ELISA实验原理、步骤、问题分析

本文由 上海恒远ELISA试剂盒供应商 整理汇编

2018-11-16 10:02 6227阅读次数

收藏 评价 举报

• 分享

立即下载

参与评论

评论

登录后参与评论

登录或新用户注册

• 微信登录
• 密码登录
• 短信登录

请用手机微信扫描下方二维码
快速登录或注册新账号

微信扫码，手机电脑联动

注册登录即表示同意《仪器网服务条款》和《隐私协议》

账  号：

密  码：

图片码： 看不清？
换一张？

手机和邮箱号注册新账号>> 忘记密码？

手机号：

图片码： 看不清？
换一张？

短信码： 获取短信码

手机和邮箱号注册新账号>> 忘记密码？

更多资料

• ELISA实验原理、步骤、问题分析

  上海恒远生物科技有限公司专业供应各种属elisa试剂盒，提供免费代测服务，保证实验结果客观真实性。我公司对试剂盒质量1**%保证，若存在质量问题，我们无条件包退换。若需要了解试剂盒的详细信息，请来的咨询：电话：021-6052049813636351217业务QQ:1005074258何经理ELISA实验原理、步骤、ELISA问题分析ELISA实验原理酶联免疫吸附测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）原理1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度类型及步骤ELISA的主要常用类型及步骤1.间接法测抗体间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体（二抗）以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原，洗涤除去未结合的抗原及杂质。2）加稀释的样本，保温反应。样本中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体，样本中的其他成份在洗涤过程中被洗去。3）加酶标抗抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗抗体结合，从而间接记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量与样本中受检抗体的量正相关。4）加底物显色。2.双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原Z常用的方法，操作步骤如下：1）将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。2）加受检样本，保温反应。样本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。3）加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与样本中受检抗原的量相关。4）加底物显色。3.双抗原夹心法测抗体反应原理和模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体4.竞争法测抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，Z后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。ELISAQ&A如何选择合适的阳性对照?阳性对照的基本组成应该尽量与检测样本的组成一致，一般阳性对照多以含蛋白保护剂的缓冲液为基质，加入一定量的待检物质。比如，以人血清为标本的测定，阳性对照多用确定的病人血清或者以复钙人血浆为原料加入一定量标准品。如何选择合适的阴性对照?阴性对照的基本组成也应该尽量与检测样本的组成一致，**先行检测确定其中不含待检物质。比如，检测人血清标本时，阴性对照应该选择正常人血清;检测免疫动物血清中抗体效价时，阴性对照应该选择该动物的免疫前血清。如何选择Zyou化的包被条件?1.包被抗原的选择包被抗原可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。天然蛋白需经纯化才能用直接吸附法包被，对于含杂质较多的抗原可以采用间接捕获法包被（先用能够与目的抗原反应的物质如抗体直接吸附在酶标板上，再通过特异性反应使抗原固相化）。经纯化的重组蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物，由于分子量太小，往往难于直接吸附在酶标板上，一般都先使其与无关蛋白质如BSA等偶联，偶联物吸附于固相载体上。2.包被液的选择一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液，如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话，也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲液。3.包被温度的选择通常是4-8度条件下过夜或者37度保温2小时，我们强烈建议4-8度条件下包被，有利于蛋白活性的保持。4.包被浓度的选择包被的Z适浓度随固相载体和包被物的性质变化，一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml，要明确针对特定包被抗原的Z适包被浓度需要通过实验来确定。包板后需要封闭吗?应该选择什么样的封闭体系?封闭是否必要，取决于ELISA的模式及具体的实验条件。一般说来，双抗体夹心法，只要酶标记物是高活性的，操作时洗涤彻底，不经封闭也可得到满意的结果。而在间接法测定中，封闭一般是必不可少的。常用的封闭剂有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明胶、5%的脱脂奶粉，AbMART推荐使用5%脱脂奶粉，价廉而且封闭能力强，不过5%脱脂奶粉只适合短期内使用，不宜长期保存，所以试剂盒中较少使用。如何正确使用酶结合物?1.酶结合物的稀释液在稀释液中常加入高浓度的无关蛋白质（例如1%BSA或5%脱脂奶粉），通过竞争YZ酶结合物在固相载体上的非特异性吸附。一般还加入能够YZ蛋白质吸附于塑料表面的非离子型表面活性剂，如吐温20（0.05%的浓度较为适宜）。2.正确稀释酶结合物酶结合物的合适工作浓度需要通过预实验来确定，浓度过高易导致本底偏高，浓度过低则会导致阳性信号的减弱。酶结合物**在使用前稀释，稀释后的酶结合物不宜长期保存，因为低浓度的酶结合物极易失活。问题可能的原因解决方法阴性对照产生了阳性的结果试剂或者耗材污染更换试剂，使用一次性耗材洗板出现问题更换更强配方的洗涤液，增加洗板次数，延长洗板时间如果是在双抗体夹心法中出现，有可能是包被抗体与二抗间有交叉反应更换包被抗体或二抗使用了过多的抗体减少抗体使用量整板出现高背景二抗产生了非特异性吸附减少二抗使用量，缩短二抗反应时间显色液不新鲜使用现配的显色液显色反应时间过长没有终止控制显色反应时间，及时终止反应试剂或者耗材污染更换试剂，使用一次性耗材反应温度过高导致的非特异性吸附严格控制反应在Z适温度下进行封闭条件不佳导致的非特异性吸附更换封闭能力更强的封闭液，延长封闭时间反应信号偏低包被条件不合适提高包板浓度，延长包板时间抗原抗体反应不够充分延长反应时间，确保反应在Z适温度下进行显色液配方不恰当增加显色底物的量二抗结合不够提高二抗浓度，延长反应时间，更换效果更好的二抗梯度稀释做ELISA时产生跳孔现象酶标板叠放导致传热不均匀，各孔反应温度有差异尽量避免酶标板叠放在一起移液器稀释时未能保持连续性定期校准移液器，确保移液器的正确使用反应溶液蒸发酶标板用封条密封或者加盖洗板不均匀确定洗板机能够正常工作酶标板底有杂物或者水珠读板时清理干净酶标板底部[详细]

  2018-11-16 10:02

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA试剂盒实验原理与操作步骤

  上海劲马生物科技有限公司ELISA试剂盒实验原理与操作步骤实验方法：酶联免疫法/酶免法（ELISA）检测原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法操作步骤：具体请参照说明书（详细说明书请联系我司业务人员：021-60517348，13817140470。）注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：2-8℃2．有效期：6个月[详细]

  2024-09-11 18:03

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA实验质量控制问题

  ELISA实验质量控制问题[详细]

  2024-09-18 18:09

  其它

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 鱼甲状腺素（T4）ELISA试剂盒操作步骤及实验原理

  鱼甲状腺素（T4）ELISA试剂盒操作步骤及实验原理[详细]

