细胞脂质比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

本文由 上海哈灵生物科技有限公司 整理汇编

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  细胞弹性蛋白含量比色法（TPPS）定量检测试剂盒产品说明书主要用途细胞弹性蛋白含量比色法（TPPS）定量检测试剂是一种旨在通过酸性加热萃取并转化为可溶性弹性蛋白，与四苯基卟吩四磺酸染料结合，在碱性条件下，释放棕红色染料，酸性处理后，由分光光度仪比色分析，定量检测细胞样品中弹性蛋白含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。可以用于检测各种弹性蛋白，包括原弹性蛋白（tropoelastin）、致山黧豆中毒弹性蛋白（lathyrogenic）、α弹性蛋白、k-弹性蛋白等。适用于各种细胞（动物、人体等）或培养上清弹性蛋白水平检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测准确。技术背景弹性蛋白（elastin）是一种不溶性的非极性的碱性蛋白，具有高度抗拉能力（tensilestrength），存在于大动脉、气管、支气管、韧带等结缔组织细胞间。弹性蛋白由多肽二价交联随机扭绞（randomlykinked）组成，通过锁链素（desmosine）和异锁链素（isodesmosine）相连。动物细胞上的原弹性蛋白（tropoelastin）为单体，可溶性，分子量为62至72Kd。与微纤丝（microfibril）糖蛋白结合，形成弹性基质（matrix）或弹性组织筏（raft），构成细胞膜表面。通过酸性加热萃取弹性蛋白，并转化为可溶性衍生物，α弹性蛋白、k-弹性蛋白等，进而使用四苯基卟吩四磺酸（5,10,15,20-tetraphenylporphin-21H,23H-tetra-sulfonate；TPPS）染料与弹性蛋白发生温克尔曼反应（Winkelmanreaction）结合，然后在碱性条件下释放出棕红色染料，酸性处理后，呈现绿色，通过分光光度仪（445nm波长）测定，分析弹性蛋白的含量。产品内容萃取液（ReagentA）毫升沉淀液（ReagentB）毫升清理液（ReagentC）毫升染色液（ReagentD）毫升浓缩液（ReagentE）毫升解离液（ReagentF）毫升强化液（ReagentG）毫升标准液（ReagentH）毫升稀释液（ReagentI）毫升产品说明书1份保存方式保存标准液（ReagentH）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；染色液（ReagentD）避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于标准液配制和样品制备的容器15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器细胞刮脱棒：用于细胞脱离平式摇荡仪：用于样品操作干式恒温仪：用于样品孵育微型台式离心机：用于样品操作200微升1厘米光径比色皿或96孔板：用于比色分析的容器分光光度仪或酶标仪：用于比色分析实验步骤一、样品预处理1）细胞上清处理移取300微升细胞培养上清到1.5毫升离心管加入xx微升萃取液（ReagentA）涡旋振荡15秒放进100℃干式恒温仪孵育60分钟置于室温下15分钟冷却放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心移取400微升上清液到新的1.5毫升离心管加入xx微升4℃预冷的沉淀液（ReagentB）在冰槽里孵育30分钟，期间每隔10分钟涡旋振荡15秒放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液，确保无液体残留；沉淀颗粒透明且肉眼难以看见置于冰槽里备用2）细胞处理准备好25cm2细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5X106细胞）小心抽去培养液小心加入xx毫升清理液（ReagentC），覆盖生长表面小心抽去清理液使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：可以使用胰酶消化）加入xx毫升清理液（ReagentC），混匀细胞移