植物游离氨基酸含量比色法定量检测试剂盒产品说明书

本文由 上海语燕生物技术有限公司 整理汇编

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• 植物游离氨基酸含量比色法定量检测试剂盒产品说明书

  植物游离氨基酸含量比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途植物游离氨基酸含量比色法定量检测试剂是一种旨在通过显色染料茚三酮与游离氨基酸的氨基发生反应，在热处理下，产生蓝色复合物，由分光光度仪比色分析，定量检测样品中游离氨基酸含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心设计、成功实验证明的。适用于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）等裂解悬液样品的游离氨基酸含量检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测准确。技术背景氨基酸（aminoacid或α-aminoacid）是一种含有胺和羧基功能基团的分子，为生物体中Z必须的元素。根据其侧链的不同，分成四类（弱酸、弱碱、极性、非极性）和20种各种不同的氨基酸；根据其光学异构体（opticalisomers），又分成L型和D型。L-氨基酸是构成蛋白质的主要结构分子。氨基酸是多肽、蛋白质和辅酶等的组成单位，具有各种代谢作用和营养价值。基于游离氨基酸的游离氨基与茚三酮（ninhydrin）反应，产生中间产物酮酸（ketoacid）和氨分子，进而在热处理下，进行脱羧基过程（仅发生于游离氨基酸），同时产生蓝色复合物，在分光光度仪（570nm波长）下，呈现吸光峰值的变化，来定量分析游离氨基酸的总含量。其反应系统如下：产品内容清理液（ReagentA）毫升萃取液（ReagentB）毫升缓冲液（ReagentC）毫升反应液（ReagentD）毫升标准液（ReagentE）微升产品说明书1份保存方式保存萃取液（ReagentB）和标准液（ReagentE）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；反应液（ReagentD）具有挥发性，严格密闭瓶盖，避免光照；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于标准液配制和样品操作的容器15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器干式恒温仪：用于反应孵育DOUNCE匀浆器：用于裂解组织微型台式离心机：用于样品操作比色皿：用于比色分析的容器分光光度仪：用于比色分析实验步骤一、样品准备准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定1克组织重量（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管（选择步骤）加入xx毫升清理液（ReagentA）清洗1次即刻用刀片切碎组织放进一个预冷的15毫升锥形离心管加入预冷的xx毫升萃取液（ReagentB）涡旋震荡5秒，充分混匀即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约80下）将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管，放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf5415）小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的1.5毫升离心管（选择步骤）如果上清液含有肉眼可见的残渣，重复离心5分钟一次，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf5415）移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用二、标准样品配制准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管分别加入xx微升缓冲液（ReagentC）到1至5号管移取xx微升标准液（ReagentE）到1号管，混匀小心移取xx微升1号管稀释的标准液（ReagentE）到2号管，混匀小心移取xx微升2号管稀释的标准液（ReagentE）到3号管，混匀小心移取xx微升3号管稀释的标准液（ReagentE）到4号管，混匀将1至5号管放进冰槽里备用；标准管浓度见下表管号缓冲液（ReagentC）标准液（ReagentE）标准氨基酸浓度1xx微升xx微升xx微摩尔/升2xx微升xx微升1号管xx微摩尔/升3xx微升xx微升2号管xx微摩尔/升4xx微升xx微升3号管xx微摩尔/升5xx微升00微摩尔/升标准曲线测定加入xx微升缓冲液（ReagentC）到1.5毫升离心管加入xx微升上述配制的标准液（ReagentE）加入xx微升反应液（ReagentD）涡旋震荡15秒放进90℃干式恒温仪孵育5分钟，避免光照放进冰槽里1分钟转移到比色皿即刻放进分光光度仪检测（波长570nm）：获得吸光读数重复实验步骤1至8四次构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光读数；横座标（X轴）为标准氨基酸浓度（微摩尔/升）样品测定加入xx微升缓冲液（ReagentC）到1.5毫升离心管加入500微升待测样品加入xx微升反应液（ReagentD）涡旋震荡15秒放进90℃干式恒温仪孵育5分钟，避免光照放进冰槽里1分钟转移到比色皿即刻放进分光光度仪检测（波长570nm）：获得吸光读数根据标准曲线获得样品对应氨基酸浓度（微摩尔/升）浓度计算根据标准曲线获得样品对应氨基酸浓度（微摩尔/升）X稀释倍数=（微摩尔/升）注意事项本产品为25次操作，包括标准样品避免使用Tris缓冲液、尿素等胺类物质处理样品操作时，须戴手套系统操作时，标准样品测定只需1次反应液（ReagentD）具有挥发性，严格密闭瓶盖，避免光照孵育时，避免光照本公司提供系列氨基酸检测试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定检测敏感[详细]

  2024-09-30 10:02

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• 组织黑色素含量比色法定量检测试剂盒产品说明书

  组织黑色素含量比色法定量检测试剂盒产品说明书[详细]

  2024-09-11 18:03

  课件

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• 植物α-淀粉酶（α-AMYLASE）活性比色法定量检测试剂盒

