小鼠胚胎干细胞培养实验步骤

本文由 上海信然实业有限公司 整理汇编

2015-03-24 00:00 236阅读次数

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更多资料

• 小鼠胚胎干细胞培养实验步骤

  小鼠胚胎干细胞培养实验步骤[详细]

  2015-03-24 00:00

  产品样册

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• 胚胎干细胞培养生长因子产品说明书（中文版）

  主要用途胚胎干细胞培养生长因子是一种旨在用于体外促进胚胎干细胞的生长繁殖能力，维护胚胎干细胞的多能性，YZ培养中的胚胎干细胞的自发分化等体外培养必须的营养因子。其适用于新的胚胎干细胞系的建立、培养已有的胚胎干细胞系以及无基质细胞的CD34干细胞等。产品即到即用，严格无菌、无病毒和支原体，性能稳定，促细胞生长效应。技术背景胚胎干细胞培养生长因子包含碱性成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgrowthfactor；bFGF）和白血病YZ因子（leukaemiainhibitorfactor；LIF）。碱性成纤维细胞生长因子又称为肝素结合型生长因子-2（heparinbindinggrowthfactor-2）或碱性脑源型生长因子（basicbrainderivedgrowthfactor），是肝素结合型生长因子家属成员之一。分子量为17kD。其功能在于诱导各种正常二倍体细胞的DNA合成，例如中胚层、神经外胚层以及培养细胞等，促进血管再生，结合内皮细胞外基质肝素类分子，调节内皮细胞生长和分化，YZ胚胎干细胞分化。白血病YZ因子（leukaemiainhibitorfactor；LIF）是一个多效性、分泌性的糖蛋白生长因子。大部分细胞体系中的LIF的分子量为38到67kDa，具有帮助胚胎干细胞生长和YZ其分化的作用。[详细]

  2018-11-18 10:00

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• FH-M094-小鼠胚胎干细胞说明书

  FH-M094-小鼠胚胎干细胞说明书[详细]

  2024-05-30 09:33

  应用文章

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• 小鼠胚胎干细胞系MESPU30(M30)ELISA试剂盒

  小鼠胚胎干细胞系MESPU30(M30)ELISA试剂盒[详细]

  2013-12-09 00:00

  其它

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• 人神经元培养实验方法

  ProtocolsforNeuralCellCulture（THIRDEDITION）EditedbySergeyFedoroffandArleenRichardson详情请下载原文：ProtocolsforNeuralCellCulture[详细]

  2018-08-24 10:00

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• 从小鼠胚胎中分离胚胎干细胞的方法

  从小鼠胚胎中分离胚胎干细胞的方法[详细]

  2014-09-19 00:00

  专利

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• 酶联免疫法实验步骤

  酶联免疫法实验步骤[详细]

  2013-11-11 00:00

  应用文章

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• 加A试剂盒实验步骤

  利用具有3’-5’外切酶活性的高保真DNa聚合酶，如Pfu等进行PCR扩增时，其PCR产物为不带A尾的平末端DNa片段，如想将该片段克隆到T载体上，需要先利用A-Tai领Enzyme在平末端片段后加上A尾后才能与T载体上3’末端的T碱基互补连接。本产品是在平末端DNa片段的3’末端添加一个A尾，使平末端的DNa片段进行TA克隆成为可能。本试剂盒提供了加A尾需要的所有成分，可以在30分钟完成整个过程。与平末端DNa片段克隆相比，TA克隆具有较高的克隆效率，可大大提高实验成功率。[详细]