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）放进台式离心机离心5分钟，速度为300g小心抽去上清液，但保留300微升，混匀细胞颗粒群转移到1.5毫升离心管加入xx微升萃取液（ReagentA）涡旋振荡15秒放进100℃干式恒温仪孵育60分钟置于室温下15分钟冷却放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心移取400微升上清液到新的1.5毫升离心管（注意：上清液可能会呈现黄色）加入xx微升4℃预冷的沉淀液（ReagentB）在冰槽里孵育30分钟，期间每隔10分钟涡旋振荡15秒放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液（注意：确保无液体残留；沉淀颗粒透明且肉眼难以看见）置于冰槽里备用二、标准样品配制准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至4号管分别加入xx微升稀释液（ReagentI）到1至4号管移取xx微升标准液（ReagentH）到1号管，混匀小心移取xx微升1号管稀释的标准液（ReagentH）到2号管，混匀小心移取xx微升2号管稀释的标准液（ReagentH）到3号管，混匀小心抽去xx微升3号管稀释的标准液（ReagentH）将1至4号管放进冰槽里备用；标准管浓度见下表管号稀释液（ReagentI）标准液（ReagentH）标准弹性蛋白含量1xx微升xx微升xx微克2xx微升xx微升1号管xx微克3xx微升xx微升2号管xx微克4xx微升背景读数0分别加入xx微升4℃预冷的沉淀液（ReagentB）到上述标准管里在冰槽里孵育30分钟，期间每隔10分钟涡旋振荡15秒放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液（注意：确保无液体残留；沉淀颗粒透明且肉眼难以看见）置于冰槽里备用标准曲线测定分别加入xx微升染色液（ReagentD）到上述配制的标准液（ReagentH）里（注意：用枪头抽打使沉淀颗粒溶解）分别加入xx微升浓缩液（ReagentE）涡旋振荡混匀室温下，孵育60分钟，期间每隔15分钟涡旋振荡15秒放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液（注意：确保没有液体残留）加入xx微升解离液（ReagentF）用枪头抽打使沉淀颗粒溶解，并辅以涡旋震荡（注意：确保充分溶解）加入xx微升强化液（ReagentG），混匀（注意：呈现绿色）转移到新的200微升1厘米光径的比色皿或96孔板即刻放进分光光度仪或酶标仪检测（波长445nm）：获得标准样品吸光读数重复实验步骤1至11四次构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光读数；横座标（X轴）为标准弹性蛋白含量（微克）（注意：标准样品吸光读数背景读数）样品测定加入xx微升染色液（ReagentD）到上述配制的待测样品管里（注意：用枪头抽打使沉淀颗粒溶解）分别加入xx微升浓缩液（ReagentE）涡旋振荡混匀室温下，孵育60分钟，期间每隔15分钟涡旋振荡15秒放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液（注意：确保没有液体残留）加入xx微升解离液（ReagentF）用枪头抽打使沉淀颗粒溶解，并辅以涡旋震荡（注意：确保充分溶解）加入xx微升强化液（ReagentG），混匀（注意：呈现绿色）转移到新的200微升1厘米光径的比色皿或96孔板即刻放进分光光度仪或酶标仪检测（波长445nm）：获得样品吸光读数根据上述标准曲线获得样品对应弹性蛋白含量（微克）（注意：待测样品吸光读数背景读数）浓度计算注意事项本产品为25次操作，包括标准样品本产品检测范围为5至100微克弹性蛋白操作时，须戴手套系统操作时，标准样品测定只需1次弹性蛋白沉淀颗粒微小透明，肉眼难以看见操作需要非常细致，包括避免液体残留、颗粒溶解等，否则会产生误差试剂具有腐蚀性，严格注意操作安全孵育时，避免光照如果样品弹性蛋白含量过低，可以浓缩样品或增加样品量样品浓度可以表述为：微克弹性蛋白/细胞量；微克弹性蛋白/细胞总蛋白等通常1X105细胞含有40微克弹性蛋白本公司提供系列弹性蛋白检测试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定检测敏感[详细]