  2015-04-22 00:00

  操作手册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 肿瘤细胞侵袭实验原理 材料 步骤

  一原理Matrigel是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖，铺在无聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯滤膜上，能在DMEM培养基中重建形成膜结构，这种膜结构与天然基质膜结构极为相似。滤膜孔径一般为8um，而且膜孔都被Matrigel覆盖，细胞不能自由穿过，必须分泌水解酶，并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel的滤膜，这与体内情况较为相似。铺有Martrigel的滤膜放在以BDFalcon细胞小室上下室之间，铺有Martrigel面朝向上室，在下室中加有趋化剂，如一定浓度的LN、FN或小鼠3T3条件培养液或人睾丸上皮成纤维细胞培养液，上室加入重悬的瘤细胞，具有侵袭能力的细胞在趋化剂诱导下开始穿膜运动。细胞穿膜所用的时间与Martrigel的用量有关，选择25ugMartrigell铺膜，16小时后观察结果较为合适。穿过滤膜的细胞多数粘附在滤膜下表面，可用棉签将上表面的细胞拭去，然后用乙醇固定滤膜，PE染色，在光镜下观察统计穿过Martrigel的细胞数。另外用BDFalcon细胞小室也可进行重建基质膜侵袭分析，这一方法是在BDFalcon细胞小室吊篮式上腔的滤膜上铺上30ugMartrigel，加入细胞72h后观察结果。值得注意的是，细胞在BDFalcon细胞小室中培养72小时后，有相当数量穿过滤膜的细胞不再粘附在滤膜下表面，而是脱落进人下腔溶液中．因此统计穿过基质膜的细胞数目时应把这部分细胞考虑在内。肿瘤细胞穿过重建基质膜的能力与它的体内侵袭转移能力表现出较好的相关性，可以用重建基质膜模型初筛抗侵袭药物。在上述分析中，如果不在膜上铺Martrigel而直接将8um孔径滤膜安放在侵袭腔室上下腔室之间，细胞通过变形运动穿过滤膜，用这种模型对分析细胞运动能力和药物对细胞运动能力的影响。另外，在下室中加有LN或FN或在滤膜下表面铺上LN或FN，可分析药物对肿瘤细胞的趋化性或趋固性的影响。二材料1.Matrigel基质胶（BDBIOCOAT#356234），5ml，分装成0.5ml/只10个EP管中；用时加入0.5ml的DMEM；Matrivgel在冰上维持液态，室温时可迅速凝结成胶。使用前应从-20℃转移至4℃待其自然溶化（如过夜放置），避免反复冻融。使用时需接触Matrivgel的试管、移液吸头等均应预冷于4℃；注意无菌操作；2.8ul，24孔配套细胞小室（BDFaclon#353097）；3.结晶紫染料溶液：结晶紫用甲醇配成0.5%的母液，使用浓度为0.1％，用PBS按1：4稀释后即为染色液；4.33%醋酸；1.溶液配制：（1）.溶DMEM500ml；NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）母液0.1ml（5mg）+ddH2Oupto5ml；过滤消毒，-20℃保存。NE-DMEM（-6M）NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）20.5μlDMEMUPTO100ml过滤消毒，4℃保存（2）.NE+CGRP-DMEM（-6M，100ng）NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）20.5μlCGRP-储存液50μlDMEMUPTO100ml过滤消毒，4℃保存（3）.NE+IFN-DMEM（-6M，50ng）NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）20.5μlIFN-γ（25ng/μl）25μlDMEMUPTO100ml过滤消毒，4℃保存（4）.低血清DMEM培养基（上室）（5）.20%FBS-DMEM培养基（下室）2.准备（1）.溶胶，4℃过夜（ThawMatrigelat4℃overnight.）（2）.室温下基质胶易成凝胶，所以，步骤2和3种使用试管和枪头要在试验前-20C预冷。（Matrigeltendstoformgelveryquicklyatroomtemerature,therefore,pipetsandtipsusinginsteps2and3havetobechilledatpriortoexperiements.）3.包被基底膜（冰上操作）（1）.用无血清的冷细胞培养基DMEM稀释Matrigel胶（10mg/mlto5mg/ml））（DiluteMatrigel（10mg/mlto5mg/ml）inserumfree-coldcellculturemedia（RPMI1640,EMEM,DMEM,etc）.）（2）.取100ul稀释胶加到24-well细胞小室的上室中（Put100ulofthedilutedmatrigelintoupperchamberof24-welltranswell）（3）.37℃孵育transwell至少4-5h（Incubatethetranswellat37Catleast4to5hforgel领.）4.水化基底膜用无血清培养基轻洗凝胶（Gentlywashgelledmatrigelwithwarmedserumfree-culturemedia.）5.准备细胞悬液和小室（1）.消化法从细胞培养瓶中获取细胞；（HarvestcellsfromtissuecultureflasksbyTrypsin/EDTA；）（2）.用培养基洗3遍（Washthecells3timeswithculturemedia（RPMI1640,EMEM,DMEMetc）containing1%FBS.）（3）.重选细胞，5×105cells/ml，1%FBS（Resuspendthecellsinmediacontaining1%FBSatadensityof5×105cells/ml.）（4）.上室加200ul细胞悬液（Put200ulofthecellsuspensionontothematrigel.）（5）.下室中加入600ul细胞培养基，含有5ug/mlfibronectin作为黏连亚族（lowerchamberofthetranswellisfilledwith600ulofculturemediacontaining,asanadhesivesubtrate.）6.孵育，37℃，20to24h（Incubateat37Cfor20to24h.7.染色和计数（1）.棉签擦去上室上面的非侵袭细胞（Scrapeoffnoninvadedcellsonthetopofthetranswellwithacottonswab）（2）.移去transwells，倒置，风干（Removetranswellsfrom24-wellplatesandstainedwithDiff-Quicksolution.）（3）.24孔板中加入500l含0.1%结晶紫，将小室置于其中，使膜浸没在培养基中，37℃30min后取出，PBS清洗。（4）.直径上取4个视野，照相，计数。（5）.24孔板中加入500l33%醋酸，将小室置于其中，浸膜，振荡10min，充分溶解。取出小室，24孔板于酶标仪上570nm测OD值，间接反应细胞数。小技巧：照相前一定要晾干，照相时将小室正置于载玻片上，在倒置显微镜下观察、照相。经济、实用、方便。[详细]

  2018-09-02 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA法测定肺炎衣原体实验步骤

  ELISA法测定肺炎衣原体实验步骤[详细]