  主要用途植物α-淀粉酶（α-AMYLASE）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用具有还原力的黄色3,5-二硝基水杨酸与受到α-淀粉酶中性环境下水解产生的还原基团分子反应，生成强烈吸光的3-氨基-5-硝基水杨酸，即采用比色法测定其还原后峰值的升高变化，以此测定样品中α-淀粉酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适合于各种新鲜植物组织，包括叶片（leaf）、谷粒（grain）、种子（seed）等裂解萃取液样品α-淀粉酶的活性检测。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景淀粉酶（AMYLASE）属于糖苷水解酶类（glycosidehydrolase）。淀粉酶通过水解方式，分解淀粉的α－1，4链接，释放出葡萄糖、麦芽糖（maltose）、麦芽三糖（maltotriose）、糊精（dextrin）等简单糖分子。淀粉酶分成三类：α-淀粉酶、β-淀粉酶和γ-淀粉酶。其中α淀粉酶（EC3.2.1.1），又称为α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶（α-1,4-glucan4-glucanohydrolase）或糖原酶（glycogenase），是钙离子依赖性钙金属蛋白酶（calciummetalloenzyme），分解淀粉为葡萄糖、麦芽糖（maltose）、麦芽三糖（maltotriose）、糊精（dextrin）等，为主要的消化酶，尤其在人体中，例如唾液和胰淀粉酶等。β淀粉酶（EC3.2.1.2），又称为α-1,4-葡聚糖麦芽糖水解酶（1,4-α-D-glucanmaltohydrolase）或糖基淀粉酶（saccharogenamylase），分解淀粉为葡萄糖等。植物、真菌、细菌等均能产生，而人体组织不含有。γ-淀粉酶（EC3.2.1.2），又称为α-1,4-葡聚糖葡萄糖苷酶（Glucan1,4-α-glucosidase）或溶酶体α-葡萄糖苷酶（lysosomalα-glucosidase），在酸性环境下分解淀粉为葡萄糖。淀粉是一种复杂分子，由多聚糖直链淀粉（amylose）和支链淀粉（amylopectin）构成。植物和细菌产生大多数淀粉。在淀粉酶的催化作用下，分解产生简单糖分子，作为能源储存，植物用于光合作用。植物和细菌性淀粉酶常用于工业，包括烘培食物和乳制品的制造，以及酒精和纸材的生产。基于淀粉，在中性环境下，通过α-淀粉酶的水解，释放出麦芽糖等含有游离的还原性基团（例如酮基等），进一步使用具有还原力的黄色3,5-二硝基水杨酸（3,5-Dinitrosalicylicacid；DNS）与之反应，产生红棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸（3-amino-5-nitrosalicylicacid），在分光光度仪（540nm波长）下测定，以定量分析α-淀粉酶的活性。其反应方式为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 组织半胱氨酸（cysteine）含量比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  组织半胱氨酸（cysteine）含量比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-05-19 00:00

  期刊论文

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• 植物碱性焦磷酸酶活性比色法法定量检测试剂盒

  主要用途植物碱性焦磷酸酶（AlkalinePyrophosphatase）活性比色法法定量检测试剂是一种旨在使用无机焦磷酸，在碱性焦磷酸酶去磷酸化后，释放出游离磷酸根，由硫酸亚铁氨还原产生钼蓝显色反应后峰值的变化，采用比色法测定其峰值的变化，以此进行测算单位酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种植物组织，包括种子、球茎（bulb）、块茎（tuber）、根（root）、种叶（coleoptile）和叶片裂解悬液样品或纯化以及粗提的酶蛋白的碱性焦磷酸酶活性及其YZ剂的检测。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景焦磷酸酶（Pyrophosphatase；PPase；；EC3.6.1.1），又称为无机焦磷酸酶（inorganicpyrophosphatase），属于磷酸酶家族，包括磷酸单酯酶（phosphomonoesterase）、磷酸二酯酶（phosphodiesterase）等。通过释放磷酸根，参与DNA合成、RNA合成、辅酶合成、钙吸收、骨形成、氨基酸合成和脂肪酸代谢的激活等代谢活动。焦磷酸酶分为碱性和酸性，前者作用于合成代谢，而后者作用于分解反应。焦磷酸酶催化无机焦磷酸水解产生2个磷酸根离子的反应，为能量释放反应（exergonicreaction）。在植物中，尤其碳4或碳3植物的叶片中，活性Z高。在固碳还原和光合作用起着重要作用成为碳4植物通路的指标。基于底物无机焦磷酸，在碱性条件下，受到碱性焦磷酸酶的去磷酸化作用，释放出游离磷酸根，由硫酸亚铁氨还原产生钼蓝显色反应后，在分光光度仪下（660nm波长）产生峰值的变化，由此测定碱性焦磷酸酶的活性。[详细]

  2018-11-08 10:00

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• UHPLC-QuadrupoleMS检测十字花科植物中的游离氨基酸

  中文摘要:采用超GX液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用技术(UHPLC-Quadrupole/OrbitrapMS)结合柱前衍生法建立了可同时测定28种游离氨基酸的分析方法，并对十字花科植物中的游离氨基酸进行检测和分析。样品用超纯水提取后，经6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯(AQC)衍生，采用WatersBEHC18柱作为色谱柱，以pH5.0乙酸铵缓冲溶液和80%乙腈水溶液作为流动相进行梯度洗脱。质谱检测器采用电喷雾离子源，在正离子模式下进行检测。实验结果表明，十字花科植物中含有25种以上游离氨基酸，其中包括人体必需的8种氨基酸。25种氨基酸在线性范围内相关性良好，平均加标回收率为80.5%~104.4%，相对标准偏差为0.6%~4.4%。不同氨基酸检测灵敏度不同，定量下限为0.01~1.45μmol/L。该方法杂质干扰小，分析速度快，灵敏度高，适用于植物样品中游离氨基酸的同步检测。中文关键词:超GX液相色谱高分辨质谱游离氨基酸十字花科植物[详细]

  2018-09-10 11:11

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• MTS比色法细胞繁殖定量检测试剂盒产品说明书

  MTS比色法细胞繁殖定量检测试剂盒产品说明书[详细]

