细胞逆转录酶活性荧光定量检测试剂盒 产品说明书

本文由 上海哈灵生物科技有限公司 整理汇编

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• 细胞逆转录酶活性荧光定量检测试剂盒 产品说明书

  细胞逆转录酶活性荧光定量检测试剂盒 产品说明书[详细]

  2024-09-16 01:24

  操作手册

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• 细胞色素P450亚酶1A1活性荧光定量检测试剂盒产品说明书

  细胞色素P450亚酶1A1活性荧光定量检测试剂盒产品说明书[详细]

  2015-05-04 00:00

  标准

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• 细胞色素P450亚酶1A2活性荧光定量检测试剂盒产品说明书

  细胞色素P450亚酶1A2活性荧光定量检测试剂盒产品说明书主要用途细胞色素P450亚酶1A2活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过甲氧基异酚唑脱甲基酶反应系统中甲氧基异酚唑转化为羟基异吩唑酮后荧光峰值的变化，即采用荧光法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞或组织裂解萃取液样品（动物、人体）或纯化微粒体样品细胞色素P450亚酶1A2的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景细胞色素P450亚酶1A2，简称为CYP1A2，是肝细胞微粒体复合功能氧化酶系统的成员之一，也是芳香族碳氢化合物加羟基酶（arylhydrocarbonhydrorylase；AHH）的成员之一。在人体肝脏里占P450酶系15％。与CYP1A1高度同源，特别是在外显子2、4、5和6。CYP1A2由多个多态性变体，Z常见的是：1A和1F，与kafeiyin代谢和迟发性皮肤卟啉症（porphyriacutaneatarda）相关。CYP1A2的作用在于体内外源化合物（xenobiotics），包括药物、致癌剂、化学污染物的氧化代谢，即单加氧化作用（monooxygenation）和羟化作用（hydroxylation）,以及脂类合成包括胆固醇和类固醇。芳香族碳氢化合物诱导CYP1A2的表达。甲氧基异酚唑脱甲基酶（7－methoxyresorufin-O-demethylase；MROD）的活性是细胞色素P450亚酶1A2的诊断标记，其基于MROD选择性催化细胞色素P450亚酶1A2的活性。甲氧基异酚唑（7－methoxyresorufin）在甲氧基异酚唑脱甲基酶的催化下，转化为羟基异吩唑酮（resorufin）后荧光峰值的变化（激发波长530nm，散发波长590nm），来定量测定细胞色素P450亚酶1A2的活性。甲氧基异酚唑脱甲基酶反应系统为：产品内容缓冲液（ReagentA）毫升反应液（ReagentB）毫升底物液（ReagentC）微升标准液（ReagentD）微升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里，底物液（ReagentC）和标准液（ReagentD）避免光照，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于标准样品操作的容器恒温水槽：用于孵育反应比色皿或酶标板：用于反应和比色的容器荧光分光光度仪或酶标仪：用于荧光分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作。一、测定准备1．准备好待测样品（例如细胞裂解萃取液或微粒体样品等），置于冰槽里2．设定好荧光分光光度仪（温度为37℃）：激发波长530nm，散发波长590nm，并置零3．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管4．加入xx微升缓冲液（ReagentA）到1号管5．分别加入xx微升缓冲液（ReagentA）到2至5号管6．移取xx微升标准液（ReagentD）到1号管，混匀7．小心移取xx微升1号管稀释的标准液（ReagentD）到2号管，混匀8．小心移取xx微升2号管稀释的标准液（ReagentD）到3号管，混匀9．小心移取xx微升3号管稀释的标准液（ReagentD）到4号管，混匀10．将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表管号缓冲液（ReagentA）标准液（ReagentD）标准羟基异吩唑酮浓度1微升微升纳摩尔/升2微升微升1号管纳摩尔/升3微升微升2号管纳摩尔/升4微升微升3号管纳摩尔/升5微升00二、标准曲线测定1．移取xx微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿2．加入xx微升反应液（ReagentB）3．加入xx微升底物液（ReagentC）4．加入xx微升上述配制的标准液5．上下倾倒数次，混匀6．在37℃温度下孵育10分钟7．即刻放进荧光分光光度仪检测获得相对荧光读数8．重复实验步骤1至7四次9．构建标准曲线：纵座标（Y轴）为相对荧光单位；横座标（X轴）为标准羟基异吩唑酮浓度（纳摩尔/升）三、样品测定1．移取xx微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿2．加入xx微升反应液（ReagentB）3．加入xx微升底物液（ReagentC）4．加入xx微升待测样品（20微克微粒体蛋白或100微克细胞裂解萃取液蛋白）（注意：样品须清澈）5．上下倾倒数次，混匀6．在37℃温度下孵育10分钟7．即刻放进荧光分光光度仪检测：获得相关荧光读数8．（选择步骤）重复实验步骤1至7，测读新的样品9．根据标准曲线获得样品对应羟基异吩唑酮浓度四、计算样品活性[根据标准曲线获得样品对应羟基异吩唑酮浓度（纳摩尔/升）X样品稀释倍数]÷10（分钟）]＝皮摩尔/毫升/分钟÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝皮摩尔/毫克/分钟五、酶标板测定1．在96孔酶标板上做好相应标记：标准样品和待测样品2．分别移取xx微升缓冲液（ReagentA）到相应孔中3．分别加入xx微升反应液（ReagentB）4．分别加入xx微升底物液（ReagentC）5．分别加入xx微升上述配制的标准液或待测样品（20微克微粒体蛋白或100微克细胞裂解萃取液蛋白）（注意：样品须清澈）6．轻轻摇动96孔酶标板7．在37℃温度下孵育10分钟8．即刻放进荧光酶标仪检测：获得相对荧光读数9．构建标准曲线：纵座标（Y轴）为相对荧光单位；横座标（X轴）为标准羟基异吩唑酮浓度（纳摩尔/升）10．根据标准曲线获得样品对应羟基异吩唑酮浓度11．活性计算：[根据标准曲线获得样品对应羟基异吩唑酮浓度（纳摩尔/升）X样品稀释倍数]÷xx（反应时间；分钟）]＝皮摩尔/毫升/分钟÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝皮摩尔/毫克/分钟注意事项1．本产品为25次（比色皿）或85次（酶标板）操作，包括标准液2．操作时，须戴手套3．系统操作过程中，标准液测定只需1次4．样品须澄清，至关重要（本公司提供细胞可溶性总蛋白质制备试剂盒30002.1）5．孵育反应完成后即刻进行荧光测定6．如果酶活性过低，可以增加反应时间至30分钟7．荧光测定后，比色皿须清洗彻底8．建议待测样本为微粒体，其蛋白浓度为20微克/100微升；待测样本为细胞裂解悬液，其蛋白浓度为100至200微克/100微升（本公司提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒30030.1）9．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度通常人体细胞微粒体细胞色素P450亚酶1A2活性浓度为：200－600皮摩尔/分钟/毫克蛋白11．细胞色素P450亚酶CYP1A2单位活性定义为：在37℃，pH7.5条件下，每分钟内能够转化1纳摩尔甲氧基异酚唑至羟基异吩唑酮所需的酶量作为一个活性单位12．本公司提供系列毒理学检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 细胞色素P450酶系总活性荧光定量检测试剂盒产品说明书

