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组织半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)
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本文由 上海哈灵生物科技有限公司 整理汇编
2015-05-19 00:00 215阅读次数
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组织半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)
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组织半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)
- 组织半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)[详细]
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2015-05-19 00:00
期刊论文
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组织半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量
- 主要用途组织半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量检测试剂是一种旨在通过先酸性预处理,有机溶剂萃取后,在碱性条件下,与萘醌磺酸钠进行反应后,由次亚硫酸钠作用产生的红色显色产物,在分光光度仪下,即采用比色法来测定样品中半胱氨酸含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良沙利文反应(SullivanReaction)、成功实验证明的。其适用于各种组织(动物、人体等)裂解萃取液样品中半胱氨酸水平检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。技术背景L-半胱氨酸(L-cysteine;Cys;C)学名为2-氨基-3-巯基丙酸,是一种疏水性非必需α-氨基酸,分子式是HO2CCH(NH2)CH2SH或C3H7NO2S,分子量121.16,编码为UGU和UGC。其侧链是巯基(thiol),为非极性,作为亲核剂(nucleophile),参与酶类反应。氧化后,产生二硫化物和衍生物(disulfidederivative)胱氨酸(cystine),二硫化物成为蛋白质的结构形式。动物通过胱硫醚β合酶(cystathioninebetasynthase)和胱硫醚γ裂合酶(cystathionegammalyase)由丝氨酸(serine)和蛋氨酸(methionine)转化成同源半胱氨酸(homocysteine)、S-腺苷蛋氨酸(S-adenosylmethionine)、胱硫醚(cystathionine),Z后产生半胱氨酸和α-酮基丁酸(α-ketobutyrate)。而植物和细菌通过丝氨酸乙酰基转移酶(transacetylase)和O-乙酰丝氨酸巯基裂合酶(O-acetylserine(thio)lyase),由丝氨酸产生半胱氨酸和乙酸。半胱氨酸,是谷胱苷肽的前体,具有抗氧化作用、抗蛋白水解、使蛋白分子之间交联、参与硫化物代谢、与各种金属原子,例如铁、锌、铜等结合、参与蛋白质的转录后修饰、中和酒精毒性等功能。应用于食品调味和添加、化妆品防护、生物标记、药物等。血浆半胱氨酸水平用于评估心血管疾病风险;半胱氨酸和同源半胱氨酸的比例可以评价静脉血栓形成、心肌梗死、肾衰的风险。在植物中,半胱氨酸参与各种植物生理活动,例如光质流动(photoplasmicstreaming)、电子传导、光合成磷酸化、细胞分裂、维持抗坏血酸还原状态、抗寒性(frosthardiness)、调节作物成熟等。半胱氨酸代谢异常将导致胱氨酸病(cystinosis)、胱氨醇尿(cystinuria)、肝损伤、生长迟缓、毛发去色(hairdepigmentation)、水肿(edema)、嗜睡(lethargy)等。基于半胱氨酸,通过酸性预处理,有机溶剂萃取,进而在碱性条件下,与萘醌磺酸钠(1,2-naphthoquinone-4-sodiumsulfonate)进行反应,由次亚硫酸钠(sodiumhyposulfite)作用,产生显色产物,呈现红色,通过分光光度仪(505nm波长)来定量分析半胱氨酸的含量。[详细]
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组织黑色素含量比色法定量检测试剂盒产品说明书
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2015-09-16 00:00
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- 组织乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途组织乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒是一种旨在使用乙醛脱氢酶2敏感性YZ剂,通过检测反应系统中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)还原后峰值的,即采用比色法来测定组织裂解萃取液样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解悬液样品(动物、人体等)乙醛脱氢酶2的特异活性检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。