  2015-04-08 00:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA的概念、原理、操作步骤

  ELISA的概念、原理、操作步骤ELISA是酶联接免疫吸附剂测定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。　　（一）　原理　　ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的GX催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法（图a）、用于检测抗原的双抗体夹心法（图b）以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。　　（二）　操作步骤方法一　用于检测未知抗原的双抗体夹心法:　　1.　包被：用0.05MPH9.碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。　　2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。　　3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。　　4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。　　5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。　　6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。　　方法二　用于检测未知抗体的间接法：　　　1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。2、次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。同时做空白、阴性及阳性孔对照于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,Z后一遍用DDW（超纯水）洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。3.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。4.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。5.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。（三）　试剂器材　　1.　试剂　　（1）　包被缓冲液（PH9.60.05M碳酸盐缓冲液）:　　　　NaCO31.59克　NaHCO3　2.93克　　加蒸馏水至1000ml　　（2）　洗涤缓冲液（PH7.4PBS）：0.15M　KH2PO40.2克　Na2HPO412H2O　2.9克　NaCl8.0克KCl0.2克Tween-200.05％0.5ml加蒸馏水至1000ml　　（3）　稀释液:牛血清白蛋白（BSA）0.1克　加洗涤缓冲液至100ml　或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10％使用。　　（4）　终止液（2MH2SO4）：蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98％）21.7ml。　　（5）　底物缓冲液（PH5.0磷酸柠檬酸）:0.2MNa2HPO4（28.4克／L）25.7ml　0.1M柠檬酸（19.2克／L）24.3ml　加蒸馏水50ml。　　（6）　TMB（四甲基联苯胺）使用液:TMB（10mg／5ml无水乙醇）0.5ml底物缓冲液（PH5.5）10ml0.75％H2O2　32μl　　（7）　ABTS使用液:ABTS　0.5mg　底物缓冲液（PH5.5）1ml　3％H2O2　2μl　　（8）　抗原、抗体和酶标记抗体。　　（9）　正常人血清和阳性对照血清。　　2.　器材:　　（1）　聚苯乙烯塑料板（简称酶标板）40孔或96孔，ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。　　（2）　小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。　　（3）　4℃冰箱，37℃孵育箱。（四）　注意事项　　1.　正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。　　2.　在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:　　（1）　固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。　　（2）包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的Z适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值Zda而蛋白量Z少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。　　（3）　酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。　　（4）　酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。ELISA相关仪器试剂设备酶标仪洗板机化学发光检测仪ELISA检测试剂盒ELISPOT检测ELISA试剂盒抗体酶标板[详细]

  2018-11-15 10:03

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 大鼠多巴胺ELISA检测试剂盒实验步骤

  大鼠多巴胺ELISA检测试剂盒实验步骤[详细]

  2015-04-21 00:00

  操作手册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 纺织品垂直燃烧试验仪实验原理及试验步骤

  纺织品垂直燃烧试验仪实验原理及试验步骤[详细]

  2016-05-24 00:00

  标准

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA原理（实验条件、技术要点）

  ELISA原理（实验条件、技术要点）实验条件和技术要点：酶联免疫吸附测定（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,简称ELISA）与免疫酶测定等名称所指的内容是不相同的，ELISA的内容专指固相吸附技术和免疫酶标抗体（或抗原）技术相结合的一种方法，它是将抗原或抗体包被在固相支持物（或称载体上），然后再进行免疫反应，形成酶标记的抗原抗体复合物，反应完毕，借助底物显示特异结合的标记抗体（或抗原）上的酶活性，用酶与底物反应后生成的有色产物进行光密度测定，达到抗原或抗体定量的目的。在应用ELISA时，首先要清楚下面内容：1，是检测抗体还是抗原？2，检测的结果是定性还是定量？3，是否需要检测特异抗体的类型？4，所用抗体/单克隆抗体的亲和力怎样？(1)检测抗原Z常用于检测抗原的方法是非竞争性的双抗体夹心法，其次是竞争法。但竞争法在具体实验中有些困难，特别是检测微生物的抗原，因为需要标记抗原，这对于某些抗原是很难做到的，甚至是不可能的。另外在竞争法中，酶标记的抗原与标本直接混合在一起，许多标本中含有酶YZ剂或蛋白A样物质，可影响ELISA的结果。(2)检测抗体检测抗体种类常用的方法是检测抗体种类的捕获法，这个方法常用于检测特异性IgG、IgA和IgM.。这个方法的**步是捕获所需要检测的一个种类的抗体，接下来是检测捕获的抗体是否是特异性抗原的抗体。间接ELISA在检测IgG时比较简单，但不适用于检测其他种类的抗体，因为血清中如果有特异IgG存在将与IgM或IgA等竞争结合抗原。竞争法检测抗体有两种方法：一种是将标记的抗体和标本同时加入反应孔内，但标记的抗体和标本中的抗体必须是结合抗原的不同决定簇；另一种是先加标本，冲洗后再加标记的抗体。竞争法检测抗体比间接法容易判断结果，并且比较敏感和特异。不论选择哪种方法，ELISA都包括6个步骤：1，抗原或抗体吸附于固相；2.加标本和试剂；3，孵育和冲洗；4，加酶标抗原或抗体；5，加适当的底物；6，检测和分析结果。虽然ELISA法在理论上十分简单，但每一步都有要注意的事项。不论是新设计的ELISA还是沿用其他ELISA方法都有以下几方面技术要点：固相载体的选择和试剂的制备，反应条件和操作的标准化。酶标记抗原竞争法利用混合的未标记抗原和酶标记抗原相互竞争抗体上的结合点，从而进行抗原的定量。未标记抗原的量越大，则酶标记抗原和抗体的结合就越受到YZ。但是竞争法在实验时比较复杂，有时在抗原混合液与相应抗体孵育后，在测定游离抗原与抗体相结合抗原的活性以前，要先进行盐析或有机溶剂沉淀或第二抗体沉淀等方法把两种不同存在形态的抗原分开。并且在加入底物后，容易产生血清色的物质。因此，每次测定时都需做空白对照。由于这些缺点，酶标记抗原竞争法使用不多。促销期间有精美礼品赠送还可以享受免费代测服务。您只需要把标本寄给我们，一星期左右就可以出实验数据。欢迎购买我公司的ELISA试剂盒，我们承诺试剂盒有质量问题包退包换。上海研谨生物公司对外承接RT-PCR技术服务、细胞培养技术服务、原位杂交技术服务、免疫沉淀技术服务、WesternBlotting技术服务、动物模型构建服务、SCI论文服务、PCR实验服务，并为广大科研用户提供各种高品质的试剂和服务，如细胞、血清、Elisa试剂盒、质粒提取试剂盒、DNA产物纯化试剂盒、病毒RNA提取试剂盒、PCR等产品，针对以上各项服务，我们均有具有丰富服务经验和深厚专业背景的人员团队为您提供技术服务和支持。[详细]

  2018-09-04 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 小鼠P物质（SP）ELISA分析检测试剂盒实验原理

  小鼠P物质（SP）ELISA分析检测试剂盒实验原理[详细]

  2024-09-30 06:11

  安装说明

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• NADH氧化酶酶联免疫分析实验原理

  使用目的：本试剂盒用于测定微生物样本中NADH氧化酶含量。NADH氧化酶酶联免疫分析实验原理实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中NADH氧化酶水平。用纯化的NADH氧化酶抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入NADH氧化酶，再与HRP标记的NADH氧化酶抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的NADH氧化酶呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中NADH氧化酶浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（32pg/mL）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。NADH氧化酶酶联免疫分析实验原理操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。16pg/mL5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液8pg/mL4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液4pg/mL3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液2pg/mL2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液1pg/mL1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液?2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。NADH氧化酶酶联免疫分析实验原理注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]

  2018-09-19 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 白细胞介素1（IL-1）实验原理分析