  2016-03-10 00:00

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• Ca-ATP酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

  Ca-ATP酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，机体在缺氧及等状态下，ATP酶受到损伤，活力下降。ATP酶活力的大小是各种细胞能量代谢及功能有无损伤的重要指标。本测试盒可测钠钾ATP酶、钙镁ATP酶的活性。样品为各种组织及红细胞等，本法的Zda特点是样品前处理不需要高速离心机，方法简便、快速。产品内容缓冲液（ReagentA）6毫升反应液（ReagentB）6毫升底物液（ReagentC）6毫升阴性液（ReagentD）6毫升标准品（reagentE）6微升产品说明书1份保存方式保存反应液（ReagentB）和底物液（ReagentC）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；底物液（ReagentC）避免光照，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于反应液配制的容器微型台式离心机：用于样品制备比色皿或酶标板：用于比色的容器分光光度仪：用于比色分析酶标仪：用于微量样品比色分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的反应液（ReagentB）和底物液（ReagentC）置入冰槽里融化。底物液（ReagentC）避免光照。然后进行下列操作。样品准备选择一：血浆样品1．准备好ACD抗凝管（注意：避免使用肝素或EDTA抗凝管）2．抽取2毫升血液，置于抗凝管里3．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g4．小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）5．即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存6．（选择步骤）移取50微升进行蛋白定量测定选择二：血清样品1．准备好不含抗凝剂的储存管2．抽取2毫升血液，置于储存管里3．室温下，静置30分钟，直至血液凝结4．放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为5000g5．小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）6．即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存7．（选择步骤）移取50微升进行蛋白定量测定选择三：组织样本准确称取组织重量，按照重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍的是PBS或者生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，去上清液待测。二、测定准备1.准备好上述待测样品，置于冰槽里2.设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长440nm三、样本测定1．在96孔酶标板上做好相应标记：背景对照，标准品孔和样品孔2．分别移取50微升缓冲液（ReagentA）到相应孔中3．设定标准品孔(加入50微升标准品），样本孔(加入50微升样本)阴性液孔(加入50微升阴性液（ReagentD）4．分别加入50微升反应液（ReagentB）5．轻轻摇动96孔酶标板6．在37℃温度下孵育2分钟7．放进酶标仪，置零8．取出酶标板，分别加入50微升底物液（ReagentC）9．轻轻摇动酶标板10．即刻放进酶标仪检测，包括（0分钟初始读数和5分钟读数）四，样本计算样本活性=样本OD值/标准OD值*标品浓度[详细]

  2024-09-29 05:34

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• 细胞脂质比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  细胞脂质比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-05-12 00:00

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• 细胞弹性蛋白含量比色法（TPPS）定量检测试剂盒产品说明书

