血浆中C5a的ELISA测定

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2018-10-01 10:00 354阅读次数

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实验原理将抗C5a单克隆抗体包被固相聚苯乙烯板，加入经聚乙二醇（PEG）处理的待测样本，然后依次加入兔抗人C5a-IgC多克隆抗体和过氧化物酶标记的猪抗兔IsC，再加入底物2，2’-连氮-双（3-乙基苯骈唑啉-6-磺酸盐）（ABTS）和H2O2显色，于酶标仪405mn处测定每分钟光密度增加量（OD/min），以OD/min为纵坐标，C5a标准晶浓度为横坐标绘制标准曲线图，求出待测样本中C5a的含量。实验试剂1.PBSPH7.2，9mmol/L磷酸盐缓冲液含140mmol/LNaCl。2.PBS-TweenpH7.2PBS含0.05％Tween20，简称PBS-T。3.底物溶液：100mL2mmol/LABTS溶液中含100mmol/L醋酸钠，50mmol/L磷酸钠，2.5mmol/LH2O2。4.沉淀剂：①：100mLpH8.0，20mmoL/LTris-甘氨酸-HCl缓冲液中含20gPEG4000，0.8gRivanol；沉淀剂②：100mLpH2.0.100mmol／L甘氨酸-HCl缓冲液中含20gPEG4000。

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血浆中C5a的ELISA测定

实验原理将抗C5a单克隆抗体包被固相聚苯乙烯板，加入经聚乙二醇（PEG）处理的待测样本，然后依次加入兔抗人C5a-IgC多克隆抗体和过氧化物酶标记的猪抗兔IsC，再加入底物2，2’-连氮-双（3-乙基苯骈唑啉-6-磺酸盐）（ABTS）和H2O2显色，于酶标仪405mn处测定每分钟光密度增加量（OD/min），以OD/min为纵坐标，C5a标准晶浓度为横坐标绘制标准曲线图，求出待测样本中C5a的含量。实验试剂1.PBSPH7.2，9mmol/L磷酸盐缓冲液含140mmol/LNaCl。2.PBS-TweenpH7.2PBS含0.05％Tween20，简称PBS-T。3.底物溶液：100mL2mmol/LABTS溶液中含100mmol/L醋酸钠，50mmol/L磷酸钠，2.5mmol/LH2O2。4.沉淀剂：①：100mLpH8.0，20mmoL/LTris-甘氨酸-HCl缓冲液中含20gPEG4000，0.8gRivanol；沉淀剂②：100mLpH2.0.100mmol／L甘氨酸-HCl缓冲液中含20gPEG4000。[详细]
2018-10-01 10:00
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小鼠补体C5a（C5a）ELISA试剂盒说明书

小鼠补体C5a（C5a）ELISA试剂盒（用于血清、血浆、细胞培养上清液和生物体液内）原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗小鼠C5a单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的C5a与单抗结合，加入生物素化的抗小鼠C5a，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，Z后加终止液，在450nm处测OD值，C5a浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中C5a浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：30ug/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗体工作液（BiotinylatedAntibody）12ml终止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（肝素抗凝）、细胞培养上清液等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。血清、血浆作1：10稀释（取20ul，加标本稀释液180ul,稀释10倍）。细胞培养上清可以不做稀释直接检测。2.标准品液配制：使用前加入3ml蒸馏水混匀，配成10000ng/ml的溶液。设标准管8管，**管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在**管中加入10000ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品1000、500、250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、0ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应C5a含量，再乘上稀释倍数即可。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的C5a检测浓度小于4ng/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的小鼠C5a。不与小鼠其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于10％。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！[详细]
2018-09-13 10:01
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人补体片段C5a（C5a）ELISA试剂盒说明书

人补体片段C5a（C5a）ELISA试剂盒（用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内）原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人C5a单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的C5a与单抗结合，加入生物素化的抗人C5a，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，Z后加终止液，在450nm处测OD值，C5a浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中C5a浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：5ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗体工作液（BiotinylatedAntibody）12ml终止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（肝素抗凝）、细胞培养上清液、尿液、唾液等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。血清、血浆作1：100稀释（取10ul，加标本稀释液990ul,稀释100倍），2.标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，配成10000pg/ml的溶液。设标准管8管，每管加入标本稀释液200ul。在**管中加入10000pg/ml的标准品溶液200ul混匀后用加样器吸出200ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出200ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品5000、2500、1250、625、312、156、78、0pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应C5a含量，再乘上稀释倍数即可。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的C5a检测浓度小于40pg/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的人C5a。不与人其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于10％。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！[详细]
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人血浆样本中总胆汁酸含量测定方法上海恒远生物提醒大家：人总胆汁酸Elisa试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T0.6mmol/L-16mmol/L使用目的：人总胆汁酸Elisa试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中总胆汁酸（TBA)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人总胆汁酸（TBA)水平。用纯化的人总胆汁酸（TBA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入总胆汁酸（TBA)，再与HRP标记的总胆汁酸（TBA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的总胆汁酸（TBA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人总胆汁酸（TBA)浓度。[详细]
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