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FH-M025-小鼠外周血来源内皮祖细胞说明书
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FH-M025-小鼠外周血来源内皮祖细胞说明书
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2018-09-13 10:00
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- 为方便广大用户使用,试剂内容如下:名称产品编号规格A羊外周血淋巴细胞分离液200mlB样本稀释液(赠品)2010C1119200mlC清洗液(赠品)2010X1118200mlD说明书羊外周血淋巴细胞分离液说明书【实验前准备】A.适用仪器Zda离心力可达1200g的水平转子离心机B.耗材产品名称产品货号产地15ml离心管散装339650美国NUNC15ml离心管架装339651美国NUNC50ml离心管散装339652美国NUNC50ml离心管架装339653美国NUNC无菌胶头滴管或塑料滴管羊外周血淋巴细胞分离液说明书【检验方法】全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。首先取抗凝血按体积比1:1的比例与样本稀释液(产品编号:2010C1119)混匀,根据稀释后的样本量大小,分以下两种情况:情况A:稀释后的血液样本量小于5ml时,实验方法如下:1.取一支15ml离心管,先加入与稀释后样本等量的分离液(注:分离液Z少不得少于3ml)。2.用吸管小心吸取稀释后的血液样本加于分离液液面上,400-500g,离心20-30min(注:根据血液样本量确定离心条件,血液样本量越多,离心力越大,离心时间越长,具体离心条件需客户自行摸索,以达到Z理想分离效果)。3.离心后,此时离心管中由上至下分为四层。**层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中,往所得离心管中加入10ml清洗液(产品编号:2010X1118),混匀细胞。5.250g,离心10min。6.弃上清。7.用吸管以5ml清洗液(产品编号:2010X1118)重悬所得细胞。8.250g,离心10min。9.重复6、7、8,弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。情况B:稀释后的血液样本量大于等于5ml时,实验方法如下:1.取一支适当的离心管,先加入与稀释后样本等量的分离液。2.将经稀释后的血液样本小心加于分离液之液面上,550-650g(Zda离心力可至1000g),离心20-30min。(注:根据血液样本量确定离心条件,血液量越多,离心力越大,离心时间越长,具体离心条件需客户自行摸索,以达到Z理想分离效果。加入血液样本后,样本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二)。3.剩余步骤同“情况A”中步骤3至步骤9。【注意事项】1.全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。为获得Z理想的实验结果,**在取血2h内进行实验,血液存放时间越长,细胞分离效果越差。血液放置超过6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。2.本实验**不要使用高聚合材质(如聚苯乙烯)的塑料制品,应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品,因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面,影响细胞分离效果。3.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。4.吸取过多的淋巴细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。5.如所实验后细胞得率或活性过低,请联系上海研谨生物以寻求技术支持帮助。羊外周血淋巴细胞分离液说明书【储存条件及有效期】18-25℃保存,有效期2年。本品易感染细菌,需无菌条件操作。无菌条件下操作,启封后置常温保存。如4℃保存,本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。【参考值(参考范围)】本实验淋巴细胞提取率及纯度均大于80%。[详细]
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2018-09-14 10:00
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- 人外周血淋巴细胞分离液说明书产品简介:本产品是一种用于分离人外周血淋巴细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。其分离原理是根据血细胞的密度差异(红细胞和粒细胞密度为1.090g/mL左右;淋巴细胞和单核细胞密度为1.075~1.090g/mL;血小板为1.030~1.035g/mL),通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将淋巴细胞从人外周血或脐带血中分离出来。产品指标:密度1.077±0.001g/mL渗透压290~350mOsm/kgH2O无菌0.1μm滤膜过滤保存条件:本产品对光敏感,应该室温避光储存,保质期2年。无菌开封后,保存于室温。操作步骤:1.取新鲜抗凝全血(EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可)或者去纤维蛋白血液,用等体积的全血及组织稀释液或者PBS稀释全血。2.在离心管中加入适量分离液(当稀释后血液体积小于3mL时,加入3mL分离液;大于等于3mL,加入等体积分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二,否则会影响分离效果),将稀释后的血液平铺到分离液液面上方,注意保持两液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,然后将血液小心的平铺于分离液上,因为两者的密度差异,将形成明显的分层界面。如果样品较多加样时间较长,在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。)3.室温,水平转子500~1000g,离心20~30min(血液的体积越大所需的离心力越大,离心时间越长,**的分离条件需摸索,离心转速Zda不超过1200g)。4.离心后将出现明显的分层:Z上层是稀释的血浆层,中间是透明的分离液层,血浆与分离液之间的白膜层即为淋巴细胞层,离心管底部是红细胞与粒细胞。5.小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管中,10mLPBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g,离心10min。6.弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。7.重复步骤68.弃上清,细胞重悬备用。分离纯度:使用人淋巴细胞分离液分离淋巴细胞的分离纯度大于90%。注意事项:开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封,避免微生物污染。。分离液使用时应始终保持室温(18℃~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心,可能会导致白膜层中红细胞污染加重。血液样本**为新鲜抗凝血(采血2h以内),为保持淋巴细胞的活性,应避免冷冻和冷藏。稀释血液或洗涤细胞,不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集,大大降低细胞得率及纯度。部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁,影响分离效果。血液样本的粘稠度或者是温度差异,可能会影响分离效果,可以调节离心转数和离心时间,摸索**的分离条件。吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加;吸取过多的血浆层可能会导致淋巴细胞中血浆蛋白及血小板污染。如果要进一步对分离的细胞进行培养,那在收集血液和分离过程中,注意无菌操作,避免微生物污染。不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同,用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。[详细]
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2018-11-19 10:00
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