  细胞弹性蛋白含量比色法（TPPS）定量检测试剂盒产品说明书主要用途细胞弹性蛋白含量比色法（TPPS）定量检测试剂是一种旨在通过酸性加热萃取并转化为可溶性弹性蛋白，与四苯基卟吩四磺酸染料结合，在碱性条件下，释放棕红色染料，酸性处理后，由分光光度仪比色分析，定量检测细胞样品中弹性蛋白含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。可以用于检测各种弹性蛋白，包括原弹性蛋白（tropoelastin）、致山黧豆中毒弹性蛋白（lathyrogenic）、α弹性蛋白、k-弹性蛋白等。适用于各种细胞（动物、人体等）或培养上清弹性蛋白水平检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测准确。技术背景弹性蛋白（elastin）是一种不溶性的非极性的碱性蛋白，具有高度抗拉能力（tensilestrength），存在于大动脉、气管、支气管、韧带等结缔组织细胞间。弹性蛋白由多肽二价交联随机扭绞（randomlykinked）组成，通过锁链素（desmosine）和异锁链素（isodesmosine）相连。动物细胞上的原弹性蛋白（tropoelastin）为单体，可溶性，分子量为62至72Kd。与微纤丝（microfibril）糖蛋白结合，形成弹性基质（matrix）或弹性组织筏（raft），构成细胞膜表面。通过酸性加热萃取弹性蛋白，并转化为可溶性衍生物，α弹性蛋白、k-弹性蛋白等，进而使用四苯基卟吩四磺酸（5,10,15,20-tetraphenylporphin-21H,23H-tetra-sulfonate；TPPS）染料与弹性蛋白发生温克尔曼反应（Winkelmanreaction）结合，然后在碱性条件下释放出棕红色染料，酸性处理后，呈现绿色，通过分光光度仪（445nm波长）测定，分析弹性蛋白的含量。产品内容萃取液（ReagentA）毫升沉淀液（ReagentB）毫升清理液（ReagentC）毫升染色液（ReagentD）毫升浓缩液（ReagentE）毫升解离液（ReagentF）毫升强化液（ReagentG）毫升标准液（ReagentH）毫升稀释液（ReagentI）毫升产品说明书1份保存方式保存标准液（ReagentH）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；染色液（ReagentD）避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于标准液配制和样品制备的容器15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器细胞刮脱棒：用于细胞脱离平式摇荡仪：用于样品操作干式恒温仪：用于样品孵育微型台式离心机：用于样品操作200微升1厘米光径比色皿或96孔板：用于比色分析的容器分光光度仪或酶标仪：用于比色分析实验步骤一、样品预处理1）细胞上清处理移取300微升细胞培养上清到1.5毫升离心管加入xx微升萃取液（ReagentA）涡旋振荡15秒放进100℃干式恒温仪孵育60分钟置于室温下15分钟冷却放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心移取400微升上清液到新的1.5毫升离心管加入xx微升4℃预冷的沉淀液（ReagentB）在冰槽里孵育30分钟，期间每隔10分钟涡旋振荡15秒放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液，确保无液体残留；沉淀颗粒透明且肉眼难以看见置于冰槽里备用2）细胞处理准备好25cm2细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5X106细胞）小心抽去培养液小心加入xx毫升清理液（ReagentC），覆盖生长表面小心抽去清理液使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：可以使用胰酶消化）加入xx毫升清理液（ReagentC），混匀细胞移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）放进台式离心机离心5分钟，速度为300g小心抽去上清液，但保留300微升，混匀细胞颗粒群转移到1.5毫升离心管加入xx微升萃取液（ReagentA）涡旋振荡15秒放进100℃干式恒温仪孵育60分钟置于室温下15分钟冷却放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心移取400微升上清液到新的1.5毫升离心管（注意：上清液可能会呈现黄色）加入xx微升4℃预冷的沉淀液（ReagentB）在冰槽里孵育30分钟，期间每隔10分钟涡旋振荡15秒放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液（注意：确保无液体残留；沉淀颗粒透明且肉眼难以看见）置于冰槽里备用二、标准样品配制准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至4号管分别加入xx微升稀释液（ReagentI）到1至4号管移取xx微升标准液（ReagentH）到1号管，混匀小心移取xx微升1号管稀释的标准液（ReagentH）到2号管，混匀小心移取xx微升2号管稀释的标准液（ReagentH）到3号管，混匀小心抽去xx微升3号管稀释的标准液（ReagentH）将1至4号管放进冰槽里备用；标准管浓度见下表管号稀释液（ReagentI）标准液（ReagentH）标准弹性蛋白含量1xx微升xx微升xx微克2xx微升xx微升1号管xx微克3xx微升xx微升2号管xx微克4xx微升背景读数0分别加入xx微升4℃预冷的沉淀液（ReagentB）到上述标准管里在冰槽里孵育30分钟，期间每隔10分钟涡旋振荡15秒放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液（注意：确保无液体残留；沉淀颗粒透明且肉眼难以看见）置于冰槽里备用标准曲线测定分别加入xx微升染色液（ReagentD）到上述配制的标准液（ReagentH）里（注意：用枪头抽打使沉淀颗粒溶解）分别加入xx微升浓缩液（ReagentE）涡旋振荡混匀室温下，孵育60分钟，期间每隔15分钟涡旋振荡15秒放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液（注意：确保没有液体残留）加入xx微升解离液（ReagentF）用枪头抽打使沉淀颗粒溶解，并辅以涡旋震荡（注意：确保充分溶解）加入xx微升强化液（ReagentG），混匀（注意：呈现绿色）转移到新的200微升1厘米光径的比色皿或96孔板即刻放进分光光度仪或酶标仪检测（波长445nm）：获得标准样品吸光读数重复实验步骤1至11四次构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光读数；横座标（X轴）为标准弹性蛋白含量（微克）（注意：标准样品吸光读数背景读数）样品测定加入xx微升染色液（ReagentD）到上述配制的待测样品管里（注意：用枪头抽打使沉淀颗粒溶解）分别加入xx微升浓缩液（ReagentE）涡旋振荡混匀室温下，孵育60分钟，期间每隔15分钟涡旋振荡15秒放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液（注意：确保没有液体残留）加入xx微升解离液（ReagentF）用枪头抽打使沉淀颗粒溶解，并辅以涡旋震荡（注意：确保充分溶解）加入xx微升强化液（ReagentG），混匀（注意：呈现绿色）转移到新的200微升1厘米光径的比色皿或96孔板即刻放进分光光度仪或酶标仪检测（波长445nm）：获得样品吸光读数根据上述标准曲线获得样品对应弹性蛋白含量（微克）（注意：待测样品吸光读数背景读数）浓度计算注意事项本产品为25次操作，包括标准样品本产品检测范围为5至100微克弹性蛋白操作时，须戴手套系统操作时，标准样品测定只需1次弹性蛋白沉淀颗粒微小透明，肉眼难以看见操作需要非常细致，包括避免液体残留、颗粒溶解等，否则会产生误差试剂具有腐蚀性，严格注意操作安全孵育时，避免光照如果样品弹性蛋白含量过低，可以浓缩样品或增加样品量样品浓度可以表述为：微克弹性蛋白/细胞量；微克弹性蛋白/细胞总蛋白等通常1X105细胞含有40微克弹性蛋白本公司提供系列弹性蛋白检测试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定检测敏感[详细]

  2018-11-19 10:00

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• 细菌蛋白酶（PROTEASE）活性比色法定量检测试剂盒说明书