  2018-09-04 10:00

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• 石油产品灰分测定仪实验步骤

  1 准备工作 1.1 将稀盐酸（1：4）注入所用的瓷坩埚（或瓷蒸发皿）内煮沸几分钟，用蒸馏水洗涤。烘干后放在高温炉中在775±25℃温度下煅烧至少10分钟，取出在空气中冷却3分钟，移入干燥器中。冷却至室温后注，进行称量，称准至0.0001克。 重复进行煅烧、冷却及称量，直至连续两次称量间的差数不大于0.0005克为止。 注：一个干燥器中放一对坩埚为宜。放一对50毫升的坩埚，一般冷却30~45分钟可达到室温；放一对100毫升的坩埚，一般冷却45分钟到1小时可达到室温。坩埚一以冷却就应进行称量，坩埚在干燥器内停留多长时间，则其后的所有称量都应当让其在干燥器内停留同样长的时间以后才进行。 1.2 取样前将瓶中试样（其量不得多于该瓶容积的3/4）剧烈摇动均匀，要确保所取试样有真正的代表性。对粘稠的或含蜡的试样需预先加热至50～60℃。再摇动均匀后进行取样。 2实验步骤 2.1 将已经恒重的坩埚称量准确至0.1g，并以同样的准确度称入试样。根据情况，一般可取25g试样装在50ml得坩埚内进行试验。所取试样量的多少依试样灰分含量的大小而定，以所取试样能足以生成20mg的灰分为限，但[详细]

  2024-09-12 17:12

  操作手册

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• 纸箱抗压机解决方案及实验步骤

  纸箱抗压机解决方案及实验步骤[详细]

  2016-05-07 00:00

  报价单

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• 纸箱抗压机解决方案及实验步骤

  纸箱抗压机解决方案及实验步骤[详细]

  2016-04-23 00:00

  选购指南

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• 润滑油酸值测定实验步骤

  酸值是表示油中含有酸性物质的数量，中和1g油中的酸性物质所需的氢氧化钾的毫克数称为酸值。酸值包括油中所含有机酸和无机酸，但在大多数情况下，油中不含无机酸。因此，油酸值实际上代表油中有机酸的含量。新油所含有机酸主要为环浣酸。在贮存和使用过程中，油因氧化而生成的有机酸为脂肪酸。酸值对于新油来说是精制程度的一种标志，对于运行油来说，则是油质老化程度的一种标志，是判定油品是否能继续使用的重要指标之一。 润滑油油酸值测定实验步骤： 1、仪器安装在平稳的工作台上 2、把萃取液泵卡和软管一起压入液泵中，使之到位。（把手下端抬到刻度线处） 3、把滴定液泵卡和软管压入滴定液泵中，使之到位。（把手下端抬到刻度线处） 4、取出滴定液和萃取液的插管和瓶盖，换上随机带的具有不锈钢吸管的瓶盖，旋紧。并把仪器上的滴定和中和分别对应的插入不锈钢管、吸气瓶中加入浓碱液，防止中和液与空气反映影响测试结果。 5、把单相交流电源插入插座（注意：电源插座要有接地线，可靠接地。） 6、 取一定量的样品 把样品杯对应放入仪器内 7、 在待测样品中放入一搅拌子。 8、放入油样后进行酸值测试。 9、测试结束后，把仪[详细]

  2024-09-29 15:26

  操作手册

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• 冲击实验方法与步骤

  冲击实验方法与步骤[详细]

  2024-10-03 21:18

  专利

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• 血管生成实验步骤－实验方法完善版

  血管生成实验步骤－实验方法完善版[详细]

  2016-03-29 00:00

  实验操作

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• ELISA法测定肺炎衣原体实验步骤

  ELISA法测定肺炎衣原体实验步骤[详细]