  白细胞介素1（IL-1）实验原理分析实验原理：广锐生物-国内高、优Elisa试剂盒供应商本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素-1（IL-1）水平。用纯化的人白细胞介素-1（IL-1）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-1（IL-1），再与HRP标记的白细胞介素-1（IL-1）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素-1（IL-1）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白细胞介素-1（IL-1）含量。白细胞介素1（IL-1）实验原理分析试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：180ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分2钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。[详细]

  2018-10-23 10:30

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 酵母双杂交的实验步骤和技巧分析

  LexA酵母双杂交系统简介一、LexA酵母双杂交系统的设计原理报告质粒p8op-LacZ的GAL4UAS编码序列被完全去除，因此在缺乏LexA融合激活剂的情况下，报告基因LacZ的转录活性为零，该基因的筛选标志为URA3，可以作为有自主复制能力的质粒存在于酵母EGY48菌株中，也可以被整合到EGY48基因组DNA上。质粒pLexA的筛选标志为HIS3，在双杂交系统中用于表达DNA-BD（202个氨基酸残基组成的LexA蛋白）与目标蛋白（钓饵，Bait）的融合蛋白，该融合体的表达受酵母强启动子ADH1的调控，选择与报告基因的操纵子LexA×8结合。质粒pB42AD的筛选标志为TRP1，在其供外源基因插入的多克隆位点（EcoRI与XhoI）上游，含有SV40核定位（SV40nuclearlocalization）、HA（血凝素）及AD（来自于E.coli的88个氨基酸残基组成的B42蛋白）等几种编码序列，共同组成可以启动报告基因转录表达的激活成份。在酵母EGY48的基因组中还整合有另一个报告基因Leu，它与LacZ报告基因具有相同的操纵子-LexA，但两者启动子不同。根据双杂交系统的原理，如果某一复合物同时具有DNA-BD和AD的活性，即可激活报告基因的转录和表达。分别将待测蛋白X、Y的编码序列插入pLexA质粒载体和pB42AD质粒载体的多克隆位点中，然后共同转入含有报告基因的酵母菌株，如果蛋白X与Y能相互作用，则启动报告基因的转录和表达，通过检测报告基因的表达情况，就可以间接反映蛋白X、Y是否具有相互作用以及作用的强弱。如果将蛋白Y换为取自组织或血液的cDNA文库，则可用X从该文库中筛选出能与其相互作用的蛋白，并且可以获得编码这些蛋白的cDNA。二、商品化酵母双杂交系统的组成1.载体质粒：pLexA、pB42AD、p8op-LacZ、pB42AD-DNA文库2.酵母菌株：EGY48、EGY48（p8op-LacZ）、YM4271（EGY48的伴侣菌株）3.大肠杆菌菌株：E.coliKC8株4.对照质粒：质粒用途pLexA-53，pB42AD-T阳性对照pLexA-Pos（LexA/GAL4AD融合蛋白〕阳性对照pLexA-Lam（LaminC蛋白少与其它蛋白相互作用）假阳性检测质粒5.引物：pLexA测序引物及pB42AD测序引物。三、酵母双杂交实验的基本流程1.将报告基因p8op-LacZ转化酵母EGY48菌株，用培养基SD/-Ura筛选。2.同时构建或扩增DNA文库，并纯化足够的质粒以转化酵母细胞。3.构建DNA-BD/靶蛋白质粒pLexA-X，作为钓饵（bait）。4.将上述钓饵质粒pLexA-X转化EGY48（p8op-LacZ）细胞株，用SD/-His/-Ura筛选;并用固体诱导培养基SD/Gal/Raf/-His/-Ura检测此DNA-BD/靶蛋白是否具有直接激活报告基因的活性，以及对酵母细胞是否具有杀伤毒性。转化质粒选择培养基克隆生长情况说明（含有Gal/Raf）pLexA-PosSD/-His，-Ura蓝阳性对照pLexASD/-His，-Ura白阴性对照PlexA-XSD/-His，-Ura白没有直接激活活性PlexA-XSD/-His，-Ura蓝具有直接激活活性PlexA-XSD/-His，-Ura菌落不能生长酵母细胞毒性4-1.如果pLexA-X-半乳糖苷酶的信号作用。b能够自动激活报告基因，则设法去除其激活活性部位、或者将LacZ报告基因整合入基因组，减少4-2.如果pLexA-X虽然不会自动激活报告基因，但对酵母宿主细胞有毒性，则需要与纯化的文库DNA同时转化酵母。5.如果pLexA-X既不会自动激活报告基因，也不具有毒性，则可以与纯化的文库DNA同时、或顺序转化酵母细胞，并检测质粒转化效率。转化质粒SD固体培养基LacZ表型对照1pLexA-PosGal/Raf/-His/-Ura蓝对照2pLexA-53Gal/Raf/-His/-Trp/-Ura/-Leu蓝+pB42AD-T实验pLexA-XGal/Raf/-His/-Trp/-Ura/-Leu待测+pB42AD-文库5-1.用SD/-His/-Trp/-Ura培养基选择阳性共转化子，并扩增，使宿主细胞中的质粒在诱导前达到Zda拷贝数。-半乳糖苷酶无表达。b5-2.上述重组子转至含X-gal的固体诱导培养基SD/Gal/Raf/-His/-Trp/-Ura/-Leu，观察LacZ及Leu报告基因的表达情形，蓝色克隆即为阳性。白色克隆为假阳性，说明Leu虽有表达，但5-3.同时用LacZ、Leu两个报告基因的目的，是为了尽可能消除实验的假阳性误差，譬如：AD融合蛋白不与目标蛋白结合，而直接与启动子序列结合域结合等情况。由于2个报告基因的启动子不同，出现上述假阳性的几率就大大减少了。5-4.将蓝色阳性克隆进行1次以上的划种，尽可能分离克隆中的多种文库质粒。6.阳性克隆的筛选6-1.随机选取50个阳性克隆，扩增、抽提酵母质粒，电转化E.coliKC8宿主菌，抽提大肠杆菌中的质粒，酶切鉴定是否具有插入片段及排除相同的文库质粒。6-2.如果重复的插入序列较多，可另取50个阳性克隆来分析。Z后得到数种片段大小不同的插入序列，再转化新的宿主细胞，检测是否仍为阳性克隆。7.用质粒自然分选法（NaturalSegregation）筛除只含有AD-文库杂合子的克隆7-1.将初步得到的阳性克隆接种SD/-Trp/-Ura液体培养基，培养1-2天，含有HIS3编码序列的BD-靶质粒在含有外源His培养基中，将以10%-20%左右的频率随机丢失。C孵育2-3天。°7-2.将上述克隆，转铺固体培养基SD/-Trp/-Ura，307-3.再挑取生长的单克隆，转入SD/-Trp/-Ura和SD/-His/-Trp/-Ura培养基中，筛选His表型缺陷的克隆，即得到只含有AD-文库杂合子的重组子。7-4.将His表型缺陷的克隆转化固体诱导培养基SD/Gal/Raf/-Trp/-Ura，以验证AD-文库能否直接激活报告基因的表达，弃去阳性克隆，保留阴性克隆。8.酵母杂合试验（YeastMating）确定真阳性克隆如下表所示，在酵母EGY48及其对应的YM4271宿主细胞中分别转入相应的质粒或文库DNA，通过杂合实验确筛选pLexA-靶DNA与pB42AD-文库确实具有相互作用的真阳性克隆。质粒1（inYM4271）质粒2（inEGY48）LacZ表型Leu表型pLexApB42AD白不能生长pLexA-靶DNApB42AD白不能生长pLexApB42AD-文库白不能生长pLexA-靶DNApB42AD-文库蓝真阳性pLexA-LampB42AD-文库白不能生长9.阳性克隆的进一步筛选和确证9-1.扩增初步确定的阳性克隆，抽提酵母DNA。该DNA为混合成份，既含有酵母基因组DNA，也含有3种转化的质粒DNA。