ELISA常见问题

本文由 上海飞轩生物科技有限公司 整理汇编

2024-09-16 04:16 443阅读次数

收藏 评价 举报

• 分享

立即下载

参与评论

评论

登录后参与评论

登录

获取验证码

我已经阅读并接受《仪器网服务协议》

立即登录

更多资料

• ELISA常见问题

  ELISA常见问题[详细]

  2024-09-16 04:16

  应用文章

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA实验常见问题

  异常：白板结果描述：显色步骤结束后酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。原因分析：试剂已过有效期，或不同试剂盒组分混用，检查试剂的组分及批号，确认未过期以及所有组分均属对应的试剂盒。对策：不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用。整板的黄板现象可能是由于错加其他试剂造成，如同时操作两对半试剂时，测HbsAb板用于测HBsAg等；实验前检查试剂的组分及批号，确认所有组分均属于对应的试剂盒。如盛标本的试管四周常有血痂，易脱落，应远离酶标板。Elisa试剂盒超过有效期的产品可能会产生很弱的信号；试剂盒没有按规定进行留存，受高温影响；实验前检查试剂的组分及批号，确认试剂未过期。孵育温度应控制在37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作，保温期内不宜多开门，以免影响保温。花板，一般是由于临床标本的收集、处理和留存方法不当造成，放置时间（自然放置1~2h）及离心转（3000r/min）、离心时间（15min）应引起注意。试剂、样品用前未平衡至室温从低温冰箱中取出的试剂及样品应置室温平衡，20分钟左右。错加、漏加试剂底物、显色剂A或B严格按说明书的步骤操作，加完试剂后可观察一下液面高度是否一致，以减少漏加现象。实验结束后，阴阳性对照正常，质控正常，但临床标本感觉显色较弱，待测标本中可能不含强阳性标本，故结果可能是正常的，如有怀疑，可复检标本加入叠氮钠作为防腐剂，酶免实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂，可选用proclin、硫柳汞等其他防腐剂，阴阳性对照正常，但质控、参考品或个别弱阳性标本未能检出。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用酶标对吸头的污染以及对盛放显色剂容器的污染都易造成黄板现象；避免试剂组分间的交叉污染，确保吸头、容器的干净，显色剂在光照条件下放置过久，实验前已变蓝，显色剂A、B未使用前避光留存，孵育温度过高或孵育时间过长；孵育温度应控制在37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作。标本在一周内使用的，可存于2-8℃，如需长期留存，应置于-20℃以下留存。不要将ELISA试剂盒长时间置于常温下，按使用规定储藏。出现随机性的花板、跳孔现象样品离心不完全，反应孔内发生凝血或残留细胞成分；充分离心，3000rpm6分钟以上。仪器设定不正确，滤光片不匹配，重新设定酶标仪的参数，特别是检查滤光片是否匹配，灵敏度过高、板底高、高背景终止后，整板结果显现均一的黄色或淡黄色；或阴阳性对照、质控正常，标本阴性标本，OD值过高。特别是洗涤时每孔未注满洗液，易造成花板黄板现象，严格按说明书要求洗板。洗板及加样过程中，酶标受污染失活失去催化显色剂显色的能力，确认盛酶标的容器不含酶YZ剂如叠氮钠等，确认配制洗液的容器已洗干净。加样时交叉污染；加标本时尽量避免交叉污染。[详细]

  2018-09-27 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA试剂盒常见问题及对策

  ELISA试剂盒常见问题及对策[详细]

  2015-08-25 00:00

  选购指南

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA中常见问题及解决方法

  下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法：1.选择试剂选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。2.加样可能原因：1）血清或血浆标本分离不好即进行加样；2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）；3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。更多资料请下载文件小鼠elisa试剂盒[详细]

  2018-10-08 10:01

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA实验操作中常见问题分析

  ELISA实验操作中常见问题分析：由于ELISA（酶联免疫试验）具有灵敏度较高、特异性好的特点，已广泛应用于各种传染性疾病的筛查如肝炎、爱滋、优生优育等。虽然洗板只是ELISA实验重要环节中的一个，但作为专业的洗板机生产厂家，我们必须对影响ELISA实验结果各因素有一定的认识。优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。如不注意，就易出现白板、花板、色弱和假阳性等现象。尤其是花板现象（就是空白、阴性、阳性对照以及室内质控孔结果正常，而标本孔的OD值却明显偏高）是各个厂家洗板机调试中经常遇到的问题。现将ELISA实验操作中注意事项总结如下，以期给大家带来一些启发，以改善洗板机的安装调试水平，提高临床检测质量。小鼠elisa试剂盒更多资料请下载文件[详细]