  主要用途细胞色素P450酶系（CYP-ECOD）总活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过乙氧基香豆素脱乙基酶反应系统中乙氧基香豆素转化为羟基香豆素后荧光峰值的变化，即采用荧光法来测定样品中酶系活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞或组织裂解萃取液样品（动物、人体）或纯化微粒体样品细胞色素P450酶系的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景细胞色素P450酶是肝细胞微粒体复合功能单加氧化酶系统的总称。其分成五十多个亚酶：CYP1至CYP51。作用在于体内外源化合物（xenobiotics），包括药物、致癌剂、化学污染物的氧化代谢，即单加氧化作用（monooxygenation）和羟化作用（hydroxylation）。乙氧基香豆素脱乙基酶（7-ethoxycoumarinO-deethylase；ECOD）的活性是细胞色素P450酶系的诊断标记，其基于ECOD广泛性催化细胞色素P450亚酶的活性。乙氧基香豆素（7-ethoxycoumarin）在乙氧基香豆素脱乙基酶的催化下，转化为羟基香豆素（7-hydroxycoumarin）后荧光峰值的变化（激发波长368nm，散发波长456nm），来定量测定细胞色素P450酶系的活性。乙氧基香豆素脱乙基酶反应系统为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 细胞色素P450亚酶1A2活性荧光定量检测试剂盒说明书

