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干扰素生物学活性测定法
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本文由 上海盈公生物技术有限公司 整理汇编
2018-09-27 10:00 720阅读次数
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本法系依据干扰素可以保护人羊膜细胞(WISH)免受水泡性口炎病毒(VSV)破坏的作用,用结晶紫对存活的WISH细胞染色,于波长570nm处测定其吸光度,可得到干扰素对WISH细胞的保护效应曲线,以此测定干扰素生物学活性。试剂(1)MEM或RPMI1640培养液取MEM或RPMI1640培养基粉末1袋(规格为1L),加水溶解并稀释至1000ml,加青霉素105IU和链霉素105IU,再加碳酸氢钠2.1g,溶解后,混匀,CJ过滤,4℃保存。(2)完全培养液量取新生牛血清10ml,加MEM或RPMI1640培养液90ml。4℃保存。(3)测定培养液量取新生牛血清7ml,加MEM或RPMI1640培养液93ml。4℃保存。(4)攻毒培养液量取新生牛血清3ml,加MEM或RPMI1640培养液97ml。4℃保存。(5)消化液取乙二胺四乙酸二钠0.2g、氯化钠8.0g、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠1.152g、磷酸二氢钾0.2g,加水溶解并稀释至1000ml,经121℃15分钟灭菌。(6)染色液取结晶紫50mg,加无水乙醇20ml溶解后,加水稀释至100ml,即得。(7)脱色液取无水乙醇50ml、乙酸0.1ml,加水稀释至100ml。(8)PBS取氯化钠8.0g、氯化钾0.20g、磷酸氢二钠1.44g、磷酸二氢钾0.24g,加水溶解并稀释至1000ml,经121℃15分钟灭菌。标准品溶液的制备取人干扰素生物学活性测定的国家标准品,按说明书复溶后,用测定培养液稀释至每1ml含1000IU。在96孔细胞培养板中,做4倍系列稀释,共8个稀释度,每个稀释度做2孔。在无菌条件下操作。供试品溶液的制备将供试品按标示量溶解后,用测定培养液稀释成每1ml约含1000IU。在96孔细胞培养板中,做4倍系列稀释,共8个稀释度,每个稀释度做2个孔。在无菌条件下操作。测定法使WISH细胞在培养基中贴壁生长。按12~14传代,每周2~3次,于完全培养液中生长。取培养的细胞弃去培养液,用PBS洗2次后消化和收集细胞,用完全培养液配制成每1ml含2.5×105~3.5×105个细胞的细胞悬液,接种于96孔细胞培养板中,每孔100μl。于37℃、5%二氧化碳条件下培养4~6小时。将配制完成的标准品溶液和供试品溶液移入接种WISH细胞的培养板中,每孔加入100μl。于37℃、5%二氧化碳条件下培养18~24小时。弃去细胞培养板中的上清液。将保存的水泡性口炎病毒(VSV,-70℃保存)用攻毒培养液稀释至约100CCID50,每孔100μl。于37℃、5%二氧化碳培养24小时(镜检标准品溶液的50%病变点在1IU/ml)。然后弃去细胞培养板中的上清液,每孔加入染色液50μl,室温放置30分钟后,用流水小心冲去染色液,并吸干残留水分,每孔加入脱色液100μl,室温放置3~5分钟。混匀后,用酶标仪以630nm为参比波长,在波长570nm处测定吸光度,记录测定结果。试验数据采用计算机程序或四参数回归计算法进行处理。并按下式计算试验结果供试品生物学活性(IU/ml)=Pr×Ds×EsDr×Er式中Pr为标准品生物学活性,IU/ml;Ds为供试品预稀释倍数;Dr为标准品预稀释倍数;Es为供试品相当于标准品半效量的稀释倍数;Er为标准品半效稀释倍数。
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干扰素生物学活性测定法
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巨噬细胞的生物学意义
- Mφ参与非特异性免疫和特异性免疫。在非特异性免疫中.主要通过吞噬作用杀灭和清除病原体及异物,并介导炎症反应;在特异性免疫中主要发挥免疫调节及抗原提呈功能。1.参与固有免疫M中可借表面PRR如Toll样受体(TLR)、清道夫受体(SR)等受体识别病原体表面的病原体相关分子模式(PAMP),吞噬、杀伤和清除细菌、病毒等,在固有免疫中起重要作用。此外,M甲还能清除及损伤、衰老的组织细胞,故M中又有清道夫(scavenger)细胞之称。2.介导和促进炎症反应单核/巨噬细胞以下列两种形式参与炎症反应。一是炎症部位高浓度趋化因子MCP-1、IFN-7、GM-CSF和G-CSF等可与单核/巨噬细胞表面相应受体作用,诱导细胞活化并向感染部位募集。活化的单核/巨噬细胞进一步分泌M甲炎症蛋白MIP-la/p、MCP-1和IL-8等趋化因子,诱导更多的M甲活化和募集。除了上面提到的多种促炎因子如IL-1p、IL-6和TNF-a,并分泌大量炎症介质如白三烯、前列腺素、弹性蛋白酶、溶菌酶、尿激酶等.诱导和加强局部的炎症反应。另一方面,活化M平分泌的因子能调动其他粒细胞和淋巴细胞,共同促进局戈及全身的炎症反应。Mφ的分泌产物及其功能Mφ泌物同时在适应性免疫中发挥效应功能。其中主要包括:ILl(激HX管内皮细胞和淋巴细胞,加强局部免疫应答以及炎症反应,引起发热并促进IL-6的产生)、IL8(趋化作用和激活中性白细胞,加应细胞功能)、TNFα(激HX管内皮细胞,增加血管通透性,导致IgG、补体和细胞进入组织及淋巴结)、IL-6(激活淋巴细胞,促进抗体产生,引起发热)、ILl2(激活NK细胞、Thl分化)、IFN丁(激活NK细胞和CTL,增强免疫应答)。3.实施免疫杀伤静止期的单核/巨噬细胞杀伤病毒感染细胞的活性较弱,经LPS或IFN-~等因子激活后,其表面受体的表达增强,可以将效应物质释放到胞外,直接对靶细胞进行清除,其中有活性氧中间物、活性氮中间物和水解酶的作用。同时活化M中分泌的TNF。也能够诱导靶细胞发生凋亡。单核/巨噬细胞还能够通过ADCC途径杀伤靶细胞,参与肿瘤免疫与抗病毒免疫。4.加工和提呈抗原作为专职APC,M甲能加工和提呈抗原,启动再次免疫应答。兔巨噬细胞炎症蛋白-4(MIP-4)ELISAKit人巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)ELISAKit小鼠巨噬细胞炎性蛋白5(MIP-5)ELISAKit犬粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISAKIT[详细]
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- 精准医学(PrecisionMedicine)是以实现个体化医疗为目标,伴随基因组测序技术的快速发展以及生物信息与大数据科学的交叉应用而发展起来的新型医学概念与医疗模式。其本质是通过适合人群大队列研究的基因组、转录组、蛋白质组、翻译后修饰组和代谢组学等新- -代“基因型表型”的大数据,结合Z先进的医学前沿技术与个体临床表型,对大样本人群与特定疾病类型进行生物标记物的分析、鉴定、验证与应用,从而精确寻找到疾病的病因和治疗的靶点,并对同一种疾病的不同状态和过程进行精确分类,提高疾病的预防效益与诊治效率,Z终实现对患者进行个性化精准治疗。