  2018-11-19 10:00

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  2015-01-05 00:00

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• 纯化线粒体琥珀酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  纯化线粒体琥珀酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途纯化线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成电子受体染料，通过反应系统测定染料还原后峰值的降低，即采用比色法测算样品中单位酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体裂解悬液样品琥珀酸脱氢酶的特异性活性检测。用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景琥珀酸脱氢酶（succinatedehydrogenase；SDH；EC1.3.99.1）是三羧酸循环（tricarboxylicacidcycle；TCA）或Krebs循环中与细胞线粒体膜相关的重要元素，位于线粒体内膜，参与细胞呼吸链。琥珀酸脱氢酶由27kd和70kd两个单体组成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反应，产生延胡索酸（furmarate），通过黄素腺嘌呤二核苷酸（FlavinAdenineDinucleotide；FAD）传递电子。基于琥珀酸脱氢酶的反应原理，使用人工电子受体染料二氯靛酚钠（2,6-Dichloroindophenolsodium；DCIP），接受来自还原型黄素腺嘌呤二核苷酸（ReducedflavinAdenineDinucleotide；FADH2）的电子，而被还原，在分光光度仪下，其吸光值（600nm波长）的变化，来测算琥珀酸脱氢酶的活性。其反应方式为：产品内容清理液（ReagentA）XX毫升裂解液（ReagentB）XX毫升缓冲液（ReagentC）XX毫升反应液（ReagentD）XX毫升底物液（ReagentE）XX毫升阴性液（ReagentF）XX微升产品说明书1份保存方式保存清理液（ReagentA）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；反应液（ReagentD）含有毒性物质，避免直接用手接触；底物液（ReagentE），避免光照；有效保证3月用户自备15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器4℃（微型）台式离心机：用于样品处理DOUNCE匀浆器：用于裂解组织恒温培养箱或恒温水槽：用于反应物孵育比色皿：用于比色测定的容器分光光度仪：用于比色分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；底物液（ReagentE）注意避光。然后进行下列操作。一、样品准备手术取出动物组织，并秤重以确定200毫克组织重量（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管（选择步骤）加入XX毫升清理液（ReagentA）清洗（选择步骤）抽去清洗液移入到一个液氮冻存管即刻放进液氮罐过夜次日从液氮罐里取出，即刻（Z快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）放进一个15毫升锥形离心管加入置于冰槽里的XX毫升裂解液（ReagentB）涡旋震荡5秒，充分混匀即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下）（注意：参见注意事项8）将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为1500g小心移出上清液到另一个新的预冷的1.5毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液加入XX微升裂解液（ReagentB），混匀颗粒群移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用二、测定准备准备好待测样品，置于冰槽里设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长600nm，间隔60秒，读数6次（共5分钟），并置零缓冲液（ReagentC）在室温下均衡温度背景对照测定移取XX微升缓冲液（ReagentC）到新的比色皿加入XX微升反应液（ReagentD）加入XX微升底物液（ReagentE）放进25℃培养箱里静置3分钟[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 细胞糖原硫酸蒽酮比色法定量检测试剂盒产品说明书

  细胞糖原硫酸蒽酮比色法定量检测试剂盒产品说明书[详细]

  2015-04-14 00:00

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• 细胞基质金属蛋白酶2活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

