FH-H074-人外周血来源内皮祖细胞说明书

本文由 上海富衡生物科技有限公司 整理汇编

2024-05-30 09:33 79阅读次数

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  人外周血淋巴细胞分离液说明书产品简介：本产品是一种用于分离人外周血淋巴细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。其分离原理是根据血细胞的密度差异（红细胞和粒细胞密度为1.090g/mL左右；淋巴细胞和单核细胞密度为1.075~1.090g/mL；血小板为1.030~1.035g/mL），通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将淋巴细胞从人外周血或脐带血中分离出来。产品指标：密度1.077±0.001g/mL渗透压290~350mOsm/kgH2O无菌0.1μm滤膜过滤保存条件：本产品对光敏感，应该室温避光储存，保质期2年。无菌开封后，保存于室温。操作步骤：1.取新鲜抗凝全血（EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可）或者去纤维蛋白血液，用等体积的全血及组织稀释液或者PBS稀释全血。2.在离心管中加入适量分离液（当稀释后血液体积小于3mL时，加入3mL分离液；大于等于3mL，加入等体积分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果），将稀释后的血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后将血液小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面。如果样品较多加样时间较长，在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。）3.室温，水平转子500~1000g，离心20~30min（血液的体积越大所需的离心力越大，离心时间越长，**的分离条件需摸索，离心转速Zda不超过1200g）。4.离心后将出现明显的分层：Z上层是稀释的血浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分离液之间的白膜层即为淋巴细胞层，离心管底部是红细胞与粒细胞。5.小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管中，10mLPBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g，离心10min。6.弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。7.重复步骤68.弃上清，细胞重悬备用。分离纯度：使用人淋巴细胞分离液分离淋巴细胞的分离纯度大于90%。注意事项：开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免微生物污染。。分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心，可能会导致白膜层中红细胞污染加重。血液样本**为新鲜抗凝血（采血2h以内），为保持淋巴细胞的活性，应避免冷冻和冷藏。稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集，大大降低细胞得率及纯度。部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。血液样本的粘稠度或者是温度差异，可能会影响分离效果，可以调节离心转数和离心时间，摸索**的分离条件。吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加；吸取过多的血浆层可能会导致淋巴细胞中血浆蛋白及血小板污染。如果要进一步对分离的细胞进行培养，那在收集血液和分离过程中，注意无菌操作，避免微生物污染。不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。[详细]

  2018-11-19 10:00

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• 人血管内皮生长因子 （VEGF）试剂盒说明书

  人血管内皮生长因子（VEGF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T30pg/ml-1200pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中血管内皮生长因子（VEGF）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血管内皮生长因子（VEGF）水平。用纯化的人血管内皮生长因子（VEGF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血管内皮生长因子（VEGF），再与HRP标记的血管内皮生长因子（VEGF）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管内皮生长因子（VEGF）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人血管内皮生长因子（VEGF）浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（2400pg/ml）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50l，待测样品孔中先加样品稀释液40l，然后再加待测样品10l（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50l，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50l，再加入显色剂B50l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止1200pg/ml5号标准品150l的原倍标准品加入150l标准品稀释液600pg/ml4号标准品150l的5号标准品加入150l标准品稀释液300pg/ml3号标准品150l的4号标准品加入150l标准品稀释液150pg/ml2号标准品150l的3号标准品加入150l标准品稀释液75pg/ml1号标准品150l的2号标准品加入150l标准品稀释液液后15分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月elisa试剂盒价格48次1200元，96次2200元标本收集方法：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。3.尿液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。5.培养细胞检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。6.组织标本切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂,用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。本公司试剂盒种类齐全，包括人、大鼠、小鼠、兔、羊、马、牛、豚鼠、猴、鱼、植物、食品等，近千种试剂盒已经投入市场，为广大科研工作者所使用，备受客户的青睐本公司联系方式：技术部13636351217销售部021-60520498欢迎各位老师前来咨询订购。[详细]

  2018-11-16 10:02

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• FH-R135-大鼠外周血白细胞说明书

  FH-R135-大鼠外周血白细胞说明书[详细]

  2024-05-30 09:33

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• 人内皮脂肪酶E（EL）ELISA试剂盒说明书

  人内皮脂肪酶E（EL）ELISA试剂盒（用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内）原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人EL单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的EL与单抗结合，加入生物素化的抗人EL，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，Z后加终止液，在450nm处测OD值，EL浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中EL浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：72ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗体工作液（BiotinylatedAntibody）12ml终止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存。2.标准品液配制：使用前加入0.3ml蒸馏水混匀，配成240ng/ml的溶液。设标准管8管，每管加入标本稀释液300ul。在**管中加入240ng/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品120、60、30、15、7.5、3.75、1.875、0ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应EL含量即可。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的EL检测浓度小于1ng/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的人EL。不与人其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于10％。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！[详细]

  2018-09-13 10:01

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