  细菌蛋白酶（PROTEASE）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途细菌蛋白酶（PROTEASE）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过底物偶氮酪蛋白受到蛋白酶水解，产生橘红色产物的吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。其适用于各种细菌细胞裂解液以及培养上清样品蛋白酶的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景蛋白酶（protease）又称为肽酶（peptidase）或蛋白质酶（proteinase），是一类蛋白水解的酶，属于水解酶（hydrolase）家属中一员，存在于所有生物体内。通过肽键的水解，进行蛋白质的分解代谢，参与体内血液凝结、补体系统、凋亡、细胞生长和分化等一系列生理活动。蛋白酶基本分成6类，包括丝氨酸（serine）、苏氨酸（threonine）、半胱氨酸（cysteine）、谷氨酸（glutamate）、天冬氨酸（aspartate）、金属（metalloprotease）蛋白酶等；也可以分成酸性、中性和碱性蛋白酶等；还可以分成内切肽酶，例如胰蛋白酶（trypsin），和外切肽酶，例如羧基肽酶A（carboxypeptidase）。细菌蛋白酶与碳和氮循环有关；作为外毒素（exotoxin），也是细菌致病的毒力（virulence）因子；同时细菌蛋白酶可以应用于食品、制药、皮革、诊断、水处理、银回收和洁净剂工业等。同时据此用以识别革蓝氏阴性细菌，例如枯草芽孢杆菌（Bac.Subtilis）等。基于底物偶氮酪蛋白（azocasein或sulfanilamideazocasein），在细菌蛋白酶的催化水解下，产生橘红色产物，通过其吸收峰值的变化（440nm波长），来定量分析蛋白酶的总活性。其反应系统为：产品内容裂解液（ReagentA）毫升反应液（ReagentB）毫升终止液（ReagentC）毫升中和液（ReagentD）毫升阴性液（ReagentE）微升产品说明书1份保存方式保存反应液（ReagentB）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；终止液（ReagentC）和中和液（ReagentD）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于样品操作的容器微型台式离心机：用于样品制备恒温水槽：用于孵育反应比色皿：用于比色的容器分光光度仪：用于比色分析实验步骤样品准备准备好500微升待测细菌（OD600＝0.4至0.8，即1至2X107细胞/毫升）转移到到1.5毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为1000g（或3500RPM，例如EPPENDORF5415）小心抽去上清液加入xx微升裂解液（ReagentA），充分混匀QL涡旋震荡15秒置于冰槽里15分钟放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作测定准备准备好待测样品（例如细菌裂解萃取液或培养上清等），置于冰槽里设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长440nm，并置零实验开始前，将反应液（ReagentB）置于65℃恒温水槽孵育20分钟后使用三、背景测定移取xx微升反应液（ReagentB）到新的1.5毫升离心管加入xx微升阴性液（ReagentE）上下倾倒数次，混匀在37℃温度下孵育30分钟加入xx微升终止液（ReagentC）涡旋震荡5秒在冰槽里孵育15分钟即刻放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为3000g小心移取500微升上清液到新的1.5毫升离心管加入xx微升中和液（ReagentD），混匀转移到比色皿里即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照样品活性测定移取xx微升反应液（ReagentB）到新的1.5毫升离心管加入100微升待测样品（蛋白总量100微克）（注意：样品需澄清）上下倾倒数次，混匀在37℃温度下孵育30分钟加入xx微升终止液（ReagentC）涡旋震荡5秒在冰槽里孵育15分钟即刻放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为3000g小心移取500微升上清液到新的1.5毫升离心管（注意：沉淀物为橘红色）加入xx微升中和液（ReagentD），混匀转移到比色皿里即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数计算样品活性注意事项本产品为20次操作操作时，须戴手套终止液（ReagentC）和中和液（ReagentD）具有腐蚀性，注意操作安全系统检测时，背景测定只需一次样品须澄清，至关重要比色测定后，比色皿须清洗彻底建议待测样本的蛋白浓度为100微克/100微升（本公司提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒30030.1）如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度蛋白酶活性单位浓度定义：在37℃下，pH7.5的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）产生0.01吸光值的升高变化本公司提供系列细菌生理生化检测试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定检测敏感[详细]

  2018-11-19 10:00

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• 组织氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒产品说明书

  组织氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒产品说明书[详细]

  2015-09-16 00:00

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• 组织乙酰胆碱酯酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  组织乙酰胆碱酯酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-05-28 00:00

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• 细胞糖原硫酸蒽酮比色法定量检测试剂盒产品说明书

  细胞糖原硫酸蒽酮比色法定量检测试剂盒产品说明书[详细]

  2015-04-14 00:00

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• 组织乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒产品说明书...

  组织乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途组织乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒是一种旨在使用乙醛脱氢酶2敏感性YZ剂，通过检测反应系统中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）还原后峰值的，即采用比色法来测定组织裂解萃取液样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解悬液样品（动物、人体等）乙醛脱氢酶2的特异活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景乙醛脱氢酶（aldehydedehydrogenase；ALDH；EC1.2.1.3），又称为乙醛NAD氧化还原酶（aldehydeNAD-oxidoreductase）是一类NAD（P）依赖性酶，催化广谱的外源性或内源性脂肪族和芳香族乙醛类底物氧化，包括乙醇、氨基酸、生物胺（biogenicamine）、维生素、固醇类、脂质、药物和环境分子等代谢产物。乙醛脱氢酶是乙醇在体内分解代谢过程中两种主要酶之一。乙醛脱氢酶把乙醛中的两个氢原子脱掉，使乙醛转化为乙酸，生成的乙酸进入脂肪酸氧化途径，Z终被氧化成二氧化碳和水。乙醛脱氢酶主要有两种同工酶：ALDH1和ALDH2。ALDH1存在于胞液中，ALDH2存在于线粒体中，ALDH2比ALDH1的活性高。乙醛脱氢酶的缺少，使酒精不能被完全分解为水和二氧化碳，而是以乙醛继续留在体内，使人喝酒后产生恶心欲吐、昏迷不适等醉酒症状。基于来自于乙醇代谢产生的乙醛（acetaldehyde），在7-羟基-3-（4-羟苯基）-异黄酮-7-糖苷（Daidzein-7-O-β-D-glucopyranoside；Daidzin）存在与否的情况下，由乙醛脱氢酶2的催化作用，转化为乙酸（aceticacid）产物后，通过测定反应体系中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidizedreducednicotinamideadeninedinucleotide；NAD）转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reducednicotinamideadeninedinucleotide；NADH）的变化（340nm波长），来定量分析乙醛脱氢酶2的特异活性。乙醛脱氢酶2反应系统为：产品内容清理液（ReagentA）毫升裂解液（ReagentB）毫升缓冲液（ReagentC）毫升反应液（ReagentD）毫升底物液（ReagentE）毫升阴性液（ReagentF）毫升专性液（ReagentG）微升产品说明书1份保存方式保存缓冲液（ReagentC）、反应液（ReagentD）、底物液（ReagentE）和专性液（ReagentG）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；反应液（ReagentD）和底物液（ReagentE）避免光照；有效保证6月[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 组织基质金属蛋白酶2活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