  主要用途细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过含硫多肽底物以及特定YZ剂存在与否的情况下，受到MMP2的水解，释放出巯基，进而使用Ellman试剂，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定细胞裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或完全纯化酶样品中基质金属蛋白酶2的特异活性定量检测，以及YZ剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，安全可靠。技术背景基质金属蛋白酶（Matrixmetalloproteinases；MMPs）是一类结构高度同源的分泌型或膜相关性锌内肽酶的总称，因含有金属（锌、钙）离子而得名。其功能在于分解细胞外基质成分。迄今为止发现的MMPs至少有28种，几乎能降解除多糖以外的全部细胞外基质（extracellularmatrix）成分，同时参与胚胎发育、形态形成、胚泡植入（blastocyst）、血管形成、组织再吸收（tissueresorption）、疾病发生，例如关节炎、癌细胞浸入转移等。根据降解的底物不同可将MMPs分为4大类：（1）胶原酶：MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和蛋白多糖；（2）明胶酶（Ⅳ型胶原酶）：MMP2、MMP9，又称明胶酶A、B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和弹性纤维；（3）基质溶解素：MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12，主要作用于纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、弹力纤维、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ胶原及MMP1、MMP8、MMP9；（4）膜型金属蛋白酶：MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP，主要作用于明胶、Ⅳ型胶原、MMP2。体内绝大多数细胞并不储备MMPs，当需要MMPs的信号传递到细胞后才临时合成，合成的MMPs以无活性的酶原（proenzyme）形式分泌到细胞外，随后被多种蛋白酶和非蛋白酶水解以及热处理激活，一种激活的MMPs可激活另一种MMPs，形成瀑布效应。基质金属蛋白酶-2，又称明胶酶A（gelatinase-A）或IV型胶原酶（typeIVcollagenase），其前体分子量为72kDa，激活后分子量为62和56kDa。它在血清或细胞上清中浓度通常为10至200纳克/毫升。它的作用目标是天然和变性胶原蛋白（collagens）、纤维连接蛋白（fibronectin）、弹性纤维蛋白（elastin）、层粘连蛋白-5（laminin-5）、前体肿瘤坏死因子-α（pro-TNF-α）和神经（蛋白）聚糖（neurocan）。基质金属蛋白酶-2与肿瘤发展与转移、血管形成、动脉粥样硬化等疾病有关。基于含硫多肽（thiopeptide）底物Ac-PLG（2-mercapto-4-methyl-pentanoyl）-LG-OC2H5，在特异性YZ剂OA-Hy存在与否的条件下，受到MMP2的水解，释放出巯基（sulfhydrylgroup），进而与Ellman试剂5,5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5,5’-dithiobis-（2-nitrobenzoicacid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoicacid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量测定细胞基质金属蛋白酶2的特异活性。基质金属蛋白酶2反应系统为：[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 细胞PTEN活性定磷比色法定量检测试剂盒产品说明书