  2018-10-08 10:01

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA操作常见问题及其解决方法

  ELISA操作常见问题ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有：①标本因素；②试剂因素；③操作因素。下面就一些常见ELISA操作过程中的问题一一分析。1．样品稀释酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应，如果血清不稀释，不可避免会产生很强的非特异性反应，出现假阳性。因此，国外检测血清抗体的试剂盒，均规定将血清稀释至适当的倍数，以降低非特异性反应，使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定，以保证试验的灵敏度和特异性。但是，有些用户未能严格按使用说明书操作，如某些产品应取10μl样品进行稀释，个别用户取5μl甚至1μl样品进行稀释，由于吸嘴上不可避免地沾有样品以及微量移液器的精度不够，因此造成样品稀释倍数不准确，检测结果出现问题。2．试剂盒平衡试剂盒中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温（约25℃），一般需在室温放置20～30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够，样品孵育时间相对缩短，ELISA反应不够充分。冬季室温低，可将试剂盒置37℃温箱20分钟。3．样品和试剂的混匀稀释前、后的样品必须充分混匀，所有试剂在加样前也须摇匀，以保证试验的均一性。4．加样在现在的ELISA商品试剂盒中，必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。5．温育温育是ELISA测定中影响测定成败Z为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。Z为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改变说明书操作，使用自己喜欢的温育时间和温育温度，这样造成一些不必要的麻烦。因为，不同试剂盒有不同的温育时间和温育温度的选择，随意更改温育时间或者温育温度将导致试验结果出现偏差。6．洗板固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来，以保证ELISA测定的特异性。洗板对于ELISA测定来说，也是极其关键的一步。洗液尽量不要溢出孔外；加洗液后要静置1分钟，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及时更换吸水纸，尤其是拍过酶标记物的吸水纸一定要弃去，否则可能影响试验结果。更多ELISA操作常见问题及其解决方法请见附件......[详细]

  2024-09-30 14:23

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA实验中常见问题的解决

  ELISA操作常见问题1．样品稀释酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应，如果血清不稀释，不可避免会产生很强的非特异性反应，出现假阳性。因此，国外检测血清抗体的试剂盒，均规定将血清稀释至适当的倍数，以降低非特异性反应，使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定，以保证试验的灵敏度和特异性。但是，有些用户未能严格按使用说明书操作，如某些产品应取10μl样品进行稀释，个别用户取5μl甚至1μl样品进行稀释，由于吸嘴上不可避免地沾有样品以及微量移液器的精度不够，因此造成样品稀释倍数不准确，检测结果出现问题。2．试剂盒平衡试剂盒中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温（约25℃），一般需在室温放置20～30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够，样品孵育时间相对缩短，ELISA反应不够充分。冬季室温低，可将试剂盒置37℃温箱20分钟。3．样品和试剂的混匀稀释前、后的样品必须充分混匀，所有试剂在加样前也须摇匀，以保证试验的均一性。4．加样在现在的ELISA商品试剂盒中，必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。5．温育温育是ELISA测定中影响测定成败Z为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。Z为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改变说明书操作，使用自己喜欢的温育时间和温育温度，这样造成一些不必要的麻烦。因为，不同试剂盒有不同的温育时间和温育温度的选择，随意更改温育时间或者温育温度将导致试验结果出现偏差。6．洗板固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来，以保证ELISA测定的特异性。洗板对于ELISA测定来说，也是极其关键的一步。洗液尽量不要溢出孔外；加洗液后要静置1分钟，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及时更换吸水纸，尤其是拍过酶标记物的吸水纸一定要弃去，否则可能影响试验结果。7．边缘效应使用96孔板的ELISA测定中，常发现有“边缘效应”，即外周孔显色较ZX孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与ZX孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可提高测定的重复性。8．显色显色一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说，显色时间过短，结果偏低；显色时间过长，空白或者非特异性显色增加。9．比色比色要注意波长的选择。以TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用，而前者比色波长为450nm，后者为492nm，滤光片需根据要求随时更换。因此，容易出现滤光片错用的问题。其次，单波长或双波长比色选择的问题。所谓的单波长比色即是通常的以对显色具有Zda吸收的波长如450nm或492nm进行比色测定；而双波长双色则酶标仪在敏感波长如450nm和非敏感波长如630nm下各测定一次，敏感波上下的吸光度测定值为样本测定酶反应特异显色的吸光度与板孔上指纹、刮痕、灰尘等脏物所致的吸光度之和；非敏感波长下测定即改变波长至一定值，使得样本测定酶反应特异显色的吸光度值为零，此时测得的吸光度即为脏物的吸光度值。Z后酶标仪给出的数值为敏感波长下的吸光度值与非常感波长下的吸光度值的差。因此，双波长比色测定具有能排除由微滴板本身、板孔内标本的非特异吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色测定吸光度的影响的优点。由于ELISA测定中单个空白孔的非特异吸收上有一定程度的不确定性，也就是说每次测定或同次测定空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度测定值，故而在ELISA测定比色时，**是使用双波长比色。综上所述，尽管ELISA测定的操作步骤非常简单，但有可能会影响测定结果的因素却较多，分布在测定操作的各步之中，尤以加样、温育和洗板为甚。为帮助大家分析查找测定中出现问题的可能原因，特对常见问题及原因归纳总结于下表。操作过程中可能出现的问题和解决方法问题可能原因解决方法显色淡，灵敏度偏低1、试剂盒在运输途中时间太长，温度太高尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温2、试剂盒未充分平衡试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃）。3、培养箱温度不足37℃注意培养箱温度，放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定，非隔水式培养箱尤其应注意4、保温时间不足校正定时钟准确定时5、洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加按说明书要求保留洗涤时间，准确记住洗涤次数6、移液器吸液量不足，吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸嘴内壁要清洁，**一次性使用7、蒸馏水水质有问题使用新鲜合格的蒸馏水8、底物作用时间不足准确定时背景深，全部呈有色,1、洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留浓缩洗液准确配制；10倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室温全部溶解后再量取稀释；充分洗涤，彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染2、样品污染样品应新鲜采集，或低温保存，防止污染3、培养箱温度超过37℃或反应时间过长调整培养箱温度，准确定时4、吸嘴重复使用，未洗净或消毒不彻底吸嘴尽可能一次性使用5、蒸馏水被污染使用新鲜蒸馏水6、酶等试剂混用不同批号试剂勿混用7、一次实验的标本量过多，加样时间太长，导致实际反应时间延长合理安排实验，避免几块酶标板同时加样重复性不佳1、样品数量多少不一，加样时间有长有短重复某一样品时，加样时间尽可能与**次接近2、保温时间不一致，洗涤条件不一致，操作人员不一致重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性3、加样量不一致样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴出现白板，阳性对照不显色显色液变质更换新的显色液洗涤液配制有误请按说明书所示稀释倍数配制未加酶结合物而认为已加入注意不要漏加终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用每次加液前均应看清标签[详细]