  细胞色素P450亚酶1A2活性荧光定量检测试剂盒产品说明书主要用途细胞色素P450亚酶1A2活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过甲氧基异酚唑脱甲基酶反应系统中甲氧基异酚唑转化为羟基异吩唑酮后荧光峰值的变化，即采用荧光法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞或组织裂解萃取液样品（动物、人体）或纯化微粒体样品细胞色素P450亚酶1A2的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景细胞色素P450亚酶1A2，简称为CYP1A2，是肝细胞微粒体复合功能氧化酶系统的成员之一，也是芳香族碳氢化合物加羟基酶（arylhydrocarbonhydrorylase；AHH）的成员之一。在人体肝脏里占P450酶系15％。与CYP1A1高度同源，特别是在外显子2、4、5和6。CYP1A2由多个多态性变体，Z常见的是：1A和1F，与kafeiyin代谢和迟发性皮肤卟啉症（porphyriacutaneatarda）相关。CYP1A2的作用在于体内外源化合物（xenobiotics），包括药物、致癌剂、化学污染物的氧化代谢，即单加氧化作用（monooxygenation）和羟化作用（hydroxylation）,以及脂类合成包括胆固醇和类固醇。芳香族碳氢化合物诱导CYP1A2的表达。甲氧基异酚唑脱甲基酶（7－methoxyresorufin-O-demethylase；MROD）的活性是细胞色素P450亚酶1A2的诊断标记，其基于MROD选择性催化细胞色素P450亚酶1A2的活性。甲氧基异酚唑（7－methoxyresorufin）在甲氧基异酚唑脱甲基酶的催化下，转化为羟基异吩唑酮（resorufin）后荧光峰值的变化（激发波长530nm，散发波长590nm），来定量测定细胞色素P450亚酶1A2的活性。甲氧基异酚唑脱甲基酶反应系统为：产品内容缓冲液（ReagentA）毫升反应液（ReagentB）毫升底物液（ReagentC）微升标准液（ReagentD）微升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里，底物液（ReagentC）和标准液（ReagentD）避免光照，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于标准样品操作的容器恒温水槽：用于孵育反应比色皿或酶标板：用于反应和比色的容器荧光分光光度仪或酶标仪：用于荧光分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作。一、测定准备1．准备好待测样品（例如细胞裂解萃取液或微粒体样品等），置于冰槽里2．设定好荧光分光光度仪（温度为37℃）：激发波长530nm，散发波长590nm，并置零3．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管4．加入xx微升缓冲液（ReagentA）到1号管5．分别加入xx微升缓冲液（ReagentA）到2至5号管6．移取xx微升标准液（ReagentD）到1号管，混匀7．小心移取xx微升1号管稀释的标准液（ReagentD）到2号管，混匀8．小心移取xx微升2号管稀释的标准液（ReagentD）到3号管，混匀9．小心移取xx微升3号管稀释的标准液（ReagentD）到4号管，混匀10．将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表管号缓冲液（ReagentA）标准液（ReagentD）标准羟基异吩唑酮浓度1微升微升纳摩尔/升2微升微升1号管纳摩尔/升3微升微升2号管纳摩尔/升4微升微升3号管纳摩尔/升5微升00二、标准曲线测定1．移取xx微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿2．加入xx微升反应液（ReagentB）3．加入xx微升底物液（ReagentC）4．加入xx微升上述配制的标准液5．上下倾倒数次，混匀6．在37℃温度下孵育10分钟7．即刻放进荧光分光光度仪检测获得相对荧光读数8．重复实验步骤1至7四次9．构建标准曲线：纵座标（Y轴）为相对荧光单位；横座标（X轴）为标准羟基异吩唑酮浓度（纳摩尔/升）三、样品测定1．移取xx微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿2．加入xx微升反应液（ReagentB）3．加入xx微升底物液（ReagentC）4．加入xx微升待测样品（20微克微粒体蛋白或100微克细胞裂解萃取液蛋白）（注意：样品须清澈）5．上下倾倒数次，混匀6．在37℃温度下孵育10分钟7．即刻放进荧光分光光度仪检测：获得相关荧光读数8．（选择步骤）重复实验步骤1至7，测读新的样品9．根据标准曲线获得样品对应羟基异吩唑酮浓度四、计算样品活性[根据标准曲线获得样品对应羟基异吩唑酮浓度（纳摩尔/升）X样品稀释倍数]÷10（分钟）]＝皮摩尔/毫升/分钟÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝皮摩尔/毫克/分钟五、酶标板测定1．在96孔酶标板上做好相应标记：标准样品和待测样品2．分别移取xx微升缓冲液（ReagentA）到相应孔中3．分别加入xx微升反应液（ReagentB）4．分别加入xx微升底物液（ReagentC）5．分别加入xx微升上述配制的标准液或待测样品（20微克微粒体蛋白或100微克细胞裂解萃取液蛋白）（注意：样品须清澈）6．轻轻摇动96孔酶标板7．在37℃温度下孵育10分钟8．即刻放进荧光酶标仪检测：获得相对荧光读数9．构建标准曲线：纵座标（Y轴）为相对荧光单位；横座标（X轴）为标准羟基异吩唑酮浓度（纳摩尔/升）10．根据标准曲线获得样品对应羟基异吩唑酮浓度11．活性计算：[根据标准曲线获得样品对应羟基异吩唑酮浓度（纳摩尔/升）X样品稀释倍数]÷xx（反应时间；分钟）]＝皮摩尔/毫升/分钟÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝皮摩尔/毫克/分钟注意事项1．本产品为25次（比色皿）或85次（酶标板）操作，包括标准液2．操作时，须戴手套3．系统操作过程中，标准液测定只需1次4．样品须澄清，至关重要（本公司提供细胞可溶性总蛋白质制备试剂盒30002.1）5．孵育反应完成后即刻进行荧光测定6．如果酶活性过低，可以增加反应时间至30分钟7．荧光测定后，比色皿须清洗彻底8．建议待测样本为微粒体，其蛋白浓度为20微克/100微升；待测样本为细胞裂解悬液，其蛋白浓度为100至200微克/100微升（本公司提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒30030.1）9．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度10.通常人体细胞微粒体细胞色素P450亚酶1A2活性浓度为：200－600皮摩尔/分钟/毫克蛋白11．细胞色素P450亚酶CYP1A2单位活性定义为：在37℃，pH7.5条件下，每分钟内能够转化1纳摩尔甲氧基异酚唑至羟基异吩唑酮所需的酶量作为一个活性单位12．本公司提供系列毒理学检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 细胞色素P450亚酶1A1活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  细胞色素P450亚酶1A1活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-05-07 00:00