技术背景乙醛脱氢酶(aldehydedehydrogenase;ALDH;EC1.2.1.3),又称为乙醛NAD氧化还原酶(aldehydeNAD-oxidoreductase)是一类NAD(P)依赖性酶,催化广谱的外源性或内源性脂肪族和芳香族乙醛类底物氧化,包括乙醇、氨基酸、生物胺(biogenicamine)、维生素、固醇类、脂质、药物和环境分子等代谢产物。乙醛脱氢酶是乙醇在体内分解代谢过程中两种主要酶之一。乙醛脱氢酶把乙醛中的两个氢原子脱掉,使乙醛转化为乙酸,生成的乙酸进入脂肪酸氧化途径,Z终被氧化成二氧化碳和水。乙醛脱氢酶主要有两种同工酶:ALDH1和ALDH2。ALDH1存在于胞液中,ALDH2存在于线粒体中,ALDH2比ALDH1的活性高。乙醛脱氢酶的缺少,使酒精不能被完全分解为水和二氧化碳,而是以乙醛继续留在体内,使人喝酒后产生恶心欲吐、昏迷不适等醉酒症状。基于来自于乙醇代谢产生的乙醛(acetaldehyde),在7-羟基-3-(4-羟苯基)-异黄酮-7-糖苷(Daidzein-7-O-β-D-glucopyranoside;Daidzin)存在与否的情况下,由乙醛脱氢酶2的催化作用,转化为乙酸(aceticacid)产物后,通过测定反应体系中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizedreducednicotinamideadeninedinucleotide;NAD)转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)的变化(340nm波长),来定量分析乙醛脱氢酶2的特异活性。乙醛脱氢酶2反应系统为:产品内容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升缓冲液(ReagentC)毫升反应液(ReagentD)毫升底物液(ReagentE)毫升阴性液(ReagentF)毫升专性液(ReagentG)微升产品说明书1份保存方式保存缓冲液(ReagentC)、反应液(ReagentD)、底物液(ReagentE)和专性液(ReagentG)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;反应液(ReagentD)和底物液(ReagentE)避免光照;有效保证6月[详细]
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2018-11-08 10:00
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组织基质金属蛋白酶2活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
- 主要用途组织基质金属蛋白酶2(MMP-2)活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过含硫多肽底物以及特定YZ剂存在与否的情况下,受到MMP2的水解,释放出巯基,进而使用Ellman试剂,产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化,即采用比色法来测定组织裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解萃取液样品(动物、人体)、部分或完全纯化酶样品中基质金属蛋白酶2的特异活性定量检测,以及YZ剂和激活剂的筛选。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,安全可靠。技术背景基质金属蛋白酶(Matrixmetalloproteinases;MMPs)是一类结构高度同源的分泌型或膜相关性锌内肽酶的总称,因含有金属(锌、钙)离子而得名。其功能在于分解细胞外基质成分。迄今为止发现的MMPs至少有28种,几乎能降解除多糖以外的全部细胞外基质(extracellularmatrix)成分,同时参与胚胎发育、形态形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、组织再吸收(tissueresorption)、疾病发生,例如关节炎、癌细胞浸入转移等。根据降解的底物不同可将MMPs分为4大类:(1)胶原酶:MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和蛋白多糖;(2)明胶酶(Ⅳ型胶原酶):MMP2、MMP9,又称明胶酶A、B,主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和弹性纤维;(3)基质溶解素:MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12,主要作用于纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、弹力纤维、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ胶原及MMP1、MMP8、MMP9;(4)膜型金属蛋白酶:MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP,主要作用于明胶、Ⅳ型胶原、MMP2。体内绝大多数细胞并不储备MMPs,当需要MMPs的信号传递到细胞后才临时合成,合成的MMPs以无活性的酶原(proenzyme)形式分泌到细胞外,随后被多种蛋白酶和非蛋白酶水解以及热处理激活,一种激活的MMPs可激活另一种MMPs,形成瀑布效应。基质金属蛋白酶-2,又称明胶酶A(gelatinase-A)或IV型胶原酶(typeIVcollagenase),其前体分子量为72kDa,激活后分子量为62和56kDa。它在血清或细胞上清中浓度通常为10至200纳克/毫升。它的作用目标是天然和变性胶原蛋白(collagens)、纤维连接蛋白(fibronectin)、弹性纤维蛋白(elastin)、层粘连蛋白-5(laminin-5)、前体肿瘤坏死因子-α(pro-TNF-α)和神经(蛋白)聚糖(neurocan)。