  主要用途组织基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过含硫多肽底物以及特定YZ剂存在与否的情况下，受到MMP2的水解，释放出巯基，进而使用Ellman试剂，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定组织裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或完全纯化酶样品中基质金属蛋白酶2的特异活性定量检测，以及YZ剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，安全可靠。技术背景基质金属蛋白酶（Matrixmetalloproteinases；MMPs）是一类结构高度同源的分泌型或膜相关性锌内肽酶的总称，因含有金属（锌、钙）离子而得名。其功能在于分解细胞外基质成分。迄今为止发现的MMPs至少有28种，几乎能降解除多糖以外的全部细胞外基质（extracellularmatrix）成分，同时参与胚胎发育、形态形成、胚泡植入（blastocyst）、血管形成、组织再吸收（tissueresorption）、疾病发生，例如关节炎、癌细胞浸入转移等。根据降解的底物不同可将MMPs分为4大类：（1）胶原酶：MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和蛋白多糖；（2）明胶酶（Ⅳ型胶原酶）：MMP2、MMP9，又称明胶酶A、B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和弹性纤维；（3）基质溶解素：MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12，主要作用于纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、弹力纤维、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ胶原及MMP1、MMP8、MMP9；（4）膜型金属蛋白酶：MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP，主要作用于明胶、Ⅳ型胶原、MMP2。体内绝大多数细胞并不储备MMPs，当需要MMPs的信号传递到细胞后才临时合成，合成的MMPs以无活性的酶原（proenzyme）形式分泌到细胞外，随后被多种蛋白酶和非蛋白酶水解以及热处理激活，一种激活的MMPs可激活另一种MMPs，形成瀑布效应。基质金属蛋白酶-2，又称明胶酶A（gelatinase-A）或IV型胶原酶（typeIVcollagenase），其前体分子量为72kDa，激活后分子量为62和56kDa。它在血清或细胞上清中浓度通常为10至200纳克/毫升。它的作用目标是天然和变性胶原蛋白（collagens）、纤维连接蛋白（fibronectin）、弹性纤维蛋白（elastin）、层粘连蛋白-5（laminin-5）、前体肿瘤坏死因子-α（pro-TNF-α）和神经（蛋白）聚糖（neurocan）。基质金属蛋白酶-2与肿瘤发展与转移、血管形成、动脉粥样硬化等疾病有关。基于含硫多肽（thiopeptide）底物Ac-PLG（2-mercapto-4-methyl-pentanoyl）-LG-OC2H5，在特异性YZ剂OA-Hy存在与否的条件下，受到MMP2的水解，释放出巯基（sulfhydrylgroup），进而与Ellman试剂5，5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5，5’-dithiobis-（2-nitrobenzoicacid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoicacid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量测定组织基质金属蛋白酶2的特异活性。基质金属蛋白酶2反应系统为：[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 细胞基质金属蛋白酶2活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

  主要用途细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过含硫多肽底物以及特定YZ剂存在与否的情况下，受到MMP2的水解，释放出巯基，进而使用Ellman试剂，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定细胞裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或完全纯化酶样品中基质金属蛋白酶2的特异活性定量检测，以及YZ剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，安全可靠。技术背景基质金属蛋白酶（Matrixmetalloproteinases；MMPs）是一类结构高度同源的分泌型或膜相关性锌内肽酶的总称，因含有金属（锌、钙）离子而得名。其功能在于分解细胞外基质成分。迄今为止发现的MMPs至少有28种，几乎能降解除多糖以外的全部细胞外基质（extracellularmatrix）成分，同时参与胚胎发育、形态形成、胚泡植入（blastocyst）、血管形成、组织再吸收（tissueresorption）、疾病发生，例如关节炎、癌细胞浸入转移等。根据降解的底物不同可将MMPs分为4大类：（1）胶原酶：MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和蛋白多糖；（2）明胶酶（Ⅳ型胶原酶）：MMP2、MMP9，又称明胶酶A、B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和弹性纤维；（3）基质溶解素：MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12，主要作用于纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、弹力纤维、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ胶原及MMP1、MMP8、MMP9；（4）膜型金属蛋白酶：MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP，主要作用于明胶、Ⅳ型胶原、MMP2。体内绝大多数细胞并不储备MMPs，当需要MMPs的信号传递到细胞后才临时合成，合成的MMPs以无活性的酶原（proenzyme）形式分泌到细胞外，随后被多种蛋白酶和非蛋白酶水解以及热处理激活，一种激活的MMPs可激活另一种MMPs，形成瀑布效应。基质金属蛋白酶-2，又称明胶酶A（gelatinase-A）或IV型胶原酶（typeIVcollagenase），其前体分子量为72kDa，激活后分子量为62和56kDa。它在血清或细胞上清中浓度通常为10至200纳克/毫升。它的作用目标是天然和变性胶原蛋白（collagens）、纤维连接蛋白（fibronectin）、弹性纤维蛋白（elastin）、层粘连蛋白-5（laminin-5）、前体肿瘤坏死因子-α（pro-TNF-α）和神经（蛋白）聚糖（neurocan）。基质金属蛋白酶-2与肿瘤发展与转移、血管形成、动脉粥样硬化等疾病有关。基于含硫多肽（thiopeptide）底物Ac-PLG（2-mercapto-4-methyl-pentanoyl）-LG-OC2H5，在特异性YZ剂OA-Hy存在与否的条件下，受到MMP2的水解，释放出巯基（sulfhydrylgroup），进而与Ellman试剂5,5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5,5’-dithiobis-（2-nitrobenzoicacid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoicacid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量测定细胞基质金属蛋白酶2的特异活性。基质金属蛋白酶2反应系统为：[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 细菌异柠檬酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

