好消息！快速检测6种新型冠状病毒肺炎药物

       2019年底，新型冠状病毒(SARS-CoV-2)肆虐，它的出现及其在世界范围内的广泛传播引发科技工作者对ZL新型冠状病毒肺炎(COVID-19)药物的广泛关注。鉴于COVID-19的高传播性，并且目前尚没有疫苗对其进行有效预防，研发ZL该肺炎的药物就变得尤为重要。Z近，瑞德西韦、磷酸氯喹和法匹拉韦等多种药物已被证明在抗击COVID-19方面具有潜在活性。

       迪马科技一直致力于为药物研发和检测提供强有力的技术支持，针对抗COVID-19药物检测，迪马科技技术人员开发了一种快速LC-MS/MS方法。应用该方法可以同时快速测定6种潜在ZL药物。本方法选用Endeavorsil^® 1.8 μm C18色谱柱，在4.5分钟内即可完成6种药物的同时检测。方法具有简单、快速等优点。可以预期，该方法的应用必将使得这些潜在药物的检测变得更加方便、GX，并有助于抗COVID-19药物的进一步研究和检测。

       六种化合物的分子结构如下：

瑞德西韦

磷酸氯喹

法匹拉韦

洛匹那韦

沙奎那韦

利托那韦

1、适用范围

       本方法适用于瑞德西韦、磷酸氯喹、法匹拉韦、洛匹那韦、沙奎那韦、利托那韦6种潜在ZLCOVID-19药物的检测。

2、标准溶液的配制

       单标储备液：磷酸氯喹溶于甲醇:水(1:1 v/v)混合溶液中，瑞德西韦、法匹拉韦、洛匹那韦、沙奎那韦、利托那韦溶于甲醇溶液中。

       单标中间液：将各单标储备液配置成4 mg/mL的中间液，稀释液为甲醇。

       混合标准工作液：各单标浓度见表一，稀释液为流动相。

3、色谱条件

       色谱柱：Endeavorsil^® 1.8 μm C18, 100 × 2.1 mm(Cat＃: 87003)

       液相系统：Agilent 1290 Infinity UPLC、AB SCIEX 4000 + MS

       流动相：A:0.1％甲酸水溶液   B:0.1％甲酸乙腈溶液 

       流速：0.2 mL/min  

       进样量：1 μL

       温度：30 ℃

       扫描方式：ESI +

       梯度设置：

4、检测结果

图1六种化合物检测TIC图

图2 六种化合物标准溶液的MRM色谱图

表1六种化合物检测参数和结果

       利用Endeavorsil^® 1.8 μm C18色谱柱，6种潜在ZLCOVID-19药物能够在4.5分钟内实现完全分离 (图1)。表1列出了洗脱顺序、样品浓度、保留时间、离子对信息。

5、结论

　　本文提供了一种有效的同时检测6种潜在ZLCOVID-19药物的方法，其优点包括：流动相简单、分析速度快、灵敏度高和色谱峰形良好。据检索，本方法为国内外shou次利用LC-MS/MS同时分离、测试和确证6种潜在ZLCOVID-19药物的检测方法。迪马科技希望本方法能够为COVID-19ZL药物在研发、生产以及临床试验等阶段的常规测试中提供强有力的技术支持。

６、相关产品信息

       LC-MS/MS法同时测定6种潜在ZL新型冠状病毒肺炎药物相关产品信息：

       针对“新型冠状病毒 2019nCoV”，博日公司diyi时间推出了基于不同样本来源、样本量的核酸提取及荧光定量 PCR检测的方案，详细介绍如下：

       一、样本前处理

       二、核酸提取
       核酸提取是分子检测的基础，高质量核酸也是保证下游检测结果的前提，博日的核酸提取深得广大疾控、临床和科研院校客户的信赖和喜爱，无论是病毒类还是病原体类的试剂盒均能保证高质量的核酸提取。

      场景一：适用于大于等于 16个样本的新型冠状病毒等病毒核酸的提取

       配套试剂和仪器：

       特点：

       GX快速：博日仪器能实现 35min内快速实现 3296个样本的高通量自动化核酸提取；

       灵敏度高：DNA病毒可以达到 10I U/ mL，RNA病毒可以达到 50I U/ mL；

       操作简单：使用预分装试剂盒仅需加入样本与 pK即可上机操作，且提取无需核酸助沉剂，保证了多次实验的重复性；

       应用广泛：本试剂盒均采用前沿技术，适用样本类型广泛，可轻松提取如痰液、唾液、肺泡灌洗液、 （鼻咽）拭子、培养细胞及其他体液样本 （如全血、血浆、血清、腹水、脑脊液、口腔液等）等中的病毒核酸，可用于下游如 NGS，qPCR等的检测；

       稳定可靠：博日全自动核酸提取纯化仪配备更全面的深孔加热模块，大幅度降低预设温度与管内实际温差，较小孔间温度差，从而极大地提高了裂解和洗脱的效率，试剂配套仪器，使检测结果更加稳定可靠。