  细胞PTEN活性定磷比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途细胞PTEN活性定磷比色法定量检测试剂是一种旨在使用特异性合成底物磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），在PTEN去磷酸化后，释放出游离磷酸根，与孔雀绿染料发生显色反应后，采用比色法测定其峰值的变化，以此进行测算单位酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适合于各种细胞裂解悬液样品的PTEN活性及其YZ剂的检测。广泛应用于细胞凋亡、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景细胞张力蛋白同源在10号染色体缺失性磷酸酶（phosphataseandtensinhomologdeletedonchromosometen；PTEN；EC3.1.3.67），又称为多发性晚期肿瘤突变基因1（mutatedinmultipleadvancedcancers1；MMAC1），是一个肿瘤YZ基因，位于染色体10q23.3，转录产物515kb，蛋白产物175氨基酸。PTEN蛋白含有一酪蛋白磷酸酶的功能区和约175个氨基酸左右的与骨架蛋白张力蛋白（tenasin）、辅助蛋白（auxilin）同源的区域，是一种双重特异性磷酸酶，能使酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸、磷酯酰肌醇（phosphoinositide）等去磷酸化。PTEN具有调节细胞周期、防止细胞过度生长和分开裂解、参与细胞凋亡、粘附、迁移、浸润，控制细胞内磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate；PIP3）水平，调控Akt/PKB信号通路等功能。PTEN基因突变和缺失将导致肿瘤发生、发展和转移，以及多发性错构瘤综合征（Cowdensyndrome）等。基于底物磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸，在PTEN的催化下，水解产生磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2），同时释放出游离磷酸根，进而与孔雀绿染料发生显色反应产生其峰值的变化（660nm波长），以此测算PTEN的活性。产品内容清理液（ReagentA）120毫升裂解液（ReagentB）10毫升缓冲液（ReagentC）1毫升阴性液（ReagentD）1毫升反应液（ReagentE）200微升终止液（ReagentF）1毫升显色液（ReagentG）4毫升标准液（ReagentH）500微升产品说明书1份保存方式保存裂解液（ReagentB）、缓冲液（ReagentC）、反应液（ReagentE）和显色液（ReagentG）在－20℃冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在4℃冰箱里；终止液（ReagentF）和显色液（ReagentG）具有腐蚀性，避免直接用手接触；显色液（ReagentG）避免光照，有效保证6月用户自备15毫升离心管：用于样品处理的容器1.5毫升离心管：用于样品处理和保存的容器细胞刮脱棒：用于贴壁细胞脱离（微型）台式离心机：用于样品收集培养箱：用于孵育反应物比色皿：用于比色的容器分光光度仪：用于比色分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液放进冰槽里融化。然后进行下列操作。样品准备准备好25cm2细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞（5X106细胞）小心加入3毫升预冷的清理液（ReagentA），覆盖生长表面小心抽去清理液使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞加入3毫升清理液（ReagentA），混匀细胞移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g小心抽去上清液加入500微升裂解液（ReagentB），充分混匀转移到预冷的1.5毫升离心管QL涡旋震荡15秒置于冰槽里孵育30分钟放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管移取2微升进行蛋白定量测定（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－HL30030.1）即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作二、测定准备准备好待测样品（例如细胞裂解萃取液等），置于冰槽里（注意：样品须澄清）设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长为660nm，并置零准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管按下表分别加入阴性液（ReagentD）和标准液（ReagentH）到每个离心管，混匀将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表管号阴性液（ReagentD）标准液（ReagentH）测定体系标准磷浓度10100微升20微摩尔/升225微升75微升15微摩尔/升350微升50微升10微摩尔/升475微升25微升5微摩尔/升5100微升00标准曲线测定移取20微升阴性液（ReagentD）到新的比色皿加入5微升上述配制的标准液在37℃温度下孵育10分钟加入8微升终止液（ReagentF），混匀加入100微升显色液（ReagentG），混匀室温下静置15分钟，避免光照即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数重复实验步骤1至7四次构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（A）；横座标（X轴）为标准磷浓度（微摩尔/升）样品背景测定移取20微升缓冲液（ReagentC）到新的比色皿加入5微升待测样品（总量100微克细胞裂解萃取液蛋白）在37℃温度下孵育10分钟加入8微升终止液（ReagentF），混匀加入100微升显色液（ReagentG），混匀室温下静置15分钟，避免光照即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数根据标准曲线获得样品背景对应磷浓度样品活性测定移取10微升缓冲液（ReagentC）到新的比色皿加入5微升待测样品（总量100微克细胞裂解萃取液蛋白）在37℃温度下孵育2分钟加入10微升反应液（ReagentE）在37℃温度下孵育10分钟加入8微升终止液（ReagentF），混匀加入100微升显色液（ReagentG），混匀室温下静置15分钟，避免光照即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数根据标准曲线获得样品活性对应磷浓度计算样品活性{[根据标准曲线获得样品活性对应磷浓度（微摩尔/升）根据标准曲线获得样品背景对应磷浓度（微摩尔/升）]X5（体系倍数）X样品稀释倍数}÷10（反应时间；分钟）＝纳摩尔磷/毫升/分钟÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝纳摩尔磷/毫克/分钟注意事项本产品为25次操作，包括5次标准测定操作时，避免污染母液操作时，须戴手套终止液（ReagentF）和显色液（ReagentG）具有腐蚀性，避免直接用手接触样品切忌使用磷酸缓冲液和脱氧胆酸纳处理比色测定后，比色皿须清洗彻底如果用户没有660nm波长，可以使用600至660nm的任一波长替代显示绿色表明具有较强酶活性空白对照读数应小于0.2建议待测样本蛋白浓度为100微克/5微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量；（本公司提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－HL30030.1）钙调神经磷酸酶活性单位浓度定义：在37℃温度下，pH8.0的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）释放1微摩尔的磷本公司提供系列磷酸化酶检测试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定检测准确[详细]