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• 细胞色素P450酶系总活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  细胞色素P450酶系总活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-05-07 00:00

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• 体液尿激酶（UROKINASE）活性荧光定量检测试剂盒说明书

  主要用途是一种旨在通过三肽化合物底物p-ERG-pNA受到尿激酶的水解，释放黄色对硝基苯胺，产生吸光峰值的变化，即采用比色法来测定细胞裂解萃取样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体等）尿激酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景尿激酶（urokinase；UK；EC3.4.21.73），又称为尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂（urokinase-typePlasminogenActivator；uPA），属于丝氨酸蛋白酶，存在于血液、细胞外基质和尿液中。尿激酶由411氨基酸构成，分子量为54KD，有3个结构域：丝氨酸蛋白酶结构域、kringle结构域和生长因子结构域。其主要的生理性底物为纤维蛋白溶酶原（Plasminogen），即纤维蛋白溶酶（plasmin）的酶原形式（zymogen），切离部位为Cys-Pro-Gly-Arg⊥Val-Val-Gly-Gly-Cys。一旦切离后激活，纤维蛋白溶酶参与细胞蛋白水解过程，包括血栓溶解（thrombolysis）和细胞外基质降解等。尿激酶与组织重构、修复、血管形成（angiogenesis）性疾病和肿瘤扩散有关。尿激酶的YZ剂是丝氨酸蛋白酶YZ剂（serpins），即纤维蛋白溶酶原激活剂YZ剂（PlasminogenActivatorInhibitor；PAI）。基于人工合成的三肽化合物底物p-EGR-pNA（pyro-Glu-Gly-Arg-p-Nithoaniline；焦谷氨酸酰甘氨酰精氨酰对硝基苯胺）受到尿激酶的水解，释放有色对硝基苯胺，在分光光度仪（405nm波长）下，测定吸光峰值的变化，来定量测定尿激酶的活性。尿激酶反应系统为：产品内容清理液（ReagentA）毫升裂解液（ReagentB）毫升缓冲液（ReagentC）毫升阴性液（ReagentD）毫升底物液（ReagentE）微升产品说明书1份保存方式保存清理液（ReagentA）在4℃冰箱里；其余的保存在-20℃冰箱里；底物液（ReagentE）避免光照和反复冻融；有效保证6月用户自备15[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性荧光定量检测试剂盒

  细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性荧光定量检测试剂盒[详细]

  2015-04-08 00:00

  期刊论文

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• 大鼠细胞色素P450亚酶2B2活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  大鼠细胞色素P450亚酶2B2活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-05-07 00:00

  期刊论文

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• 组织钙蛋白酶（CALPAIN）活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  组织钙蛋白酶（CALPAIN）活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-01-26 00:00

