应用 | 苹果醋中展青霉素含量检测的固相萃取方法

展青霉素是一种世界范围内的水果污染物，在多种水果、水果制品和果酒中均有发现，对人及动物具有较强的毒性作用。当人摄取了展青霉素，可通过影响细胞膜的透过性间接地引起生理呼吸异常。鉴于展青霉素的毒性及其污染情况，开展展青霉素的检测非常必要。

逗点生物采用新的自主研发的Copure®228多功能净化柱，建立苹果醋中展青霉素的LC-MS/MS检测方法。该方法低、中、高三个水平的加标回收率均在90-100 %之间，RSD小于2 %，操作简便快捷，与国内外的竞品相比，具有回收率高和净化效果好的优势，能够作为苹果醋中展青霉素的参考方法。

展青霉素是一种世界范围内的水果污染物，在多种水果、水果制品和果酒中均有发现，对人及动物具有较强的毒性作用。当人摄取了展青霉素，可通过影响细胞膜的透过性间接地引起生理呼吸异常。鉴于展青霉素的毒性及其污染情况，开展展青霉素的检测非常必要。

逗点生物采用最 新自主研发的Copure®228多功能净化柱，建立苹果醋中展青霉素的LC-MS/MS检测方法。该方法低、中、高三个水平的加标回收率均在90-100 %之间，RSD小于2 %，操作简便快捷，与国内外的竞品相比，具有回收率高和净化效果好的优势，能够作为苹果醋中展青霉素的参考方法。

参照 《GB 5009.185-2016 食品安全国家标准食品中展青霉素的测定》。

一、样品前处理

1.1  样品提取

（1）称取4 g样品，加入一定量同位素内标工作液，混合均匀，用乙腈定容至25 mL。

（2）涡旋5 min，6000 r/min离心5 min，取上清液，待净化用。

1.2  样品净化

（1）向玻璃试管中加入10 mL样品提取液。

（2）将净化柱橡胶头从试管顶端插入试管中，并向下压净化柱至试管底端。

（3）将净化柱上部净化后的样品提取液取出至样品瓶或EP管中。

（4）取5 mL净化提取液，加入20 μL乙酸，氮气吹干，用1 mL乙酸溶液复溶，涡旋30 s 溶解残渣，过微孔滤膜，上机分析。

二、仪器条件

仪器设备：液相色谱-串联质谱联用仪 SCIEX Triple Quad™ 4500

色谱柱：ACQUITY UPLC T3 2.1*50mm 1.8μm

流动相：A：一级水    B：乙腈

流动相梯度：初始95%A，95%A（0min~3min），0%A（3.2min~4min），95%A（4.2min ~6.0min）

流速：0.3 mL/min

柱温：室温

进样体积：10.0 mL

质谱条件：

检测方式：多离子反应检测（MRM）；

三、实验结果

安谱实验带你打通关

展青霉素，别名棒曲霉素，广泛存在于烂苹果中，具有很强的毒性，对人体有极强的损伤，在2019年的国抽检测项目中榜上有名。国标GB 2761—2011规定了展青霉素的限量值为50µg/kg。

目前食品中展青霉素的检测标准是国标《GB 5009.185-2016 食品安全国家标准 食品中展青霉素的测定》，其方法是：用MAX小柱净化，液质方法检测。安谱实验依据国标方法，运用CNW Poly-Sery MAX小柱（SBEQ-CA3381）和Athena UHPLC C18色谱柱，用液质的方法对苹果汁中的展青霉素进行测定，结果稳定可靠，回收率高。

全部装备任你挑

1

样品前处理

取2g苹果汁（如果是浑浊未过滤果汁，7000r/min离心10min去除悬浮物），加入标品（上机浓度50ppb），待净化。

2

SPE操作过程

活化：6mL甲醇  

平衡：6ml水  

上样：待净化液 

淋洗：3mL乙酸铵溶液，3mL水，抽干  

洗脱：4mL甲醇  

浓缩：在洗脱液中加入20 µL乙酸，置40℃下用氮气缓缓吹至近干，用乙酸溶液定容至1.0mL，涡旋30s溶解残留物，0.22 µm 滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中以备进样。

3

色谱条件

液相条件:                                       

色谱柱：Athena UHPLC C18（2.1*50mm，5µm）；

流动相：乙腈：水=5:95，等度洗脱；

流速：300µL/min；

柱温：30ºC；

进样量：10µL；

质谱参数:

Ionization Mode： ESI-

Capillary Voltage: 4000V

Gas Temp：350ºC

Gas flow：8 L/min

Nebulizer：35 psi

4

实验谱图

▲50ppb标准品谱图（基质配标）

▲苹果汁谱图（空白）

▲苹果汁谱图（加标 50ppb）

5

实验数据

实验结论：苹果汁中含有1.6µg/kg的展青霉素，符合国标限量标准（50µg/kg）。

6

实验耗材

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黄曲霉毒素(aflatoxins)是一种由黄曲霉和寄生曲霉等真菌经过聚酮途径产生的次生代谢产物，其结构通常包含一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮，天然产生的黄曲霉毒素根据其化学结构不同分为B₁、B₂、G₁ 、G₂四种。

