凝胶色谱的实验技术

超高分子量聚乙烯是现有zui优质的可应用于恶劣工作环境及多种用途的聚乙烯，在许多高难度的应用条件下均展示出非常好的适用性。超高分子量的含义是指它不会融化并向液体一样流动，其密度一般大于0.94 g/cm³，分子量一般大于106。

本应用是采用东曹公司HLC-8321GPC/HT型高温凝胶色谱仪及TSKgel GMHHR-H(S) HT2高温凝胶色谱柱，参考GB/T 36214.4-2018方法，对4种超高分子量聚乙烯进行了高温凝胶色谱分析，测定了样品的平均分子量和分量分布。

实验结果表明：其中有一种样品的平均分子量及分布指数与其余3种存在明显的差异。该系统流速精度、各部件温控指标及色谱柱组柱效均满足GB/T 36214.4-2018要求，该方法可广泛应用于各种聚烯烃类塑料样品的分子量及分布的测定。

1 样品溶液配制

取10 mg样品放入96 μm不锈钢滤网内，包好后，置10 mL专用样品瓶内，加入10 mLTCB，放入样品预处理设备DF-8321中，在160 ℃条件下，震荡溶解。

2 分析条件

仪器：东曹CPG系统HLC-8321GPC/HT  

色谱柱：TSKgel GMHHR-H(S) HT2×2（7.8 mm I.D.×30 cm×2, 13μm）

流动相：TCB（1,2,4-三氯苯）

流速：1.0 mL/min

柱温：160 ℃

样品盘温度：160 ℃

进样量：300 μL

样品浓度：1.0 g/L

检测器：RI

3 分析结果

4种超高分子量聚乙烯样品分离谱图

4种超高分子量聚乙烯样品分子量及分布结果

4 结论

测定结果表明：样品UHMM-PE 2的平均分子量及分布指数与其余3种样品存在明显的差异。该样品的Mw分子量为1.39×106明显小于其余三种样品的Mw分子量，而分布指数PDI值为4.87，较其余三种样品的分布值大。

东曹高温凝胶色谱系统流速精密度为：±0.2%，柱温箱、进样阀、自动进样控温样品盘及RI检测器控温范围为：40~220 ℃，各部件控温精密度均小于＜0.5℃，色谱柱组柱效大于16000。均满足GB/T 36214.4-2018的要求，可广泛应用于各种聚烯烃类塑料样品的分子量及分布的测定。

β-内酰胺类抗生素分子自身聚合而成的产物，也称为高分子聚合物（简称高聚物），其可在生产或储存过程中产生，甚至也可在药物的不当使用过程中产生。随着现代制药工程在生产工艺方面的不断改进和提高，目前抗生素的产品中外源性杂质日趋减少，对内源性杂质的控制成为当前抗生素高分子杂质质量控制的ZD。 

本应用参考国标GB/T 38093-2019，采用凝胶色谱柱TSKgel G2000SWXL，对头孢噻吩、头孢曲松、头孢呋辛、头孢拉定、头孢哌酮及头孢唑林这6种β-内酰胺类抗生素进行分离，经紫外检测器在254 nm测定，以色谱峰保留时间定性，以峰面积进行定量。

溶液的配制

① 流动相配制：(5 mmol/L 磷酸缓冲盐，pH=7.0) : ACN=9:1 (v:v)

② 对照品溶液配制：取头孢曲松、头孢噻吩、头孢拉定、头孢呋辛少量用 (5 mmol/L 磷酸缓冲盐pH=7.0) 溶解并稀释至1 mg/mL，取头孢哌酮、头孢唑啉少量用 (5 mmol/L 磷酸缓冲盐，pH=7.0) : ACN=1:1 (v:v) 溶解并稀释至1 mg/mL

分析条件

仪器：Thermo Ultimate 3000  

色谱柱：TSKgel G2000SWXL（7.8 mmI.D.×30 cm, 5 μm）

流速：0.8 mL/min

柱温：25 ℃

样品盘温度：10 ℃

进样量：10 μL

检测器：紫外检测器@254nm

分析结果

图1. 头孢噻吩分离色谱图

图2. 头孢曲松分离色谱图

图3. 头孢呋辛分离色谱图

图4. 头孢拉定分离色谱图

图5. 头孢哌酮分离色谱图

图6. 头孢唑啉分离色谱图

标准曲线建立（以头孢噻吩为例）

结果与讨论:

采用TSKgel G2000SWXL色谱柱参考GB/T 38093-2019，对头孢噻吩、头孢曲松、头孢呋辛、头孢拉定、头孢哌酮及头孢唑林6种β-内酰胺类抗生素进行了分离测试。

结果表明：6种β-内酰胺类抗生素主峰与相关物质峰的分离良好，主峰柱效均大于10000，以头孢噻吩为例做标准曲线，浓度范围为0.009~5.14 mg/mL，其线性R²=0.9977 (高于标准中的要求R²＞0.95) , 满足国标要求。