基质金属蛋白酶-2与肿瘤发展与转移、血管形成、动脉粥样硬化等疾病有关。基于含硫多肽(thiopeptide)底物Ac-PLG(2-mercapto-4-methyl-pentanoyl)-LG-OC2H5,在特异性YZ剂OA-Hy存在与否的条件下,受到MMP2的水解,释放出巯基(sulfhydrylgroup),进而与Ellman试剂5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)[5,5’-dithiobis-(2-nitrobenzoicacid);DTNB]反应后,产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸(5-thio-2-nitrobenzoicacid;TNB),通过其吸收峰值的变化(412nm波长),来定量测定组织基质金属蛋白酶2的特异活性。基质金属蛋白酶2反应系统为:[详细]
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2018-11-08 10:00
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植物游离氨基酸含量比色法定量检测试剂盒产品说明书
- 植物游离氨基酸含量比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途植物游离氨基酸含量比色法定量检测试剂是一种旨在通过显色染料茚三酮与游离氨基酸的氨基发生反应,在热处理下,产生蓝色复合物,由分光光度仪比色分析,定量检测样品中游离氨基酸含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心设计、成功实验证明的。适用于各种植物组织,包括种子(seed)、叶片(leaf)、根(root)等裂解悬液样品的游离氨基酸含量检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,检测准确。技术背景氨基酸(aminoacid或α-aminoacid)是一种含有胺和羧基功能基团的分子,为生物体中Z必须的元素。根据其侧链的不同,分成四类(弱酸、弱碱、极性、非极性)和20种各种不同的氨基酸;根据其光学异构体(opticalisomers),又分成L型和D型。L-氨基酸是构成蛋白质的主要结构分子。氨基酸是多肽、蛋白质和辅酶等的组成单位,具有各种代谢作用和营养价值。基于游离氨基酸的游离氨基与茚三酮(ninhydrin)反应,产生中间产物酮酸(ketoacid)和氨分子,进而在热处理下,进行脱羧基过程(仅发生于游离氨基酸),同时产生蓝色复合物,在分光光度仪(570nm波长)下,呈现吸光峰值的变化,来定量分析游离氨基酸的总含量。其反应系统如下:产品内容清理液(ReagentA)毫升萃取液(ReagentB)毫升缓冲液(ReagentC)毫升反应液(ReagentD)毫升标准液(ReagentE)微升产品说明书1份保存方式保存萃取液(ReagentB)和标准液(ReagentE)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;反应液(ReagentD)具有挥发性,严格密闭瓶盖,避免光照;有效保证6月用户自备1.5毫升离心管:用于标准液配制和样品操作的容器15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器干式恒温仪:用于反应孵育DOUNCE匀浆器:用于裂解组织微型台式离心机:用于样品操作比色皿:用于比色分析的容器分光光度仪:用于比色分析实验步骤一、样品准备准备好新鲜的植物组织(叶片、谷粒、种子等),并秤重以确定1克组织重量(选择步骤)放进预冷的15毫升锥形离心管(选择步骤)加入xx毫升清理液(ReagentA)清洗1次即刻用刀片切碎组织放进一个预冷的15毫升锥形离心管加入预冷的xx毫升萃取液(ReagentB)涡旋震荡5秒,充分混匀即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器,在冰槽里用匀浆棒匀化组织(约80下)将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管,放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为5000g(或7500RPM,例如eppendorf5415)小心移出上清液(注意:不要触碰沉淀物)到另一个新的预冷的1.5毫升离心管(选择步骤)如果上清液含有肉眼可见的残渣,重复离心5分钟一次,速度为5000g(或7500RPM,例如eppendorf5415)移取10微升进行蛋白定量检测(注意:建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-30030.1)放进-70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用二、标准样品配制准备好5个1.5毫升离心管,标记为1至5号管分别加入xx微升缓冲液(ReagentC)到1至5号管移取xx微升标准液(ReagentE)到1号管,混匀小心移取xx微升1号管稀释的标准液(ReagentE)到2号管,混匀小心移取xx微升2号管稀释的标准液(ReagentE)到3号管,混匀小心移取xx微升3号管稀释的标准液(ReagentE)到4号管,混匀将1至5号管放进冰槽里备用;标准管浓度见下表管号缓冲液(ReagentC)标准液(ReagentE)标准氨基酸浓度1xx微升xx微升xx微摩尔/升2xx微升xx微升1号管xx微摩尔/升3xx微升xx微升2号管xx微摩尔/升4xx微升xx微升3号管xx微摩尔/升5xx微升00微摩尔/升标准曲线测定加入xx微升缓冲液(ReagentC)到1.5毫升离心管加入xx微升上述配制的标准液(ReagentE)加入xx微升反应液(ReagentD)涡旋震荡15秒放进90℃干式恒温仪孵育5分钟,避免光照放进冰槽里