食品遭受产毒真菌以及霉菌毒素污染的问题在世界范围内反复发生，被污染的农作物作为饲料资源被畜禽食用后， 携带的霉菌毒素又可在肉、蛋、奶等食品中蓄积，通过食物链传递， 危害人类健康。

逗点生物采用最新自主研发的Copure®228多功能净化柱，建立玉米粉中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂检测的LC-MS/MS检测方法。该方法低、中、高三个水平的加标回收率均在90-100 %之间，RSD小于5 %，操作简便快捷，与国内外的竞品相比，具有回收率高和脱色净化效果好的优势，能够作为玉米粉中黄曲霉毒素检测的参考方法。

本方法适用于谷物及其制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品、调味品、婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂的测定。

参照 《GB 5009.22-2016  食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》。

一、样品前处理

1.1  样品提取

（1）称取 5 g试样于50 mL离心管中，加入一定量同位素内标工作液振荡混合后静置30 min。

（2）加入20 mL乙腈-水溶液（84+16），涡旋混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20 min，在6000 r/min下离心10 min，取上清液备用。

1.2  样品净化

（1）向玻璃试管中加入10 mL样品提取液。

（2）将Copure® 228多功能净化柱（货号：COAF228）橡胶头从试管顶端插入试管中，并向下压净化柱至试管底端。

（3）将净化柱上部净化后的样品提取液取出至样品瓶或EP管中。

（4）取5 mL净化提取液，氮气吹干，用1 mL初始流动相复溶，涡旋 30s 溶解残渣，过微孔滤膜，上机分析。

二、仪器条件

仪器设备：液相色谱-串联质谱联用仪 SCIEX Triple Quad™ 4500 

色谱柱：Waters C18   2.1x100mm 1.7um

流动相：A：0.1%甲酸水    B：乙腈

流动相梯度：初始80%A，20%A（0 min~2 min），20%A（2 min~3 min），

80%A（3 min~3.1min），80%A（3.1min~5min）

流速：0.3 mL/min

柱温：室温

进样体积：10.0 μL

质谱条件：

检测方式：多离子反应检测（MRM）；

表1 离子源控制条件

表2 离子选择参数

（注：*为定量离子）

三、实验结果

表3  玉米粉中黄曲霉毒素加标回收实验结果

图1 不同品牌多功能净化柱处理加标样品后的脱色效果图（①玉米粉加标样品-未净化处理    ②Copure®228-净化处理    ③ 国外A品牌-净化处理     ④ 国内B品牌-净化处理）

Copure®228脱色效果明显，其脱色能力与国外A品牌相当，并显著优于国内B品牌。

图2 使用Copure®228净化后的加标样品的EIC色谱图

四、订购信息

实验背景

       展青霉素，别名棒曲霉素，广泛存在于水果中，具有很强的毒性，对人体有极强的损伤。故而，展青霉素的检测也是国抽项目必检项目，其中GB2761-2017规定食品中展青霉素的限量值为50ug/kg。

       近期CMA委员会将组织相关项目的审查，作为一个常检项目，安谱实验特此就果汁中展青霉素的检测方法给大家进行分享：根据标准GB 5009.185-2016（食品中展青霉素的测定），使用CNW多功能净化柱（SBEQ-CD228S），用液相和液质对苹果汁、山楂汁/片进行了测定，发现结果稳定可靠，回收率高，完全满足标准方法中的要求。

由于篇幅有限，本文只提供了部分谱图供参考

如需要详细的实验谱图等数据

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接下来，小编带大家走进安谱实验室

一起来学习具体检测方案吧~

一、样品前处理

       称取4g样品（固体样品山楂片用高速粉碎机进行粉碎待用）于50mL离心管中，加入21mL乙腈，混匀，而后在6000 r/min下离心10min，取上清液。

二、小柱操作过程

       步骤1：向试管中加入10mL样品提取液，然后加入50μl乙酸

       步骤2：将228净化柱橡胶头从试管顶端插入试管中，并向下压净化柱至试管底端

       步骤3：将净化柱上部净化后的样品提取液倒出至样品瓶或EP管中

       步骤4：取5ml净化提取液，加入20μl乙酸，氮吹至干，用1ml乙酸溶液复溶，过微孔滤膜，上机分析

（过柱速度≤2mL/min）

三、色谱条件

01 液质色谱条件

       色谱柱：Athena UHPLC C18液相色谱柱

       流动相：A：0.5mM乙酸铵  B：乙腈

表1 流动相梯度表

       流速：0.2ml/min   

       柱温：30 ℃

       进样量：10μL

质谱条件：

       •离子源：电喷雾离子源

       •扫描方式：负离子扫描模式

       •检测方式：多反应监测（MRM）

02 液相色谱条件

       色谱柱：Athena C18-WP液相色谱柱（LAEQ-461572 4.6*150mm,5um）

       流速：0.2mL/min   

       柱温：30 ℃

       进样量：10μL

       紫外检测器条件：检测波长为276 nm

       流动相：A：0.5mM乙酸铵  B：乙腈（梯度表参见液质）

四、实验谱图

图1 展青霉素标准品MRM谱图

图2 山楂汁加标MRM谱图

五、实验数据

六、实验耗材