  2018-11-19 10:00

  产品样册

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• 乳酸脱氢酶（LDH）总活性终点比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  乳酸脱氢酶（LDH）总活性终点比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-05-22 00:00

  安装说明

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• 线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-05-19 00:00

  课件

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• 组织硫代酸反应物（TBARS）比色法定量检测试剂盒 产品说明书（中文版）

  组织硫代酸反应物（TBARS）比色法定量检测试剂盒 产品说明书（中文版）[详细]

  2015-01-04 00:00

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• 线粒体呼吸链复合物II活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  线粒体呼吸链复合物II活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物II（琥珀酸－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物二氯酚靛酚，通过反应系统测定样品中二氯酚靛酚还原后吸光峰值的变化，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的琥珀酸－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。可用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景线粒体呼吸链复合物II，通常称为琥珀酸－辅酶Q还原酶或琥珀酸脱氢酶（Succinate-CoenzymeQReductase；SuccinateDehydrogenase），是线粒体电子传递链与三羧酸循环链接的载体：含有四个亚单位，包括共价结合的辅基黄素腺嘌呤二核苷酸（flavinadeninedinucleotide；FAD）和三个铁硫ZX（Fe-Sclusters），以及细胞色素b亚单位，其Z特征性的酶活性是丙二酸钠敏感的琥珀酸－辅酶Q还原酶。复合物II催化琥珀酸（succinate）被氧化为富马酸（fumarate），线粒体内电子由供体FAD传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，进行呼吸链传递。该酶异常会导致嗜铬细胞瘤（paraganglioma）、肾上腺嗜铬细胞瘤（pheochromocytoma）和Leigh综合征。基于琥珀酸底物，通过琥珀酸－辅酶Q还原酶的催化，氧化为富马酸，同时氧化型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIP）转化为还原型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIPH2），在分光光度仪下产生吸光峰值的变化（600nm波长），由此定量测定琥珀酸－辅酶Q还原酶的特异活性。其反应系统是：ComplexIISUCCINATE+DCPIP+CoQ→FUMARATE+DCPIPH2+CoQH2蓝色无色↑Abs600nm↓Abs600nm产品内容缓冲液（ReagentA）20毫升反应液（ReagentB）2.5毫升阴性液（ReagentC）2毫升底物液（ReagentD）500微升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；反应液（ReagentB）和底物液（ReagentD），避免光照，有效保证6月用户自备比色皿：用于比色的容器分光光度仪：用于比色分析培养箱：用于孵育反应物实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；缓冲液（ReagentA）室温预热；反应液（ReagentB）和底物液（ReagentD）注意避光。然后进行下列操作。测定准备准备好待测样品（例如纯化线粒体样品等），置于冰槽里设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长为600nm，间隔60秒，读数6次（共5分钟），并置零背景对照测定移取780微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿加入100微升反应液（ReagentB）加入20微升底物液（ReagentD）上下倾倒数次，混匀放进30℃培养箱里静置3分钟加入100微升阴性液（ReagentC）上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）即刻放入分光光度仪检测，此为背景空对照：600波长读数0分钟－600波长读数1分钟或5分钟样品活性测定移取780微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿加入100微升反应液（ReagentB）加入20微升底物液（ReagentD）上下倾倒数次，混匀放进30℃培养箱里静置3分钟加入100微升待测样品（注意：10微克总线粒体蛋白）上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）即刻放入分光光度仪检测，此为样品活性读数：600波长读数0分钟－600波长读数1分钟或5分钟计算样品活性【（样品读数－背景读数）X1（体系容量；毫升）X样品稀释倍数】÷【0.1（样品容量；毫升）X21.8（毫摩尔吸光系数X1或5（反应时间；分钟）】＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克单位＝微摩尔二氯酚靛酚/分钟[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 细胞谷氨酰胺酶活性光度法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  细胞谷氨酰胺酶活性光度法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-01-15 00:00

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