  选购指南

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• 细胞线粒体内钙离子浓度荧光定量检测试剂盒产品说明书

  细胞线粒体内钙离子浓度荧光定量检测试剂盒产品说明书主要用途细胞线粒体内钙离子浓度荧光定量检测试剂是一种旨在通过线粒体钙离子特异性荧光探针Rhod-2-AM，与钙离子结合后，其荧光强度显著增强，在荧光分光光度仪下观察相对荧光峰值的变化，来测定细胞线粒体中总钙离子浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种活体细胞（动物、人体等）内线粒体钙离子的浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。技术背景钙是人体中的一种重要电介质和矿物质，占1150克。其中99％的钙以氟磷灰石钙（calciumfluorophosphateapatite）形式存在于骨组织中。非骨组织钙成分主要存在于细胞内。钙具有两种主要形式：一种是非弥散型蛋白结合钙，其构成约40％至50％的血清中的总钙含量；另一种为弥散型游离钙，其进一步分成具有活性的复合钙（complexedcalcium）和离子钙（ionizedcalcium）。钙对神经肌肉兴奋性（neuromuscularexcitability）、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。在细胞内，钙离子主要储存在线粒体和内质网等细胞器中。其中线粒体钙离子在调节线粒体代谢、保持线粒体的ATP产量达到细胞需求，维持细胞内环境钙离子平衡方面起着重要作用。线粒体钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法（flamephotometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求，以及需要线粒体纯化。Rhod-2-AM，罗丹明123（rhodamine123）的衍生产物，一种与钙离子结合产生荧光，Rhod-2-AM，进入细胞受到酯酶解离，同时其正电荷特性，特异性地聚集在线粒体里，由此用于测定线粒体内钙离子水平。在荧光分光光度仪下，激发波长550nm，散发波长590nm，来定量测定线粒体的钙浓度。产品内容清理液（ReagentA）10毫升染色液（ReagentB）30微升介导液（ReagentC）600微升饱和液（ReagentD）2毫升阴性液（ReagentE）2毫升裂解液（ReagentF）200微升产品说明书1份保存方式保存染色液（ReagentB）和介导液（ReagentC）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器细胞培养箱：用于染色孵育黑色96孔板：用于样品操作的容器荧光酶标仪：用于荧光分析实验步骤测定准备设定好荧光酶标仪（22℃）：激发波长550nm，散发波长590nm测定开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（ReagentB）室温下融化，然后分别移出30微升介导液（ReagentC）和1.5微升染色液（ReagentB）到新的1.5毫升离心管，标记为染色工作液，并放在暗室里备用。然后进行下列操作。二、荧光酶标仪检测准备1个黑色96孔板，标记为：细胞样品孔、空白对照孔（不含细胞）、Zda对照孔（含细胞）小心抽去细胞样品孔的培养液加入100微升清理液（ReagentA）到细胞样品孔里加入100微升饱和液（ReagentD）到Zda对照孔里加入100微升阴性液（ReagentE）到空白对照孔里分别加入10微升染色工作液到所有孔里轻轻摇动黑色96孔板，混匀放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟，避免光照小心抽去细胞样品孔里的上清液小心加入100微升清理液（ReagentA）到细胞样品孔里重复实验步骤9和10一次放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟加入5微升裂解液（ReagentF）到Zda对照孔里放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟即刻放进荧光酶标仪测读：获得相对荧光单位（relativefluorescenceunit；RFU）计算样品线粒体钙离子浓度【（样品RFU－空白对照孔RFU）÷（Zda对照孔RFU－样品RFU）】X570（纳摩尔；解离常数）注意事项本产品为20次操作操作时，须戴手套避免使用EDTA等处理样品孵育反应完成后即刻进行荧光测定如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度检测敏感度可达纳摩尔级钙浓度范围可以使用荧光分光光度仪检测本公司提供系列钙生化检测试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定检测敏感[详细]

  2018-11-19 10:00

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• 细胞色素P450亚酶CYP2D6（AMMC）活性荧光定量检测

  主要用途细胞色素P450亚酶CYP2D6（AMMC）活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过AMMC去甲基化酶反应系统中AMMC转化为AMHC后荧光峰值的变化，即采用荧光法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞或组织裂解萃取液样品（动物、人体）或纯化微粒体样品细胞色素P450亚酶2D6的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景细胞色素P450酶是肝细胞微粒体复合功能单加氧化酶系统的总称。其分成五十多个亚酶：CYP1至CYP51。作用在于体内外源化合物（xenobiotics），包括药物、致癌剂、化学污染物的氧化代谢，即单加氧化作用（monooxygenation）和羟化作用（hydroxylation）。AMMC羟基化酶（AMMC7-hydroxylase）的活性是细胞色素P450亚酶2D6的诊断标记，其基于AMMC羟基化酶选择性催化细胞色素P450亚酶2D6的活性。人体细胞色素P450亚酶2D6（CYP2D6；EC1.14.14.1），主要表达在肝、肾、胎盘、脑、乳腺、肺、和肠道组织中，是肝组织细胞色素P450酶总量的4%。CYP2D6是多态性酶，在80多个等位基因上，出现变异，具有个体和种族差异，与肺癌、肝癌、黑色素瘤、巴金森氏症等疾病发生，以及药物代谢敏感性差异存在相关性。CYP2D6主要代谢三分之一的临床药物，尤其含有碱性氮原子（basicnitrogenatom）的药物，包括异喹胍（debrisoquine）的4-羟基化、鹰爪豆碱（sparteine）的氧化、抗抑郁症药物、神经松弛药（neuroleptic），以及内源性5-羟色胺（hydroxytryptamine）、神经类固醇（neurosteroid）等。同时会产生肝毒性的乙酰苯醌亚胺（N-acetyl-p-benzyquinoneimine）。基于选择性底物AMMC（3（2（N,N-diethyl-N-methylammonium）-ethyl）7-methoxy-4-methylcoumarin）在CYP2D6的去甲基化（o-demethylation）作用下，转化为AMHC羟基香豆素（3（2（N,N-diethyl-N-methylammonium）-ethyl）7-hydroxy-4-methylcoumarin）后荧光峰值的变化（激发波长405nm，散发波长460nm），来定量测定细胞色素P450酶2D6的活性。其反应系统为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 活化凝血因子5（FACTOR Va）活性荧光定量检测试剂盒