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2022-02-07 13:41
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β干扰素(IFN-β)试剂盒
- β干扰素(IFN-β)试剂盒本试剂盒仅供研究使用。检测范围:96T3μg/L-120μg/L使用目的:β干扰素(IFN-β)试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中内皮素(ET)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠内皮素(ET)水平。用纯化的大鼠内皮素(ET)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入内皮素(ET),再与HRP标记的内皮素(ET)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的内皮素(ET)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠内皮素(ET)浓度。β干扰素(IFN-β)试剂盒标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。120μg/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液60μg/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液30μg/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液15μg/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液7.5μg/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7.温育:操作同3。8.洗涤:操作同5。9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。β干扰素(IFN-β)试剂盒注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线,**做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔**孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请Z后乘以总稀释倍数(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效:6个月本试剂盒仅供研究使用。检测范围:96T3μg/L-120μg/L使用目的:本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中内皮素(ET)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠内皮素(ET)水平。用纯化的大鼠内皮素(ET)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入内皮素(ET),再与HRP标记的内皮素(ET)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的内皮素(ET)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠内皮素(ET)浓度。猪组织因子(TF)ELISA试剂盒标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。120μg/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液60μg/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液30μg/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液15μg/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液7.5μg/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7.温育:操作同3。8.洗涤:操作同5。9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。猪组织因子(TF)ELISA试剂盒注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线,**做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔**孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请Z后乘以总稀释倍数(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效:6个月本试剂盒仅供研究使用。检测范围:96T3μg/L-120μg/L使用目的:本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中内皮素(ET)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠内皮素(ET)水平。用纯化的大鼠内皮素(ET)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入内皮素(ET),再与HRP标记的内皮素(ET)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的内皮素(ET)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠内皮素(ET)浓度。猪组织因子(TF)ELISA试剂盒标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。120μg/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液60μg/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液30μg/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液15μg/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液7.5μg/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7.温育:操作同3。8.洗涤:操作同5。9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。猪组织因子(TF)ELISA试剂盒注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线,**做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔**孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请Z后乘以总稀释倍数(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效:6个月[详细]