  2015-04-08 00:00

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• 黄曲霉毒素B1的实验步骤

  Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4黄曲霉毒素B1的实验步骤、自备物品微孔板酶标仪（含450nm）、振荡器、粉碎机、微量移液器、量筒、漏斗、容量瓶、快速定性滤纸、氯化钠（分析纯）、甲醇（分析纯）、去离子水或蒸馏水。样品处理取5g粉碎的有代表性的样品，加1.25g氯化捺及250mL70%甲醇溶液，QL振荡3min，用快速定性滤纸过滤。取50μL稀释液进行分析。根据需要可以增加样品量，但甲醇溶液的量也应相应增加。实验步骤1试剂盒平衡至室温。取所需数量的板条插入微孔架，记录样品及标准的位置。2加入50μL标准品或处理好的样品到微孔，每个标准和样品必须使用新的吸头。3加入50μL抗AFB1单克隆抗体使用液到每个微孔，37℃避光孵育90min。4甩掉空中液体，用洗液洗涤微孔板3min×3次，Z后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。5每孔加入酶标物100μL，37℃避光孵育60min。6用洗液洗涤微孔板3min×3次，Z后一次应在吸水纸上拍打已完全除去孔液体。7没空加入显色液100μL（2滴），37℃避光孵育10min。8每孔加入终止液50μL（1滴），立即用酶标仪在波长450nm处测定吸光度值（OD）值。测定1目测法：未加终止液前目测。比较样品孔与标准1的微孔颜色，若浅，则为阳性；若深，则为阴性；颜色接近则需用酶标仪测吸光度值比较。2仪器法：用酶标仪在450nm波长处测定吸光度值。[详细]

  2018-11-15 10:03

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• ELISA实验原理、步骤、问题分析

  上海恒远生物科技有限公司专业供应各种属elisa试剂盒，提供免费代测服务，保证实验结果客观真实性。我公司对试剂盒质量1**%保证，若存在质量问题，我们无条件包退换。若需要了解试剂盒的详细信息，请来的咨询：电话：021-6052049813636351217业务QQ:1005074258何经理ELISA实验原理、步骤、ELISA问题分析ELISA实验原理酶联免疫吸附测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）原理1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度类型及步骤ELISA的主要常用类型及步骤1.间接法测抗体间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体（二抗）以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原，洗涤除去未结合的抗原及杂质。2）加稀释的样本，保温反应。样本中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体，样本中的其他成份在洗涤过程中被洗去。3）加酶标抗抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗抗体结合，从而间接记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量与样本中受检抗体的量正相关。4）加底物显色。2.双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原Z常用的方法，操作步骤如下：1）将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。2）加受检样本，保温反应。样本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。3）加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与样本中受检抗原的量相关。4）加底物显色。3.双抗原夹心法测抗体反应原理和模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体4.竞争法测抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，Z后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。ELISAQ&A如何选择合适的阳性对照?阳性对照的基本组成应该尽量与检测样本的组成一致，一般阳性对照多以含蛋白保护剂的缓冲液为基质，加入一定量的待检物质。比如，以人血清为标本的测定，阳性对照多用确定的病人血清或者以复钙人血浆为原料加入一定量标准品。如何选择合适的阴性对照?阴性对照的基本组成也应该尽量与检测样本的组成一致，**先行检测确定其中不含待检物质。比如，检测人血清标本时，阴性对照应该选择正常人血清;检测免疫动物血清中抗体效价时，阴性对照应该选择该动物的免疫前血清。如何选择Zyou化的包被条件?1.包被抗原的选择包被抗原可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。天然蛋白需经纯化才能用直接吸附法包被，对于含杂质较多的抗原可以采用间接捕获法包被（先用能够与目的抗原反应的物质如抗体直接吸附在酶标板上，再通过特异性反应使抗原固相化）。经纯化的重组蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物，由于分子量太小，往往难于直接吸附在酶标板上，一般都先使其与无关蛋白质如BSA等偶联，偶联物吸附于固相载体上。2.包被液的选择一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液，如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话，也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲液。3.包被温度的选择通常是4-8度条件下过夜或者37度保温2小时，我们强烈建议4-8度条件下包被，有利于蛋白活性的保持。4.包被浓度的选择包被的Z适浓度随固相载体和包被物的性质变化，一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml，要明确针对特定包被抗原的Z适包被浓度需要通过实验来确定。包板后需要封闭吗?应该选择什么样的封闭体系?封闭是否必要，取决于ELISA的模式及具体的实验条件。一般说来，双抗体夹心法，只要酶标记物是高活性的，操作时洗涤彻底，不经封闭也可得到满意的结果。而在间接法测定中，封闭一般是必不可少的。常用的封闭剂有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明胶、5%的脱脂奶粉，AbMART推荐使用5%脱脂奶粉，价廉而且封闭能力强，不过5%脱脂奶粉只适合短期内使用，不宜长期保存，所以试剂盒中较少使用。如何正确使用酶结合物?1.酶结合物的稀释液在稀释液中常加入高浓度的无关蛋白质（例如1%BSA或5%脱脂奶粉），通过竞争YZ酶结合物在固相载体上的非特异性吸附。一般还加入能够YZ蛋白质吸附于塑料表面的非离子型表面活性剂，如吐温20（0.05%的浓度较为适宜）。2.正确稀释酶结合物酶结合物的合适工作浓度需要通过预实验来确定，浓度过高易导致本底偏高，浓度过低则会导致阳性信号的减弱。酶结合物**在使用前稀释，稀释后的酶结合物不宜长期保存，因为低浓度的酶结合物极易失活。问题可能的原因解决方法阴性对照产生了阳性的结果试剂或者耗材污染更换试剂，使用一次性耗材洗板出现问题更换更强配方的洗涤液，增加洗板次数，延长洗板时间如果是在双抗体夹心法中出现，有可能是包被抗体与二抗间有交叉反应更换包被抗体或二抗使用了过多的抗体减少抗体使用量整板出现高背景二抗产生了非特异性吸附减少二抗使用量，缩短二抗反应时间显色液不新鲜使用现配的显色液显色反应时间过长没有终止控制显色反应时间，及时终止反应试剂或者耗材污染更换试剂，使用一次性耗材反应温度过高导致的非特异性吸附严格控制反应在Z适温度下进行封闭条件不佳导致的非特异性吸附更换封闭能力更强的封闭液，延长封闭时间反应信号偏低包被条件不合适提高包板浓度，延长包板时间抗原抗体反应不够充分延长反应时间，确保反应在Z适温度下进行显色液配方不恰当增加显色底物的量二抗结合不够提高二抗浓度，延长反应时间，更换效果更好的二抗梯度稀释做ELISA时产生跳孔现象酶标板叠放导致传热不均匀，各孔反应温度有差异尽量避免酶标板叠放在一起移液器稀释时未能保持连续性定期校准移液器，确保移液器的正确使用反应溶液蒸发酶标板用封条密封或者加盖洗板不均匀确定洗板机能够正常工作酶标板底有杂物或者水珠读板时清理干净酶标板底部[详细]