  用途主要活化凝血因子5（FACTORVa）活性荧光定量检测试剂是一种旨在活化凝血因子X（FXa）及其辅因子活化凝血因子（FVa），激活凝血酶，进而水解多肽化合物底物H-D-Phe-Pip-Arg-AMC，释放出荧光产物氨甲基香豆素，产生荧光峰值的变化，即采用荧光法来测定血液样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种血浆样品（动物、人体等）活化凝血因子5的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景凝血因子5（FactorV）是维生素K非依赖性的不稳定性单链糖蛋白，由肝组织、内皮组织、巨核细胞、血小板等合成。血小板中含有20至25%凝血因子5。凝血因子5，作为活化凝血因子10的辅因子，成为凝血酶原复合物一员，包括活化凝血因子10、钙离子和磷脂等，其功能在于转化凝血酶原为凝血酶（THROMBIN；EC3.4.21.5），即活化凝血因子II（ActivatedFactorII；FactorIIa），构成常见（common）凝血通路或机制。肝病、弥散性血管内凝血（Disseminatedintravascularcoagulation；DIC）、原发性纤维蛋白溶解症（primaryfibrinolysis）等引起凝血因子5减少或缺失。凝血因子5缺失将导致凝血酶原时间（prothrombintime；PT）和活化部分凝血活酶时间（activatedpartialthromboplastintime；APTT）延长，而出现出血体质。活化凝血因子X（FXa）及其辅因子活化凝血因子（FVa）一起，在钙离子和磷脂的参与下，使凝血酶原（prothrombin）转化为凝血酶（thrombin）基于由此水解人工合成的多肽化合物底物H-D-Phe-Pip-Arg--7-amido-4-methylcoumarin（HD-苯丙氨酰-pipecolyl-精氨酰氨甲基香豆素），释放出荧光7-氨基-4-甲基香豆素（7-amido-4-methylcoumarin；AMC；激发波长360nm；散发波长460nm），来定量测定活化凝血因子V的活性。其反应系统为：[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 细胞谷氨酰胺酶活性光度法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  细胞谷氨酰胺酶活性光度法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-01-15 00:00

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• 细胞基质金属蛋白酶2活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