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2018-09-28 10:00
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2011-05-30 00:00
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徕卡精准空间生物学解决方案宣传单页
- 徕卡显微系统精准空间生物学解决方案提供从样本取材,到H&E明场成像、多色荧光成像、超多色荧光成像到图像分析,再带激光显微切割技术链接下游的精确分析技术(如质谱等),从整体到微观,覆盖基因组、蛋白组和代谢组领域,解析生物的结构、功能和疾病。
手术及组织取材
明场全境组织成像
常规荧光全境组织成像
多色荧光高分辨率全境组织成像(<10色)
超多色荧光全境组织成像(>10色)
共聚焦成像技术
精确切割目标区域
精确数据分析[详细]
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2024-09-12 16:00
应用文章
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水分测定法
- 水分测定仪,采用卤素灯热解重量原理,是一种快速的水分检测仪器。水分测定仪在测量样品重量的同时,卤素灯加热单元和水分蒸发通道快速干燥样品,在干燥过程中,水分仪持续测量并即时显示样品丢失的水分含量%,干燥程序完成后,Z终测定的水分含量值被锁定显示。工业上用海水晒盐(也称盐田法)或用井水、盐湖水煮盐,使食盐晶体析出。这样制得的食盐含有较多的杂质,叫做粗盐。粗盐经溶解、沉淀、过滤、蒸发,可制得精盐。还有较多人为了补充更多的盐分,将碘元素加了进去。精制盐粉碎洗涤盐日晒盐优级/一级/二级一级/二级一级/二级物理指标:白度807567555545粒度%0.15-0.85mm0.5-2.5mm0.5-2.5mm1.0-3.5mm化学指标(湿基)%:氯化钠99.198.597.0097.0095.593.291.00水份0.300.500.802.103.205.106.4水不溶物0.050.100.200.10.200.100.20水溶性杂质--2.000.801.101.602.40食盐水分测定仪,采用卤素灯热解重量原理,是一种快速的水分检测仪器。水分测定仪在测量样品重量的同时,卤素灯加热单元和水分蒸发通道快速干燥样品,在干燥过程中,水分仪持续测量并即时显示样品丢失的水分含量%,干燥程序完成后,Z终测定的水分含量值被锁定显示。与国际烘箱加热法相比,卤素加热可以Z短时间内达到Zda加热功率,在高温下样品快速被干燥,其检测结果与国标烘箱法具有良好的一致性,具有可替代性,且检测效率远远高于烘箱法。一般样品只需几分钟即可完成测定。且操作简单,测试准确,分别可显示水分值、干燥值、测定时间、温度值、等数据。并具有与计算机,打印机连接功能。建议使用规格为XY-105MW,建议标准样品5g,测试条件:标准、快速测试时间:3-6分钟。[详细]
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2018-08-22 10:00
产品样册
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沥青灰分测定法
- 适用范围:沥青灰分测定仪是按照标准SH/T0422所规定的要求设计制造的,适用于测定沥青的灰分功能特点:1、沥青灰分测定仪采用一体化设计,操作维护简单方便2、沥青灰分测定仪采用PID温控控温体系,控温精度高,稳定3、沥青灰分测定仪采用陶瓷纤维材料,保温效果更好技术参数:1、工作电源:AC220V±10%;50Hz2、电炉(加热板)加热功率:2400W3、高温炉(箱式电炉):加热温度900±25℃,额定功率2500W4、加热控制:开关手动控制5、瓷坩埚:50ml、100ml[详细]
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2018-09-03 10:00
产品样册
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比表面积测定法
- 比表面积测定法[详细]
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2024-09-20 04:19
专利
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siskiyou显微微操产品,用于生物学医学
- 我们的客户经常需要各种各样的用于实验室实验的配置。 对这种灵活性的需求导致了我们的模块化设计?概念。 这一概念有助于将我们的产品以Z少的更改或中断整合到单个研究人员的系统中,从而保持稳定性并支持成功。 客户满意度始终是 Siskiyou 的重中之重。
此产品系列中包含:显微微操控制器(4轴向闭环控制器、电控机械手、ST50-CV 电极夹具 、关节臂、MX130L 4轴 微操机械手、显微镜位移台、显微镜样品平台)[详细]
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2022-11-21 14:56
产品样册
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小鼠γ干扰素(IFN-γ)说明书
- 小鼠γ干扰素(IFN-γ)说明书[详细]
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2015-05-18 00:00
报价单
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牛γ干扰素(IFN-γ)试剂盒
- 牛γ干扰素(IFN-γ)试剂盒[详细]
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2016-07-02 00:00
专利
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