  2018-11-16 10:02

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• 石油产品热值检测仪的实验步骤

  汽油热值测定仪试验步骤 1、准备内筒水： 适当调节小筒水温，一般要使小筒水温低于外筒温度1K左右，这样才能到试验终点时内筒比外筒高1K左右，作标定或测发热量做平行样时。 2、准备氧弹 将饶制好的点火丝紧固在氧弹的两个点火电极上，确保接触良好,点火丝的阻值一般取4～6Ω。 3、将小筒小心放入套筒中,把氧弹平稳放入小筒的支脚上，轻轻合上上盖，使上盖上的ZX电极与氧弹弹头良好接触，否则可通过调节ZX电极螺钉露出长度来实现。调节好后，上盖压下时密封圈圆周与方箱上面应均匀接触。 4、选择试验的项目（标定或测量），输入试样数据，开始进行试验。整个试验过程参见上述相关内容。 5、试验结束，屏幕显示试验结果，当打印选项设为“自动”时，还将自动打印输出试验报告。 6、掀起上盖，取出小筒和氧弹将氧弹放气后打开进行清洗，为下一次试验作准备。[详细]

  2020-06-09 19:47

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• 蛋白盐析实验步骤及注意事项

  蛋白盐析实验步骤及注意事项[详细]

  2024-09-28 15:14

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