1分钟转移到比色皿即刻放进分光光度仪检测(波长570nm):获得吸光读数重复实验步骤1至8四次构建标准曲线:纵座标(Y轴)为吸光读数;横座标(X轴)为标准氨基酸浓度(微摩尔/升)样品测定加入xx微升缓冲液(ReagentC)到1.5毫升离心管加入500微升待测样品加入xx微升反应液(ReagentD)涡旋震荡15秒放进90℃干式恒温仪孵育5分钟,避免光照放进冰槽里1分钟转移到比色皿即刻放进分光光度仪检测(波长570nm):获得吸光读数根据标准曲线获得样品对应氨基酸浓度(微摩尔/升)浓度计算根据标准曲线获得样品对应氨基酸浓度(微摩尔/升)X稀释倍数=(微摩尔/升)注意事项本产品为25次操作,包括标准样品避免使用Tris缓冲液、尿素等胺类物质处理样品操作时,须戴手套系统操作时,标准样品测定只需1次反应液(ReagentD)具有挥发性,严格密闭瓶盖,避免光照孵育时,避免光照本公司提供系列氨基酸检测试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定检测敏感[详细]
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2024-09-30 10:02
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- 纯化线粒体琥珀酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途纯化线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成电子受体染料,通过反应系统测定染料还原后峰值的降低,即采用比色法测算样品中单位酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体裂解悬液样品琥珀酸脱氢酶的特异性活性检测。用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶,严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,反应优化,检测敏感。技术背景琥珀酸脱氢酶(succinatedehydrogenase;SDH;EC1.3.99.1)是三羧酸循环(tricarboxylicacidcycle;TCA)或Krebs循环中与细胞线粒体膜相关的重要元素,位于线粒体内膜,参与细胞呼吸链。琥珀酸脱氢酶由27kd和70kd两个单体组成。其功能在于催化琥珀酸(succinate)的氧化反应,产生延胡索酸(furmarate),通过黄素腺嘌呤二核苷酸(FlavinAdenineDinucleotide;FAD)传递电子。基于琥珀酸脱氢酶的反应原理,使用人工电子受体染料二氯靛酚钠(2,6-Dichloroindophenolsodium;DCIP),接受来自还原型黄素腺嘌呤二核苷酸(ReducedflavinAdenineDinucleotide;FADH2)的电子,而被还原,在分光光度仪下,其吸光值(600nm波长)的变化,来测算琥珀酸脱氢酶的活性。其反应方式为:产品内容清理液(ReagentA)XX毫升裂解液(ReagentB)XX毫升缓冲液(ReagentC)XX毫升反应液(ReagentD)XX毫升底物液(ReagentE)XX毫升阴性液(ReagentF)XX微升产品说明书1份保存方式保存清理液(ReagentA)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融;反应液(ReagentD)含有毒性物质,避免直接用手接触;底物液(ReagentE),避免光照;有效保证3月用户自备15毫升锥形离心管:用于样品制备的容器1.5毫升离心管:用于样品制备和保存的容器4℃(微型)台式离心机:用于样品处理DOUNCE匀浆器:用于裂解组织恒温培养箱或恒温水槽:用于反应物孵育比色皿:用于比色测定的容器分光光度仪:用于比色分析实验步骤实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化;底物液(ReagentE)注意避光。然后进行下列操作。一、样品准备手术取出动物组织,并秤重以确定200毫克组织重量(选择步骤)放进预冷的15毫升锥形离心管(选择步骤)加入XX毫升清理液(ReagentA)清洗(选择步骤)抽去清洗液移入到一个液氮冻存管即刻放进液氮罐过夜次日从液氮罐里取出,即刻(Z快速度)用研磨棒碾碎组织成粉末状(注意:切莫使组织冻融)放进一个15毫升锥形离心管加入置于冰槽里的XX毫升裂解液(ReagentB)涡旋震荡5秒,充分混匀即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器在冰槽里用匀浆棒匀化组织(约20至40下)(注意:参见注意事项8)将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为1500g小心移出上清液到另一个新的预冷的1.5毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为10000g小心抽去上清液加入XX微升裂解液(ReagentB),混匀颗粒群移取10微升进行蛋白定量检测(注意:建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-GMS30030.1)放进-70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用二、测定准备准备好待测样品,置于冰槽里设定好分光光度仪(温度为25℃):波长600nm,间隔60秒,读数6次(共5分钟),并置零缓冲液(ReagentC)在室温下均衡温度背景对照测定移取XX微升缓冲液(ReagentC)到新的比色皿加入XX微升反应液(ReagentD)加入XX微升底物液(ReagentE)放进25℃培养箱里静置3分钟[详细]
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