  主要用途细菌异柠檬酸脱氢酶（ISOCITRATEDEHYDROGENASE）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过反应系统中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸酸（NADP）还原后峰值的变化，即采用比色法来测定细菌裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种细菌细胞裂解悬液样品异柠檬酸脱氢酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景异柠檬酸脱氢酶（isocitratedehydrogenase；IDH；EC1.1.1.42）是三羧酸循环（citricacidcycle）或克雷布斯循环（Krehescycle）中的酶之一，存在于所有生物体内。细菌异柠檬酸脱氢酶有2种同工酶：同源双体，40至45Kd分子量；单体，80至100Kd分子量。在细菌体内，氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸（oxidizedβ-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphate；NADP）依赖性异柠檬酸脱氢酶获得辅酶NADP和辅助因子锰或镁离子（Mn）的推动，脱去底物异柠檬酸的氢和二氧化碳（氧化性脱羧基作用），转化为α-酮戊二酸（α-ketoglutarate），同时生成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸（reducedβ-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphate；NADPH）。一旦磷酸化或在乙酸环境中，以及有限的葡萄糖条件下，异柠檬酸脱氢酶则失活，从而控制三羧酸循环和乙醛酸旁路（glyoxylatebypass）之间碳的流动。基于异柠檬酸脱氢酶的NADP依赖性，和作用后所产生的NADPH，通过分光光度仪的峰值变化（340nm波长），来定量分析异柠檬酸脱氢酶的活性。异柠檬酸脱氢酶反应系统为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 细胞PTEN活性定磷比色法定量检测试剂盒产品说明书

  细胞PTEN活性定磷比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途细胞PTEN活性定磷比色法定量检测试剂是一种旨在使用特异性合成底物磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），在PTEN去磷酸化后，释放出游离磷酸根，与孔雀绿染料发生显色反应后，采用比色法测定其峰值的变化，以此进行测算单位酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适合于各种细胞裂解悬液样品的PTEN活性及其YZ剂的检测。广泛应用于细胞凋亡、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景细胞张力蛋白同源在10号染色体缺失性磷酸酶（phosphataseandtensinhomologdeletedonchromosometen；PTEN；EC3.1.3.67），又称为多发性晚期肿瘤突变基因1（mutatedinmultipleadvancedcancers1；MMAC1），是一个肿瘤YZ基因，位于染色体10q23.3，转录产物515kb，蛋白产物175氨基酸。PTEN蛋白含有一酪蛋白磷酸酶的功能区和约175个氨基酸左右的与骨架蛋白张力蛋白（tenasin）、辅助蛋白（auxilin）同源的区域，是一种双重特异性磷酸酶，能使酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸、磷酯酰肌醇（phosphoinositide）等去磷酸化。PTEN具有调节细胞周期、防止细胞过度生长和分开裂解、参与细胞凋亡、粘附、迁移、浸润，控制细胞内磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate；PIP3）水平，调控Akt/PKB信号通路等功能。PTEN基因突变和缺失将导致肿瘤发生、发展和转移，以及多发性错构瘤综合征（Cowdensyndrome）等。基于底物磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸，在PTEN的催化下，水解产生磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2），同时释放出游离磷酸根，进而与孔雀绿染料发生显色反应产生其峰值的变化（660nm波长），以此测算PTEN的活性。产品内容清理液（ReagentA）120毫升裂解液（ReagentB）10毫升缓冲液（ReagentC）1毫升阴性液（ReagentD）1毫升反应液（ReagentE）200微升终止液（ReagentF）1毫升显色液（ReagentG）4毫升标准液（ReagentH）500微升产品说明书1份保存方式保存裂解液（ReagentB）、缓冲液（ReagentC）、反应液（ReagentE）和显色液（ReagentG）在－20℃冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在4℃冰箱里；终止液（ReagentF）和显色液（ReagentG）具有腐蚀性，避免直接用手接触；显色液（ReagentG）避免光照，有效保证6月用户自备15毫升离心管：用于样品处理的容器1.5毫升离心管：用于样品处理和保存的容器细胞刮脱棒：用于贴壁细胞脱离（微型）台式离心机：用于样品收集培养箱：用于孵育反应物比色皿：用于比色的容器分光光度仪：用于比色分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液放进冰槽里融化。然后进行下列操作。样品准备准备好25cm2细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞（5X106细胞）小心加入3毫升预冷的清理液（ReagentA），覆盖生长表面小心抽去清理液使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞加入3毫升清理液（ReagentA），混匀细胞移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g小心抽去上清液加入500微升裂解液（ReagentB），充分混匀转移到预冷的1.5毫升离心管QL涡旋震荡15秒置于冰槽里孵育30分钟放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管移取2微升进行蛋白定量测定（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－HL30030.1）即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作二、测定准备准备好待测样品（例如细胞裂解萃取液等），置于冰槽里（注意：样品须澄清）设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长为660nm，并置零准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管按下表分别加入阴性液（ReagentD）和标准液（ReagentH）到每个离心管，混匀将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表管号阴性液（ReagentD）标准液（ReagentH）测定体系标准磷浓度10100微升20微摩尔/升225微升75微升15微摩尔/升350微升50微升10微摩尔/升475微升25微升5微摩尔/升5100微升00标准曲线测定移取20微升阴性液（ReagentD）到新的比色皿加入5微升上述配制的标准液在37℃温度下孵育10分钟加入8微升终止液（ReagentF），混匀加入100微升显色液（ReagentG），混匀室温下静置15分钟，避免光照即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数重复实验步骤1至7四次构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（A）；横座标（X轴）为标准磷浓度（微摩尔/升）样品背景测定移取20微升缓冲液（ReagentC）到新的比色皿加入5微升待测样品（总量100微克细胞裂解萃取液蛋白）在37℃温度下孵育10分钟加入8微升终止液（ReagentF），混匀加入100微升显色液（ReagentG），混匀室温下静置15分钟，避免光照即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数根据标准曲线获得样品背景对应磷浓度样品活性测定移取10微升缓冲液（ReagentC）到新的比色皿加入5微升待测样品（总量100微克细胞裂解萃取液蛋白）在37℃温度下孵育2分钟加入10微升反应液（ReagentE）在37℃温度下孵育10分钟加入8微升终止液（ReagentF），混匀加入100微升显色液（ReagentG），混匀室温下静置15分钟，避免光照即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数根据标准曲线获得样品活性对应磷浓度计算样品活性{[根据标准曲线获得样品活性对应磷浓度（微摩尔/升）根据标准曲线获得样品背景对应磷浓度（微摩尔/升）]X5（体系倍数）X样品稀释倍数}÷10（反应时间；分钟）＝纳摩尔磷/毫升/分钟÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝纳摩尔磷/毫克/分钟注意事项本产品为25次操作，包括5次标准测定操作时，避免污染母液操作时，须戴手套终止液（ReagentF）和显色液（ReagentG）具有腐蚀性，避免直接用手接触样品切忌使用磷酸缓冲液和脱氧胆酸纳处理比色测定后，比色皿须清洗彻底如果用户没有660nm波长，可以使用600至660nm的任一波长替代显示绿色表明具有较强酶活性空白对照读数应小于0.2建议待测样本蛋白浓度为100微克/5微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量；（本公司提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－HL30030.1）钙调神经磷酸酶活性单位浓度定义：在37℃温度下，pH8.0的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）释放1微摩尔的磷本公司提供系列磷酸化酶检测试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定检测准确[详细]