       场景二：适用于大于等于 16个样本的新型冠状等病毒、支原体类、衣原体类及细菌类等引起呼吸道疾病的病原体的核酸提取。

       配套试剂＆仪器：

       特点：

       GX快速：博日仪器配套试剂能实现 40min内快速实现 3296个样本的高通量自动化核酸提取；

      灵敏度高：DNA病毒可以达到 10I U/ mL，RNA病毒可以达到 50I U/ mL；

      操作简单：独特的裂解成分能将样本中的病毒、支原体、衣原体或革兰阴性、阳性细菌的核酸轻松释放，配合预分装试剂盒，得到高质量的核酸；

       应用广泛：本试剂盒均采用前沿技术，适用样本类型广泛，可轻松提取如痰液、唾液、肺泡灌洗液、（鼻咽）拭子、培养细胞及其他体液样本（如全血、血浆、血清、腹水、脑脊液、口腔液等）等的病原体核酸，适用于下游 NGS，qPCR检测；

       稳定可靠：博日全自动核酸提取纯化仪配备更全面的深孔加热模块，大幅度降低预设温度与管内实际温差，且 NPA96核酸具有水平震荡模式，可同时进行前处理，试剂配套仪器，使检测结果更加稳定可靠。

       简单快速：整个提取过程在 30mi n内完成；

       应用范围广：本试剂盒均采用前沿技术，适用样本类型广泛，可轻松提取痰液、唾液、肺泡灌洗液、 （鼻咽）拭子、培养细胞及其他体液样本（如全血、血浆、血清、腹水、脑脊液、口腔液等），适用于下游 NGS，qPCR检测；

       高灵敏：DNA病毒可以达到 10I U/ mL，RNA病毒可以达到 100I U/ mL；

       安全性高：产品中无有毒试剂；

       稳定性好：常温保存；

       纯度高：纯化后的病毒核酸不含 PCR/ RTPCRYZ剂等污染物

       三、Real Ti me荧光定量 PCR检测

       实时荧光定量 PCR方法是目前公认的病原微生物分子检测和鉴定技术，博日在微生物定量 PCR分析方面，提供Z精确，Z灵敏的检测方案。

       针对场景: 适用于 2019nCoV新冠状病毒等核酸的荧光定量检测

       可靠性：选取新型冠状病毒（2019nCoV）WuhanHu1株 Or f 1ab以及 N基因区，设计同时覆盖该基因两个位点的两组特异性引物及荧光探针，而对其它冠状病毒无交叉反应。采用GX的一步法荧光 RTPCR反应系统确保检测结果的灵敏度和准确性。

       特异性：适用于新型冠状病毒核酸检测，与甲型 H1N1，冠状病毒 OC43，冠状病毒 HKU1等核酸，甲型 H1N1流感病毒、甲 3型流感病毒、乙型流感病毒、冠状病毒 OC43、冠状病毒 HKU1、冠状病毒 229E、冠状病毒 NL63等临床阳性样本、中东呼吸综合征冠状病毒等样本均无交叉反应。

       防污染：一步法完成 RTPCR，无须逆转录及 PCR处理，完全闭管扩增和检测，同时避免假阳性结果。

       操作简单，耗时短：只需 1. 5个小时即可完成结果判读。

（来源：杭州博日科技有限公司）

维生素是维持人体生命活动所必需的一类营养物质，大多数由食物供给，属于人体内的一类调节物质。维生素分为水溶维生素和脂溶维生素，脂溶性维生素是不溶于水而溶于脂类的一类维生素，在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要作用，包含维生素A、维生素D、维生素E和维生素K。

VD在肝脏可转化为25羟基维生素D(25OH-VD)，其浓度水平与体内的VD直接相关，因此体内25OH-VD2、25OH-VD3可作为检测VD水平的生物标志物。VK是激活凝血因子以及蛋白质C和S的必须辅助因子，目前已知主要有K1、K2、K3、K4几种形式，四烯甲萘醌VK2(MK4)既是VK2的家族成员，也是肝外组织中K1的代谢物。当这些脂溶性维生素缺乏或过量时均会对人体造成伤害。具体见下表：

一次性评估体内多种维生素水平，才能全面“查漏补缺”。准确测定人体中性维生素的含量，可以帮助临床医生准确评估人体维生素营养状态、吸收障碍或毒性水平。

解决方案

沃特世团队依托质谱平台ACQUITY UPLC I-Class Xevo TQ-S IVD和 TQ-XS IVD开发了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术在维生素检测中的应用，在5 min内即可完成6种脂溶性维生素的同时分析。前处理采用Andrew Alliance机器人搭配Oasis μElution PRiME HLB的固相萃取板，实现样本前处理自动化，并解决LC-MS/MS检测维生素的各种挑战和难点。该方法检出限低、分离效果好、稳定性佳，可满足临床高通量自动化检测需求。