9-2.将上述DNA电转化E.coliKC8宿主菌。由于在大肠杆菌中，具有不同复制起始调控序列的质粒不相容;同时利用营养缺陷型筛选。因此，在M9/SD/-Trp培养基上，只有含有AD-文库质粒的转化菌才能生长，将其扩增、并抽提质粒DNA，酶切鉴定。9-3.用pLexA-靶DNA与pB42AD-库DNA一一对应、共转化只含有报告基因的酵母菌EGY48中，先到SD/-His/-Trp/-Ura板扩增，并与后面的诱导板形成对照，说明报告基因的表达与诱导AD融合蛋白的表达有关，再确证LacZ、Leu报告基因的表达。9-4.扩增与靶DNA相互作用的文库DNA，进行序列分析及进一步的结构、功能研究。10.对双杂交系统阳性结果的进一步研究10-1.用不同的双杂交系统验证10-1-1.将载体pLexA与pB42AD互换后进行双杂交实验。10-1-2.选择不同的双杂交系统，如：以GAL4转录激活子为基础的双杂交系统。10-1-3.将文库质粒移码突变后，再与靶质粒作用，报告基因是否仍能被激活。-半乳糖苷酶水平，比较作用强度变化。b10-1-4.去除或突变特定结合位点，定量检测10-2.用试剂盒提供的引物测定插入片段的DNA序列，证明其编码区域。10-3.用其它的检测方法，如：亲和色谱法或免疫共沉淀法来证明双杂交系统筛选的蛋白之间的具有相互作用。10-4.进一步研究靶蛋白与筛选蛋白之间的功能关系构建于AD载体的cDNA文库的扩增1.自-80℃冰箱取出含有cDNA文库的甘油菌，置于冰浴中缓慢化冻。2.用新鲜的LB培养液在1.5ml离心管中将上述甘油菌1:106和1:108稀释。lml加入90m3.取稀释菌液各1090mm）;37℃倒置培养过夜或30℃培养24-36hr，计数平板上单克隆菌落数。fLB培养液在1.5ml离心管中振荡混匀，涂布LB/Amp平板（4.确定待扩增的cDNA文库滴度（cfu/ml）=克隆数×108（1:106稀释）或克隆数×1010（1:108稀释）。5.按照>150mm），共100块;37℃倒置培养过夜。f2-4×104cfu/平板的浓度，涂布LB/Amp平板（6.在超净工作台上，在所有生长菌落的平板上加适量LB培养液，将菌落刮下，转入2000mlLB/Amp培养液中，37℃振荡培养2-4hr。7.留取适量培养菌液以50%无菌甘油稀释至25%终浓度，分装，保存于-80℃。8.其余培养菌液离心8000xg×10min，4℃收集细菌;用质粒DNA纯化试剂盒大量抽提质粒DNA。LB液体培养基，121℃，15lb/in2灭菌15minA.bacto-Tryptone10.0gB.bacto-YeastExtract5.0gC.NaCl10.0gD.ddH2O→1000ml*LB固体培养平板为含有1.5%琼脂（Agar）LB培养基。**LB/Amp培养基为含有Ampg/ml的LB培养基。m50-100构建于AD载体的cDNA文库的纯化1.质粒DNA提取缓冲液名称缓冲液配方g/mlRNasemP1悬浮缓冲液50mMTris-HCl（pH8.0）;10mMEDTA;100AP2裂解缓冲液200mMNaOH;1%SDSP3中和缓冲液3.0MKac（pH5.5）QBT平衡缓冲液750mMNaCl;50mMMOPS（pH7.0）;15%异丙醇;0.15%TritonX-100QC洗涤缓冲液1.0MNaCl;50mMMOPS（pH7.0）;15%异丙醇QF洗脱缓冲液1.25MNaCl;50mMTris-HCl（pH8.5）;15%异丙醇2.培养菌液离心6000xg×10min，4℃，每500ml培养物（下同）的沉淀重悬于50mlP1缓冲液。3.加入50mlP2缓冲液，倒置4-6次混匀，室温孵育5min。4.加入4℃预冷的50mlP3缓冲液，快速倒置4-6次混匀，冰浴30min（其间再倒置混匀4-6次）。5.将上述混合液再倒置混匀，离心12000xg×30min，4℃，保留上清。6.上清再离心12000xg×15min，4℃，留上清。7.将上清液上样于经35mlQBT缓冲液平衡的QIAGEN-tip层析柱。8.以100mlQC缓冲液洗涤层析柱2次。9.以35mlQF缓冲液洗脱吸附于层析柱上的DNA。10.以0.7倍体积异丙醇沉淀DNA，离心12500xg×30min，4℃，小心去除上清。11.以7ml70%乙醇洗涤沉淀DNA，离心12500xg×10min，4℃，小心去除上清。12.将沉淀的质粒DNA溶于5mlTE（pH8.0）缓冲液，转移至新的无菌离心管中，用2.5倍体积无水乙醇;1/10体积3.0MNaAc（pH5.2），于-20℃静置过夜。13.离心12500xg×20min，4℃，去除上清，沉淀用70%乙醇洗涤，超净台风干。l），保存于-20℃。mg/管（用于1次转化反应，约40m14.干燥的DNA溶于适量体积TE，定量，分装100-200构建于DNA-BD载体的目的DNA转化酵母感受态细胞1.将酵母菌EGY48（p8op-lacZ）接种于5.0mlSD/-Ura液体培养基中，缓振打散菌落，然后转入95.0mlSD/-Ura液体培养基中，30℃恒温，250rpm振荡培养16-18hr，至OD600>1.0。SD/-Ura液体培养基，115℃，10lb/in2灭菌15minA.DifcoNitrogen0.67gB.葡萄糖2.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlD.20×His5.0mlE.20×Leu5.0mlF.20×Trp5.0mlG.ddH2O→100.0ml2.将上述新鲜培养菌液接种于300mlYPD，至OD600=0.2-0.3（约50ml），30℃恒温，250rpm振荡培养至OD600=0.4-0.5（约3hr）。YPD液体培养基，115℃，10lb/in2灭菌15minA.Polypepton6.0gB.bacto-YeastExtract3.0gC.葡萄糖6.0gD.ddH2O→300ml3.室温离心5000xg×5min，弃上清;加入15-25mlddH2O重悬洗涤沉淀酵母细胞，离心弃上清，沉淀用1×TE/LiAc重悬后，即为酵母感受态细胞。4.准备下列试剂2×转化反应10×TE10×LiAc50%PEGddH2Olml/120ml15mA.1×TE/LiAc0.15ml15l/ml960ml120mB.PEG/LiAc1.20ml120lml//900mC.1×TE1.00ml1005.分装待转化的质粒DNA，振荡混匀。lmg）3-5mA.pLexA-X（0.1B.10mg/mllmSpermDNA*（0.1mg）10*新配制时水浴煮沸20min后，插入冰浴，保存于-20℃。l用1×TE/LiAc重悬的酵母感受态细胞，振荡混匀。m6.每管加入100lm7.各加入600PEG/LiAc，振荡混匀，30℃恒温，250rpm振荡培养30min。lm8.各加入70DMSO缓和倒置混匀。42℃热休克15min，迅速插入冰浴。9.室温离心13000xg×10sec，尽量弃上清;以0.3ml1×TE重悬沉淀细胞，涂布SD/-Ura，-His固体培养板，30℃倒置培养3-5天。SD/-Ura，-His固体培养基，115℃，10lb/in2灭菌15min稍冷却后铺板A.DifcoNitrogen1.34gB.葡萄糖4.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）20.0mlD.20×Leu10.0mlE.20×Trp10.0mlF.Agar4.00gG.ddH2O90-100mm）f→200.0ml铺8-10块平板（附表1.