  2018-09-02 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA实验中常见问题及解决方法

  ELISA中常见问题及解决方法ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我公司将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法1选择试剂选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。2加样可能原因：a.血清或血浆标本分离不好即进行加样；b.手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）；c.加完标本再加酶试剂时酶液溅出孔外。解决办法：a.标本为血清：**将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10T，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。b.加样后及时放入孵箱。c.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。d.如果采用AT或其他全自动加样，**选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。e.标本较多时，请分批操作。3孵育可能原因：a.孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；b.孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。解决办法：a.贴封片或加盖；b.按说明步骤严格控制操作时间。4洗板可能原因：a.采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。b.采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。c.反应板过多造成洗板等待时间长。解决办法：a.保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后**在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干；b.合理安排，或多用几台洗板机。5显色可能原因：a.显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；b.加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法：a.显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；b.加样时保持显色剂不外流；c.A、B液应避免接触金属器械。6终止可能原因：如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。7读板如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸;尽可能实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时作好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪，这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。[详细]

  2018-09-02 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 色谱常见问题

  色谱常见问题[详细]

  2011-12-16 00:00

  选购指南

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 箱式电炉常见问题

  箱式电炉常见问题[详细]

  2014-08-28 00:00

  课件

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 马弗炉常见问题

  马弗炉常见问题[详细]

  2024-09-15 09:21

  专利

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 电子天平常见问题

  电子天平常见问题[详细]

  2024-09-28 01:07

  标准

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 小鼠ELISA试剂盒在实验中常见问题汇总

  小鼠ELISA试剂盒在实验中常见问题汇总点击次数：21发布时间：2013-8-28检测用所有试剂全部都为进口试剂，适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本，灵敏度极高。我们专业的ELISA技术服务，保证对所售任何产品一概负责到底，每一份实验结果都真实可靠!　　小鼠ELISA试剂盒注意事项：　　1）在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。　　2）我们提倡新鲜标本尽早检测，对收集后及时进行检测。1-3天左右检测的样本可储存在4℃备用。如有特殊原因需要周期性收集标本，请将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条液体类标本：　　大鼠ELISA试剂盒包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。　　1）血清：　　室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。　　2）血浆：　　应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。　　3）尿液：　　用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。　　4）细胞培养上清：　　A、检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。　　B、检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。　　5）组织标本：　　小鼠ELISA试剂盒切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。[详细]

  2018-09-19 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA标准操作及技术服务的常见问题分析

  ELISA标准操作及技术服务的常见问题分析[详细]

  2024-09-28 12:26

  选购指南

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• pH计常见问题

  pH计常见问题[详细]

  2015-01-22 00:00

  实验操作

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 快速水质分析仪常见问题

  快速水质分析仪常见问题[详细]

  2010-06-29 00:00

  安装说明

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• AT自动电位滴定仪常见问题

  AT自动电位滴定仪常见问题[详细]

  2012-05-28 00:00

  报价单

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• CRYSTAF-TREF 的常见问题

  CRYSTAF-TREF 的常见问题[详细]

  2011-09-22 00:00

  选购指南

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• TREF常见问题分析

  TREF常见问题分析[详细]

  2011-09-22 00:00

  安装说明

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• CRYSTAF 常见问题分析

  CRYSTAF 常见问题分析[详细]

  2011-09-22 00:00

  课件

  |

  • 
  • 
  • 
  •