甲酯、4种十八碳二烯酸甲酯、8种十八碳三烯酸甲酯。

02

反式脂肪酸标品的使用有些什么注意点？

上述推荐的3种反式脂肪酸标准品中十八碳二烯酸甲酯和十八碳三烯酸甲酯均为同分异构体混合物形式，均无准确浓度，这是反式脂肪酸的性质及其生产工艺导致，但这并不影响结果的计算，因为标准中反式脂肪酸的定量方法是面积归一化法，并不需要确定某一个反式脂肪酸的准确浓度，此标准品更重要的作用是目标物的定性。

4种十八碳二烯酸甲酯混标和8种十八碳三烯酸甲酯混标中的目标物信息见下表，可以看出2个混标中分别含有顺-9,12-十八碳二烯酸甲酯（亚油酸甲酯）和顺-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（亚麻酸甲酯）这两种顺式脂肪酸甲酯。因此推荐的3种混标产品中总共含有18个目标物。

03

检测食品中反式脂肪酸

还需要检测其他常见脂肪酸吗？

检测食品中的反式脂肪酸需要同时检测其他顺式脂肪酸，上图为国标中反式脂肪酸的计算公式，反式脂肪酸的定量计算是使用归一化法，从公式可以看出需要计算样品中所有脂肪酸甲酯目标物的校准峰面积。通常我们建议可以和《GB 5009.168-2016 食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定》同时检测，因此检测食品中反式脂肪酸还需要采购37种脂肪酸甲酯混标（货号：CDAA-252795-MIX-1ml）进行检测。

需要注意的是“GB 5009.168-2016”和“GB 5009.257-2016”两个标准中脂肪酸的归一化法的计算公式是并不一样，在实际检测过程中需要分别参照标准要求的公式进行计算。下图为使用“GB 5009.257-2016”标准检测大豆油样品中反式脂肪酸的计算公式模板。

04

标准品中有一些脂肪酸甲酯的CAS号和标准不一样？

因不饱和脂肪酸甲酯存在顺反异构，以及顺反物质的混合物，因此可能设计多个CAS号，所以需要对标准品的CAS号信息特别注意。特别是“GB 5009.257-2016”中的CAS号信息情况，详见下表，而在“GB 5009.168-2016”中目标物的CAS号信息均正确无误，各位老师可以结合“GB 5009.168-2016”进行目标物CAS号信息的确认。

05

有一些反式脂肪酸和顺式脂肪酸分离度较差怎么优化？

在脂肪酸检测过程中常常遇到的一个问题是，顺式脂肪酸 C18:3 6c,9c,12c 和一些反式十八碳三烯酸为同分异构体，且在色谱柱上出峰时间完成重合，无法分离，这样就会导致如果样品中有出峰，则无法判定该目标物是反式和顺式的结构，影响结果判定。小编今天提供2种色谱条件的优化方向供各位老师参考。

色谱条件优化1（降低初始温度，降低升温速率）：

该色谱条件下的谱图见下图：

色谱条件优化2（降低初始温度，降低升温速率，使用梯度流速）：

该色谱条件下的谱图见下图：