不同规模转化酵母感受态细胞SmallScale*LargeScaleLibraryScale转化反应2011（1）SD液体培养基扩增酵母菌100ml100ml300ml（2）YPD液体培养基扩增酵母菌300mla300mla1000mla（3）TE或ddH2O洗涤酵母细胞15mlc25-50mlb500mla（4）准备A.1×TE/LiAc缓冲液1.5mld1.0mld8.0mlcB.PEG/LiAc缓冲液12.0mlc6.0mlc100.0mlbC.1×TE缓冲液6.0mlc10.0mlc10.0mlc（5）分装A.DNA-BDvectorgd×20/0.2-1.0mgcm0.1gd0.1-0.5mgmg×2010-50mB.ADvector0.1C.l2.0mlml×20200mSpermDNA（10mg/ml）101×TE/LiAc重悬感受态细胞1.5mlc1.0mlc8.0mlbl×201.0ml8.0mlm酵母感受态细胞100（7）PEG/LiAc缓冲液0.6ml×206.0ml60.0mll7.0mlml×20700mDMSO70（9）室温离心后弃上清13000xg×10sec2000xg×5min2000xg×5min（10）1×TE重悬感受态细胞0.3ml×206.0ml10.0ml150mm×50f150mm×30f90mm×20f铺固体选择培养基平板注:*即为“构建于DNA-BD载体的目的DNA转化酵母感受态细胞”**在不同容积的无菌离心管中进行，a:300或500ml;b:50ml;c:15ml;d:1.5ml文库cDNA转化含有DNA-BD载体的酵母感受态细胞1.以生长于SD/-Ura，-His固体培养板上的含有构建于DNA-BD载体的目的DNA及报告基因（p8op-lacZ）的酵母菌EGY48作为宿主菌，制备酵母感受态细胞。2.将酵母宿主菌接种于5.0mlSD/-Ura，-His液体培养基中，缓振打散菌落，然后转入95.0mlSD/-Ura，-His液体培养基中，30℃恒温，250rpm振荡培养16-18hr，至OD600>1.0。SD/-Ura，-His液体培养基，115℃，10lb/in2灭菌15minA.DifcoNitrogen0.67gB.葡萄糖2.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlD.20×Leu5.0mlE.20×Trp5.0mlF.ddH2O→100.0ml3.将上述新鲜培养菌液接种于300mlYPD，至OD600=0.2-0.3（约50ml），30℃恒温，250rpm振荡培养至OD600=0.4-0.5（约3hr）。YPD液体培养基，115℃，10lb/in2灭菌15minA.Polypepton6.0gB.bacto-YeastExtract3.0gC.葡萄糖6.0gD.ddH2O→300ml4.室温离心5000xg×5min，弃上清;加入15-25mlddH2O重悬洗涤沉淀酵母细胞，离心弃上清，沉淀用1×TE/LiAc重悬后，即为酵母感受态细胞。5.准备下列试剂1×转化反应10×TE10×LiAc50%PEGddH2Olml/800ml100mA.1×TE/LiAc1.0ml100l4.8ml/ml600mB.PEG/LiAc6.0ml600C.1×TE10.0ml1.0ml//9.0ml6.取1.0ml用1×TE/LiAc重悬的酵母感受态细胞，加入下列成份，振荡混匀。lmg）40mA.pB42AD-Library（50-100B.10mg/mllmHerringDNA*（2.0mg）200*新配制时水浴煮沸20min后，插入冰浴，保存于-20℃。7.加入6.0mlPEG/LiAc，振荡混匀，30℃恒温，250rpm振荡培养30min。lm8.加入700DMSO缓和倒置混匀。42℃热休克15min，迅速插入冰浴。9.室温离心2000xg×5min，尽量弃上清。10.以6.0ml100mm，每稀释度各×2），30℃倒置培养3-5天，确定转化效率在2×106cfu以上有效。fl稀释不同倍数，涂布SD/-Ura，-His，-Trp固体培养板（m1×TE重悬沉淀细胞，取10150mm×30），30℃倒置培养3-5天。fl涂布SD/-Ura，-His，-Trp固体培养板（m11.按每板200SD/-Ura，-His，-Trp固体培养基，115℃，10lb/in2灭菌15min稍冷却后铺板A.DifcoNitrogen13.40gB.葡萄糖40.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）200.0mlD.20×Leu100.0mlE.Agar40.00gF.ddH2O150mm）f→2000.0ml铺30块平板（12.在超净工作台上，在所有生长菌落的平板上各加5mlTE（pH7.0）缓冲液，将菌落刮下。13.离心弃上清，加入10-20mlTE缓冲液重悬沉淀菌，加入等体积的无菌65%甘油-MgSO4缓冲液，混匀，分装1.0ml/管，保存于4℃1周或-80℃1年以上。65%甘油-MgSO4缓冲液:65%甘油;100mMMgSO4;25mMTris-HCl（pH8.0）A.甘油65.00mlB.MgSO47H2O2.465gC.2.0MTris-HCl（pH8.0）1.25mlD.ddH2O→100.00ml酵母双杂合系统阳性克隆的筛选1.经过选择培养基筛选的含有DNA-BD载体、文库DNA及报告基因的酵母感受态细胞，用无菌TE稀释至1:104、1:106和1:108等不同浓度。90mm），30℃倒置培养3-5天，计数平板上单克隆菌落数。fl，涂布SD/-Ura，-His，-Trp固体培养板（m2.取上述稀释菌液各1003.确定待进一步鉴定的酵母菌滴度（cfu/ml）=克隆数×105（1:104稀释）、克隆数×107（1:106稀释）或克隆数×109（1:108稀释）。4.按照以前实验确定的文库转化效率的5-10倍的总量、0.5-2×106cfu/平板的菌量，涂布SD/Gal/Raf/-Ura，-His，-Trp，-Leu固体诱导培养板，30℃倒置培养3-5天。5.挑取显蓝色的菌落，再接种于SD/-Ura，-His，-Trp固体培养基以及SD/Gal/Raf/-Ura，-His，-Trp，-Leu固体诱导培养基，以进一步确证。SD/Gal/Raf/-Ura，-His，-Trp，-Leu固体诱导培养基A.SD/Gal/Raf3.79gB.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlC.Agar2.00gD.ddH2O→85.0ml灭菌（115℃，10lb/in2）15min，冷却至50℃，加入下列成份后铺板E.10×BU10.0mlF.20mg/mlX-gal0.4ml90-100mm）f铺5-6块平板（10×BU缓冲液，121℃，15lb/in2灭菌15minA.Na2HPO412H2O9.30gB.NaH2PO42H2O3.90gC.ddH2O→100.0ml20mg/mlX-GalA.X-Gal40mgB.DMF2ml酵母双杂合系统阳性克隆的鉴定-酵母质粒DNA的提取1.挑取经过酵母选择/诱导培养基初步鉴定的酵母单菌落，接种于5.0-10.0mlSD/-Trp液体培养基，30℃恒温，250rpm振荡培养20hr。SD/-Trp液体培养基，115℃，10lb/in2灭菌15minA.DifcoNitrogen0.67gB.葡萄糖2.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlD.20×His5.0mlE.20×Leu5.0mlF.20×Ura5.0mlG.ddH2O→100.0ml2.室温离心5000xg×1min，弃上清，收菌。l酵母裂解液，振荡重悬沉淀酵母菌。m3.加入200酵母裂解液:2%TritonX-100;1%SDS;100mMNaCl;10mMTris-HCl（pH8.0）;1mMEDTAA.10%TritonX-10020.0mlB.10%SDS10.0mlC.NaCl0.58gD.Tris0.12gE.EDTANa22H2O0.04gF.1.0MHCl调pH8.0G.ddH2O→100.0ml4.加入下列试剂，充分振荡5min;液氮冻存10min，室温复融;再充分振荡5min。A.经酸处理的玻璃珠（Sigma）0.20gB.苯酚:氯仿:异戊醇（25:24:1）0.2ml5.室温离心12000xg×10min，将上清转移至新的1.5ml离心管中，加入下列试剂，于-70℃冻存30-60min。A.3MNaAc（1/10lmV）20lmB.无水乙醇（2.5V）5006.离心12500xg×10min，4℃，弃上清;70%乙醇洗涤沉淀，于37℃烘箱或超净台干燥DNA;将干燥的沉淀DNA重溶于l无菌ddH2O中，保存于-20℃。