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Ca-ATP酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

本文由 南京森贝伽生物科技有限公司 整理汇编

2024-09-29 05:34 628阅读次数

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Ca-ATP酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上,是生物膜上的一种蛋白酶,机体在缺氧及等状态下,ATP酶受到损伤,活力下降。ATP酶活力的大小是各种细胞能量代谢及功能有无损伤的重要指标。本测试盒可测钠钾ATP酶、钙镁ATP酶的活性。样品为各种组织及红细胞等,本法的Zda特点是样品前处理不需要高速离心机,方法简便、快速。产品内容缓冲液(ReagentA)6毫升反应液(ReagentB)6毫升底物液(ReagentC)6毫升阴性液(ReagentD)6毫升标准品(reagentE)6微升产品说明书1份保存方式保存反应液(ReagentB)和底物液(ReagentC)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;底物液(ReagentC)避免光照,有效保证6月用户自备1.5毫升离心管:用于反应液配制的容器微型台式离心机:用于样品制备比色皿或酶标板:用于比色的容器分光光度仪:用于比色分析酶标仪:用于微量样品比色分析实验步骤实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的反应液(ReagentB)和底物液(ReagentC)置入冰槽里融化。底物液(ReagentC)避免光照。然后进行下列操作。样品准备选择一:血浆样品1.准备好ACD抗凝管(注意:避免使用肝素或EDTA抗凝管)2.抽取2毫升血液,置于抗凝管里3.放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为5000g4.小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分(注意:避免触碰白色液体层)5.即刻置于冰槽里备用或放进-70℃冰箱里保存6.(选择步骤)移取50微升进行蛋白定量测定选择二:血清样品1.准备好不含抗凝剂的储存管2.抽取2毫升血液,置于储存管里3.室温下,静置30分钟,直至血液凝结4.放进4℃微型台式离心机离心15分钟,速度为5000g5.小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分(注意:避免触碰白色液体层)6.即刻置于冰槽里备用或放进-70℃冰箱里保存7.(选择步骤)移取50微升进行蛋白定量测定选择三:组织样本准确称取组织重量,按照重量(g):体积(ml)=1:9的比例,加入9倍的是PBS或者生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,2500转/分,离心10分钟,去上清液待测。二、测定准备1.准备好上述待测样品,置于冰槽里2.设定好分光光度仪(温度为37℃):波长440nm三、样本测定1.在96孔酶标板上做好相应标记:背景对照,标准品孔和样品孔2.分别移取50微升缓冲液(ReagentA)到相应孔中3.设定标准品孔(加入50微升标准品),样本孔(加入50微升样本)阴性液孔(加入50微升阴性液(ReagentD)4.分别加入50微升反应液(ReagentB)5.轻轻摇动96孔酶标板6.在37℃温度下孵育2分钟7.放进酶标仪,置零8.取出酶标板,分别加入50微升底物液(ReagentC)9.轻轻摇动酶标板10.即刻放进酶标仪检测,包括(0分钟初始读数和5分钟读数)四,样本计算样本活性=样本OD值/标准OD值*标品浓度

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