图1. Andrew+移液机器人用于6种脂溶性维生素前处理操作时的工作台布局，以及ACQUITY UPLC I-Class Xevo TQ-XS IVD检测平台。

实验部分

 前处理

• 样本预处理：取100 μL 血清或者BSA稀释标准品，加入内标工作液，涡旋混匀，随后加入乙腈沉淀蛋白，离心取上清液，做SPE净化。

 液相色谱条件

• 液相色谱系统：ACQUITY UPLC I-Class系统
  

• 色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱, 1.7 μm，2.1 mm x 50 mm

• 进样体积：5 μL

结果与讨论

 高通量，一针进样，同时检测

该方案5 min内即可完成6种脂溶性维生素的同时测定，可同时检测血清中维生素A(VA)、25-羟基维生素D2(25OHVD2)、25-羟基维生素D3(25OHVD3)、维生素E(VE)、维生素K1(VK1)、四烯甲萘醌K2(VK2-MK-4)，真正实现“一针进样，同时检测”。

图2. 6种脂溶性维生素的标准品和血清色谱图。

 灵敏度高，线性范围宽，满足临床检测需求

正常人体血清中维生素A含量113 - 977 ng/mL；维生素E含量3.8 - 17 μg/mL；维生素D含量20 - 50 ng/mL；维生素K1含量为0.10 - 2.20 ng/mL。由于6种脂溶性维生素在血清中含量差异较大，VK1、MK4和25OH-VD2含量低，同时测定高低浓度物质是串联质谱测定的难点，常存在低浓度、灵敏度差及高浓度过饱和现象。而Xevo TQ-S IVD和TQ-XS IVD优异的灵敏度及超宽线性范围，可实现同时准确定量这几种维生素。

自动化前处理，满足高通量检测需求

Andrew+机器人可在无人值守状态下自动完成移液、震荡、混匀和96孔板SPE前处理过程。不仅大幅节省了样品处理的时间，提高了通量，还可以简化样品制备过程、减少实验失误，从而确保分析结果的稳定重现。手动前处理96个样本的时间大概是2 - 3 h。如果用Andrew+做自动化前处理，只需要提前把溶剂和样本放到设置好的Domino blocks里中就可以完成自动化前处理和SPE流程。过程仅需不到1 h就可以完成。

结论

本方案使用Waters UPLC I-Class超高效液相色谱系统搭载UPLC色谱柱进行分离，再用Xevo TQ-S IVD和TQ-XS IVD串联四极杆质谱仪对血清样品中6种脂溶性维生素定量检测。96个样本的前处理不到1 h，每个样本的液相分析时间仅5 min，每天可以检测至少200例样本。6个脂溶性维生素的加标回收率85% - 115%之间，精密度RSD<8%，保证该方法检测样品的准确性和可靠性，可适用于临床高通量、自动化的样品检测。

全封闭Naica数字PCR新型冠状病毒超敏检测方案

Cycloud与MicroFuture合作

深蓝云生物科技与北京微未来科技，基于国家疾控ZX和WHO推荐区域，针对2019新型冠状病毒的四段保守序列作为检测靶标，开发超敏的数字PCR检测方法和快速的定量PCR检测方法。

【图源：北京微未来科技】

区段分别为：RdRP基因（特异性靶点），E蛋白基因，N蛋白基因，保守基因S区位点。确保对2019新型冠状病毒鉴定的高度特异性和灵敏度。      

与人冠状病毒HcoV-229E、 HcoV-HKU1、 HcoV-OC43、 HcoV-NL63等型无交叉。

深蓝云生物科技以专业服务科学为使命，愿所学，以致用，共战病毒！

北京微未来科技有限公司以“解码病原微生物，致力于传染病防控”为企业使命。与北京深蓝云生物科技共同在病毒的超敏检测的数字PCR方法展开深入合作。 

联系方式：

公司名称：北京深蓝云生物科技有限公司
联系电话：010-57256059
E-mail：info@cycloudbio.com

紫外线灯能杀死新型冠状病毒吗？

根据新发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗快速指南》，75%酒精、yi醚、氯仿、甲醛、含氯消毒剂、过氧乙酸和紫外线均可灭活病毒。因此，医用紫外灯对杀灭病毒是有效的。

国家电光源质量监督检验ZX（北京）的微信公众号“国家电光源ZXNLTC”于2020年2月4日发布的《紫外线杀菌灯在防护2019新型冠状病毒传播中的应用》中记载：“以ZX波长253.7nm为代表的紫外辐射对细菌和病毒具有广谱杀灭作用，其有效性在SARS病毒上得到了试验验证，理论上，基于紫外辐射的核酸破坏作用，一定剂量的紫外辐射可杀灭2019新型冠状病毒，在无人条件下使用紫外杀菌灯，其杀菌消毒作用可通过破坏传播途径的方式达到传染防护目的。”