  2018-11-19 10:00

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• Na~+-K~+-ATP酶活性比色法定量检测试剂盒说明书

  Na~+-K~+-ATP酶活性比色法定量检测试剂盒说明书主要用途ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，机体在缺氧及等状态下，ATP酶受到损伤，活力下降。ATP酶活力的大小是各种细胞能量代谢及功能有无损伤的重要指标。本测试盒可测钠钾ATP酶、钙镁ATP酶的活性。样品为各种组织及红细胞等，本法的Zda特点是样品前处理不需要高速离心机，方法简便、快速。产品内容缓冲液（ReagentA）6毫升反应液（ReagentB）6毫升底物液（ReagentC）6毫升阴性液（ReagentD）6毫升标准品（reagentE）6微升产品说明书1份保存方式保存反应液（ReagentB）和底物液（ReagentC）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；底物液（ReagentC）避免光照，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于反应液配制的容器微型台式离心机：用于样品制备比色皿或酶标板：用于比色的容器分光光度仪：用于比色分析酶标仪：用于微量样品比色分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的反应液（ReagentB）和底物液（ReagentC）置入冰槽里融化。底物液（ReagentC）避免光照。然后进行下列操作。样品准备选择一：血浆样品1．准备好ACD抗凝管（注意：避免使用肝素或EDTA抗凝管）2．抽取2毫升血液，置于抗凝管里3．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g4．小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）5．即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存6．（选择步骤）移取50微升进行蛋白定量测定选择二：血清样品1．准备好不含抗凝剂的储存管2．抽取2毫升血液，置于储存管里3．室温下，静置30分钟，直至血液凝结4．放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为5000g5．小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）6．即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存7．（选择步骤）移取50微升进行蛋白定量测定选择三：组织样本准确称取组织重量，按照重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍的是PBS或者生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，去上清液待测。二、测定准备1.准备好上述待测样品，置于冰槽里2.设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长440nm三、样本测定1．在96孔酶标板上做好相应标记：背景对照，标准品孔和样品孔2．分别移取50微升缓冲液（ReagentA）到相应孔中3．设定标准品孔(加入50微升标准品），样本孔(加入50微升样本)阴性液孔(加入50微升阴性液（ReagentD）4．分别加入50微升反应液（ReagentB）5．轻轻摇动96孔酶标板6．在37℃温度下孵育2分钟7．放进酶标仪，置零8．取出酶标板，分别加入50微升底物液（ReagentC）9．轻轻摇动酶标板10．即刻放进酶标仪检测，包括（0分钟初始读数和5分钟读数）四，样本计算样本活性=样本OD值/标准OD值*标品浓度[详细]

  2024-09-29 11:52

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