m20-30酵母双杂合系统阳性克隆的鉴定-酵母质粒DNA电转化大肠杆菌1.在冰浴条件下，取待转化DNAl感受态细胞中，混匀。mg），加入100ml（5pg-0.5m1.0WF，200m2.将上述混合液加入间距0.1cm的样品杯中，电转化（1.8kV，25。3.迅速加入1ml新鲜的LB培养液，混匀，转入1.5ml离心管中，37℃恒温，150rpm振荡孵育30-60min。4.将上述转化反应液涂布M9/DO（-Trp）固体培养板，37℃倒置培养至单菌落出现（16-22hr）。5.按常规方法扩增上述阳性转化菌，碱裂解法少量抽提质粒DNA，酶切筛选AD载体上含有插入片段的阳性克隆，保存其于25%甘油，待进一步验证。M9/DO-Trp固体培养基，115℃，10lb/in2灭菌15minA.葡萄糖1.2gB.Agar6.0gC.5×M9缓冲液60mlD.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）30mlE.20×His15mlF.20×Leu15mlG.20×Ura15mlH.ddH2O165ml冷却至50℃左右，加入下列成份，混匀铺板I.1.0MThiamine-HCl（Vit.B1）0.3mlJ.100mg/mlAmp0.3ml90-100mm）f铺10-15块平板（大肠杆菌感受态细胞的制备（电转化）1.挑取LB固体培养基上生长的E.coliKC8单菌落，接种于5mlLB液体培养基中，37℃恒温，250rpm振荡培养过夜（约12-14hr）。2.将2.5ml新鲜菌液接种于500mlSOB培养液中，37℃恒温，250rpm振荡培养至OD600=0.5-0.6（约2.5-3hr）。SOB液体培养基，115℃，10lb/in2灭菌15minA.bacto-Tryptone10.00gB.bacto-YeastExtract2.50gC.NaCl0.25gD.KCl0.09gE.MgCl26H2O1.02gF.ddH2O→500.0ml3.将培养菌液收集于离心管中，冰水浴15-20min。4.离心6000xg×10min，4℃，弃尽上清;以5ml预冷的无菌ddH2O重悬沉淀菌;再加入500ml预冷的无菌ddH2O洗涤细菌。5.重复上述步骤1次，以充分去除培养基中残余的盐离子成份。6.用40-50ml预冷的无菌10%甘油重悬沉淀细菌，转移至50ml无菌离心管中;离心6000xg×10min，4℃，弃尽上清;重复此步骤1次。7.以等体积（约1.5-2.0ml）预冷的无菌10%甘油重悬上述沉淀的感受态细胞，分装0.5ml/管（5-6次转化反应），保存于-80℃备用。酵母双杂合系统阳性克隆的确证1.以含有报告基因（p8op-lacZ）的酵母菌EGY48作为转化宿主菌。2.将酵母宿主菌接种于5.0mlSD/-Ura液体培养基中，缓振打散菌落，然后转入95.0mlSD/-Ura液体培养基中，30℃恒温，250rpm振荡培养16-18hr，至OD600>1.0。SD/-Ura液体培养基，115℃，10lb/in2灭菌15minA.DifcoNitrogen0.67gB.葡萄糖2.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlD.20×His5.0mlE.20×Leu5.0mlF.20×Trp5.0mlG.ddH2O→100.0ml3.将上述新鲜培养菌液接种于300mlYPD，至OD600=0.2-0.3（约50ml），30℃恒温，250rpm振荡培养至OD600=0.4-0.5（约3hr）。YPD液体培养基，115℃，10lb/in2灭菌15minA.Polypepton6.0gB.bacto-YeastExtract3.0gC.葡萄糖6.0gD.ddH2O→300ml4.室温离心5000xg×5min，弃上清;加入15-25mlddH2O重悬洗涤沉淀酵母细胞，离心弃上清，沉淀用1×TE/LiAc重悬后，即为酵母感受态细胞。5.准备下列试剂20×转化反应10×TE10×LiAc50%PEGddH2Ol/1.2mlml150mA.1×TE/LiAc1.5ml150B.PEG/LiAc12.0ml1.2ml1.2ml9.6ml/C.1×TE10.0ml1.0ml//9.0ml6.分装待转化的质粒DNA。A.pLexAlmg）3-5morpLexA-X（0.1lmg）3-5mB.pB42AD-Y（0.1C.10mg/mlSpermlmDNA*（0.1mg）10*新配制时水浴煮沸20min后，插入冰浴，保存于-20℃。l用1×TE/LiAc重悬的酵母感受态细胞，振荡混匀。m7.每管加入100lm8.各加入600PEG/LiAc，振荡混匀，30℃恒温，250rpm振荡培养30min。lm9.各加入70DMSO缓和倒置混匀。42℃热休克15min，迅速插入冰浴。10.室温离心13000xg×10sec，尽量弃上清;以0.3ml1×TE重悬沉淀细胞，涂布SD/-Ura，-His，-Trp固体培养板，30℃倒置培养3-5天。SD/-Ura，-His，-Trp固体培养基，115℃，10lb/in2灭菌15min稍冷却后铺板A.DifcoNitrogen3.35gB.葡萄糖10.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）50.0mlD.20×Leu25.0mlE.Agar10.00gF.ddH2O→500.0ml90-100mm）f铺20-25块平板（11.挑取上述固体培养基上生长的含有目的DNA（X）的pLexA-X（+）或空载pLexA（-）单菌落，分别接种SD/Gal/Raf/-Ura，-His，-Trp，-Leu固体诱导培养板，30℃倒置培养3-5天。SD/Gal/Raf/-Ura，-His，-Trp，-Leu固体诱导培养基A.SD/Gal/Raf3.79gB.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlC.Agar2.00gD.ddH2O→85.0ml灭菌（115℃，10lb/in2）15min，冷却至50℃，加入下列成份后铺板E.10×BU10.0mlF.20mg/mlX-gal0.4ml90-100mm）f铺5-6块平板（12.选择含有pLexA-X显蓝色，而相应的不含有插入DNA的空载pLexA显白色的克隆，扩增其在E.coliKC8中的甘油菌，按常规抽提质粒DNA，进行序列分析。10×DO（-His，-Trp，-Leu，-Ura）为不含His，Trp，Leu，Ura等成份的10×Dropout溶液。每1000ml溶液中含有下列成份，用ddH2O配制后保存于4℃。（1）L-IsoleucineL-异亮氨酸300mg（2）L-ValineL-缬氨酸1500mg（3）Adenine腺嘌呤200mg（4）L-ArginineHClL-精氨酸200mg（5）L-LysineHClL-赖氨酸盐酸盐300mgL-MethionineL-甲硫氨酸200mg（7）L-PhenylalanineL-苯丙氨酸500mgL-ThreonineL-苏氨酸2000mg（9）L-TyrosineL-酪氨酸300mg20×氨基酸储存液每100ml溶液中分别含有下列成份，配制后保存于4℃。20×HisL-HistidineL-组氨酸40mg20×TrpL-TryptophanL-色氨酸40mg20×LeuL-LeucineL-白氨酸200mg20×UraUracil尿嘧啶40mg酵母转化缓冲液:缓冲液体积缓冲液配制10×TE100mlTris1.21g;EDTANa22H2O0.37g;ddH2O80ml;盐酸调pH7.5;ddH2O定容10×LiAc100mlLiAc2H2O10.20g;ddH2O50ml，冰醋酸调pH7.5;ddH2O定容50%PEG100mlPEG335050.0g;ddH2O定容其它缓冲液:缓冲液体积缓冲液配制TE1000mlTris1.21g;EDTANa22H2O0.37g;ddH2O800ml;盐酸调pH;ddH2O定容STE1000mlNaCl5.84g;Tris1.21g;EDTANa22H2O0.37g;ddH2O800ml;盐酸调pH8.0;ddH2O定容[详细]