  主要用途细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过含硫多肽底物以及特定YZ剂存在与否的情况下，受到MMP2的水解，释放出巯基，进而使用Ellman试剂，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定细胞裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或完全纯化酶样品中基质金属蛋白酶2的特异活性定量检测，以及YZ剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，安全可靠。技术背景基质金属蛋白酶（Matrixmetalloproteinases；MMPs）是一类结构高度同源的分泌型或膜相关性锌内肽酶的总称，因含有金属（锌、钙）离子而得名。其功能在于分解细胞外基质成分。迄今为止发现的MMPs至少有28种，几乎能降解除多糖以外的全部细胞外基质（extracellularmatrix）成分，同时参与胚胎发育、形态形成、胚泡植入（blastocyst）、血管形成、组织再吸收（tissueresorption）、疾病发生，例如关节炎、癌细胞浸入转移等。根据降解的底物不同可将MMPs分为4大类：（1）胶原酶：MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和蛋白多糖；（2）明胶酶（Ⅳ型胶原酶）：MMP2、MMP9，又称明胶酶A、B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和弹性纤维；（3）基质溶解素：MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12，主要作用于纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、弹力纤维、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ胶原及MMP1、MMP8、MMP9；（4）膜型金属蛋白酶：MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP，主要作用于明胶、Ⅳ型胶原、MMP2。体内绝大多数细胞并不储备MMPs，当需要MMPs的信号传递到细胞后才临时合成，合成的MMPs以无活性的酶原（proenzyme）形式分泌到细胞外，随后被多种蛋白酶和非蛋白酶水解以及热处理激活，一种激活的MMPs可激活另一种MMPs，形成瀑布效应。基质金属蛋白酶-2，又称明胶酶A（gelatinase-A）或IV型胶原酶（typeIVcollagenase），其前体分子量为72kDa，激活后分子量为62和56kDa。它在血清或细胞上清中浓度通常为10至200纳克/毫升。它的作用目标是天然和变性胶原蛋白（collagens）、纤维连接蛋白（fibronectin）、弹性纤维蛋白（elastin）、层粘连蛋白-5（laminin-5）、前体肿瘤坏死因子-α（pro-TNF-α）和神经（蛋白）聚糖（neurocan）。基质金属蛋白酶-2与肿瘤发展与转移、血管形成、动脉粥样硬化等疾病有关。基于含硫多肽（thiopeptide）底物Ac-PLG（2-mercapto-4-methyl-pentanoyl）-LG-OC2H5，在特异性YZ剂OA-Hy存在与否的条件下，受到MMP2的水解，释放出巯基（sulfhydrylgroup），进而与Ellman试剂5,5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5,5’-dithiobis-（2-nitrobenzoicacid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoicacid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量测定细胞基质金属蛋白酶2的特异活性。基质金属蛋白酶2反应系统为：[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 细胞PTEN活性定磷比色法定量检测试剂盒产品说明书

  细胞PTEN活性定磷比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途细胞PTEN活性定磷比色法定量检测试剂是一种旨在使用特异性合成底物磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），在PTEN去磷酸化后，释放出游离磷酸根，与孔雀绿染料发生显色反应后，采用比色法测定其峰值的变化，以此进行测算单位酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适合于各种细胞裂解悬液样品的PTEN活性及其YZ剂的检测。广泛应用于细胞凋亡、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景细胞张力蛋白同源在10号染色体缺失性磷酸酶（phosphataseandtensinhomologdeletedonchromosometen；PTEN；EC3.1.3.67），又称为多发性晚期肿瘤突变基因1（mutatedinmultipleadvancedcancers1；MMAC1），是一个肿瘤YZ基因，位于染色体10q23.3，转录产物515kb，蛋白产物175氨基酸。PTEN蛋白含有一酪蛋白磷酸酶的功能区和约175个氨基酸左右的与骨架蛋白张力蛋白（tenasin）、辅助蛋白（auxilin）同源的区域，是一种双重特异性磷酸酶，能使酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸、磷酯酰肌醇（phosphoinositide）等去磷酸化。PTEN具有调节细胞周期、防止细胞过度生长和分开裂解、参与细胞凋亡、粘附、迁移、浸润，控制细胞内磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate；PIP3）水平，调控Akt/PKB信号通路等功能。PTEN基因突变和缺失将导致肿瘤发生、发展和转移，以及多发性错构瘤综合征（Cowdensyndrome）等。基于底物磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸，在PTEN的催化下，水解产生磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2），同时释放出游离磷酸根，进而与孔雀绿染料发生显色反应产生其峰值的变化（660nm波长），以此测算PTEN的活性。产品内容清理液（ReagentA）120毫升裂解液（ReagentB）10毫升缓冲液（ReagentC）1毫升阴性液（ReagentD）1毫升反应液（ReagentE）200微升终止液（ReagentF）1毫升显色液（ReagentG）4毫升标准液（ReagentH）500微升产品说明书1份保存方式保存裂解液（ReagentB）、缓冲液（ReagentC）、反应液（ReagentE）和显色液（ReagentG）在－20℃冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在4℃冰箱里；终止液（ReagentF）和显色液（ReagentG）具有腐蚀性，避免直接用手接触；显色液（ReagentG）避免光照，有效保证6月用户自备15毫升离心管：用于样品处理的容器1.5毫升离心管：用于样品处理和保存的容器细胞刮脱棒：用于贴壁细胞脱离（微型）台式离心机：用于样品收集培养箱：用于孵育反应物比色皿：用于比色的容器分光光度仪：用于比色分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液放进冰槽里融化。然后进行下列操作。样品准备准备好25cm2细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞（5X106细胞）小心加入3毫升预冷的清理液（ReagentA），覆盖生长表面小心抽去清理液使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞加入3毫升清理液（ReagentA），混匀细胞移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g小心抽去上清液加入500微升裂解液（ReagentB），充分混匀转移到预冷的1.5毫升离心管QL涡旋震荡15秒置于冰槽里孵育30分钟放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管移取2微升进行蛋白定量测定（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－HL30030.1）即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作二、测定准备准备好待测样品（例如细胞裂解萃取液等），置于冰槽里（注意：样品须澄清）设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长为660nm，并置零准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管按下表分别加入阴性液（ReagentD）和标准液（ReagentH）到每个离心管，混匀将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表管号阴性液（ReagentD）标准液（ReagentH）测定体系标准磷浓度10100微升20微摩尔/升225微升75微升15微摩尔/升350微升50微升10微摩尔/升475微升25微升5微摩尔/升5100微升00标准曲线测定移取20微升阴性液（ReagentD）到新的比色皿加入5微升上述配制的标准液在37℃温度下孵育10分钟加入8微升终止液（ReagentF），混匀加入100微升显色液（ReagentG），混匀室温下静置15分钟，避免光照即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数重复实验步骤1至7四次构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（A）；横座标（X轴）为标准磷浓度（微摩尔/升）样品背景测定移取20微升缓冲液（ReagentC）到新的比色皿加入5微升待测样品（总量100微克细胞裂解萃取液蛋白）在37℃温度下孵育10分钟加入8微升终止液（ReagentF），混匀加入100微升显色液（ReagentG），混匀室温下静置15分钟，避免光照即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数根据标准曲线获得样品背景对应磷浓度样品活性测定移取10微升缓冲液（ReagentC）到新的比色皿加入5微升待测样品（总量100微克细胞裂解萃取液蛋白）在37℃温度下孵育2分钟加入10微升反应液（ReagentE）在37℃温度下孵育10分钟加入8微升终止液（ReagentF），混匀加入100微升显色液（ReagentG），混匀室温下静置15分钟，避免光照即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数根据标准曲线获得样品活性对应磷浓度计算样品活性{[根据标准曲线获得样品活性对应磷浓度（微摩尔/升）根据标准曲线获得样品背景对应磷浓度（微摩尔/升）]X5（体系倍数）X样品稀释倍数}÷10（反应时间；分钟）＝纳摩尔磷/毫升/分钟÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝纳摩尔磷/毫克/分钟注意事项本产品为25次操作，包括5次标准测定操作时，避免污染母液操作时，须戴手套终止液（ReagentF）和显色液（ReagentG）具有腐蚀性，避免直接用手接触样品切忌使用磷酸缓冲液和脱氧胆酸纳处理比色测定后，比色皿须清洗彻底如果用户没有660nm波长，可以使用600至660nm的任一波长替代显示绿色表明具有较强酶活性空白对照读数应小于0.2建议待测样本蛋白浓度为100微克/5微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量；（本公司提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－HL30030.1）钙调神经磷酸酶活性单位浓度定义：在37℃温度下，pH8.0的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）释放1微摩尔的磷本公司提供系列磷酸化酶检测试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定检测准确[详细]

  2018-11-19 10:00

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• 细胞NADPH氧化酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  细胞NADPH氧化酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-01-07 00:00

  实验操作

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• 细胞丙酮酸激酶总活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  细胞丙酮酸激酶总活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2024-09-20 13:41

  应用文章

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• 植物钙离子浓度荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  植物钙离子浓度荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物钙离子浓度荧光定量检测试剂是一种旨在通过钙离子特异性荧光探针Fluo-4，与钙离子结合后，其荧光强度显著增强，在荧光分光光度仪下观察相对荧光峰值的变化，来测定植物组织裂解悬液中总钙离子浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）、胚胎叶（cotyledon）、上胚轴（epicotyl）等裂解萃取样品中总钙离子的浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。技术背景钙是人体中的一种重要电介质和矿物质，占1150克。其中99％的钙以氟磷灰石钙（calciumfluorophosphateapatite）形式存在于骨组织中。非骨组织钙成分主要存在于细胞内。钙具有两种主要形式：一种是非弥散型蛋白结合钙，其构成约40％至50％的血清中的总钙含量；另一种为弥散型游离钙，其进一步分成具有活性的复合钙（complexedcalcium）和离子钙（ionizedcalcium）。钙对神经肌肉兴奋性（neuromuscularexcitability）、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法（flamephotometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求。Fluo-4，一种与钙离子结合，其荧光强度迅速增强100倍的荧光探针，可以敏感测定微量游离钙离子水平。在荧光分光光度仪下，激发波长485nm，散发波长520nm，来定量测定植物组织细胞的钙浓度。产品内容清理液（ReagentA）60毫升裂解液（ReagentB）20毫升反应液（ReagentC）6毫升饱和液（ReagentD）2毫升阴性液（ReagentE）2毫升产品说明书1份保存方式保存清理液（ReagentA）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里；反应液（ReagentC）避免光照；有效保证6月[详细]

  2018-11-08 10:00

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