  2018-10-12 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 酶联免疫法实验步骤

  酶联免疫法实验步骤[详细]

  2013-11-11 00:00

  应用文章

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 加A试剂盒实验步骤

  利用具有3’-5’外切酶活性的高保真DNa聚合酶，如Pfu等进行PCR扩增时，其PCR产物为不带A尾的平末端DNa片段，如想将该片段克隆到T载体上，需要先利用A-Tai领Enzyme在平末端片段后加上A尾后才能与T载体上3’末端的T碱基互补连接。本产品是在平末端DNa片段的3’末端添加一个A尾，使平末端的DNa片段进行TA克隆成为可能。本试剂盒提供了加A尾需要的所有成分，可以在30分钟完成整个过程。与平末端DNa片段克隆相比，TA克隆具有较高的克隆效率，可大大提高实验成功率。[详细]

  2018-09-04 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 石油产品灰分测定仪实验步骤

  1 准备工作 1.1 将稀盐酸（1：4）注入所用的瓷坩埚（或瓷蒸发皿）内煮沸几分钟，用蒸馏水洗涤。烘干后放在高温炉中在775±25℃温度下煅烧至少10分钟，取出在空气中冷却3分钟，移入干燥器中。冷却至室温后注，进行称量，称准至0.0001克。 重复进行煅烧、冷却及称量，直至连续两次称量间的差数不大于0.0005克为止。 注：一个干燥器中放一对坩埚为宜。放一对50毫升的坩埚，一般冷却30~45分钟可达到室温；放一对100毫升的坩埚，一般冷却45分钟到1小时可达到室温。坩埚一以冷却就应进行称量，坩埚在干燥器内停留多长时间，则其后的所有称量都应当让其在干燥器内停留同样长的时间以后才进行。 1.2 取样前将瓶中试样（其量不得多于该瓶容积的3/4）剧烈摇动均匀，要确保所取试样有真正的代表性。对粘稠的或含蜡的试样需预先加热至50～60℃。再摇动均匀后进行取样。 2实验步骤 2.1 将已经恒重的坩埚称量准确至0.1g，并以同样的准确度称入试样。根据情况，一般可取25g试样装在50ml得坩埚内进行试验。所取试样量的多少依试样灰分含量的大小而定，以所取试样能足以生成20mg的灰分为限，但[详细]

  2024-09-12 17:12

  操作手册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 鸡γ干扰素（IFN-γ）Elisa试剂盒实验原理

  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的鸡γ干扰素(IFN-γ)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素(IFN-γ)，再与HRP标记的鸡γ干扰素(IFN-γ)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡γ干扰素(IFN-γ)浓度。标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。120pg/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液60pg/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液30pg/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液15pg/ml2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液7.5pg/ml1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液[详细]

  2018-10-08 10:01

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• elisa实验原理：大肠杆菌宿主残留蛋白

  elisa实验原理：大肠杆菌宿主残留蛋白本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大肠杆菌宿主残留蛋白(E.coliP)水平。用纯化的大肠杆菌宿主残留蛋白(E.coliP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入大肠杆菌宿主残留蛋白(E.coliP)，再与HRP标记的大肠杆菌宿主残留蛋白(E.coliP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的大肠杆菌宿主残留蛋白(E.coliP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大肠杆菌宿主残留蛋白(E.coliP)浓度。[详细]

  2018-11-16 10:02

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 兔子谷胱甘肽（GSH）Elisa试剂盒实验原理

  兔子谷胱甘肽(GSH)Elisa试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔子谷胱甘肽(GSH)水平。用纯化的兔子谷胱甘肽(GSH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入谷胱甘肽(GSH)，再与HRP标记的谷胱甘肽(GSH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽(GSH)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中兔子谷胱甘肽(GSH)浓度。[详细]

  2018-11-16 10:02

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  •